大花六道木体细胞胚诱导的研究

作     者：孙倩婷 

作者单位：南京林业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：季孔庶

授予年度：2010年

学科分类：090706[农学-园林植物与观赏园艺] 0907[农学-林学] 09[农学] 

主      题：大花六道木(Abelia×grandiflora) 体细胞胚诱导 细胞形态学 生理特征 

摘      要：本论文首次以大花六道木(Abelia×grandiflora)幼嫩叶片和茎段为外植体,对其体细胞胚诱导过程中的相关问题进行了研究,并对诱导过程进行了细胞学观察和生理指标的测定,为大花六道木高效体胚发生系统的建立和相关机理的探索奠定了基础。主要试验结果如下: 1.比较了三种大花六道木的愈伤诱导率。其中‘法兰西’较‘爱德华’和‘矮美人’更容易诱导愈伤组织,但三者的差异不显著。细胞学研究结果也表明,三个品种的胚性细胞结构有很大的相似性。 2.幼嫩叶片是大花六道木体胚诱导的最佳外植体。 3.大花六道木叶片和茎段愈伤组织诱导的最佳培养基分别为MS+3.5mg/L 2,4-D+0.2 mg/L NAA+1.0mg/L KT+0.05mg/L TDZ和MS+1.5mg/L 2,4-D+0.5mg/L NAA+0.5mg/L KT+0.1mg/L TDZ;叶片和茎段胚性愈伤组织增殖的最佳培养基分别为MS+1.0mg/L 6-BA+1.0mg/L KT+0.1mg/L NAA和MS+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L KT+0.1mg/L NAA,均附加100mg/L肌醇,200mg/L水解酪蛋白和15g/L蔗糖,pH值5.8,25℃下暗培养各30d。 4.2,4-D在诱导愈伤阶段是很有效的生长素,NAA诱导愈伤的效果不及2,4-D。细胞分裂素在愈伤诱导时作用不明显,但在增殖和体胚诱导中不可或缺,6-BA浓度应控制在1.0mg/L,可避免培养物褐化,KT和TDZ对愈伤诱导和增殖的影响不明显。ABA可以抑制畸形胚的生长,大花六道木适宜的ABA浓度范围为0.5～1.0 mg/L。 5.胚性愈伤组织转入无激素的液体MS培养基悬浮培养后可以得到大量的根状物,转入MS+1.0mg/L 6-BA+30g/L蔗糖的液体培养基悬浮培养后能够诱导出无根端的芽状物,且无褐化现象。 6.大花六道木不同阶段培养物的切片观察表明,胚性愈伤的细胞体积小、排列紧密、细胞核大,非胚性愈伤的细胞体积较大、排列疏松、细胞核小。体胚发生大多是由内起源的胚性细胞开始,经历了鸟巢状多细胞原胚、球形胚,心形胚和鱼雷胚的发育阶段。 7.大花六道木球形胚时期的SOD活性和可溶性蛋白质含量均达到了顶峰,为体胚分化和进一步发育提供了前提和物质基础。可溶性糖含量的变化与体胚发育时期的转折密切相关。胚性愈伤和心形胚时期的可溶性糖的累积为体胚的分化和发育提供了能量保证。