杂交构树体细胞胚诱导及人工种子的制备

作     者：李毅 

作者单位：大连工业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张宗申

授予年度：2015年

学科分类：0907[农学-林学] 08[工学] 0829[工学-林业工程] 09[农学] 

主      题：构树 体细胞胚诱导 细胞悬浮培养体系 人工种子 

摘      要：构树是桑科构树属落叶乔木,它是优质的造纸原料和降糖的药用植物,还可以用于饲料以及园艺绿化等方面。目前,构树的主要繁殖方式是用种子繁殖或扦插繁殖。由于构树种子的种壳较坚硬吸水困难,不易萌发;扦插方式占用土地、效率低、成本高以及受季节限制等。因此,通过植物器官组织诱导愈伤中获得的体细胞胚规模化培养,然后获得人工种子,对于规模化繁育构树种苗具有重要的意义。本研究的材料是通过航天育种途径获得的优质杂交构树树种,通过愈伤组织、胚性细胞、体细胞胚诱导及悬浮培养等,获得高活性的体细胞胚,并制作构树人工种子。主要研究了激素等因素对体细胞胚诱导的影响,主要结果如下:1.构树幼嫩叶片在只含2,4-D 0.5mg/L的MS培养基中7d左右出现愈伤且诱导率最高,诱导率可达93%。构树幼嫩叶片在同时含有2,4-D和6-BA两种激素的MS培养基中很难出现愈伤,只有叶片面积的增大,而且8d左右时褐化作用明显;2.愈伤组织继代时使用2,4-D 0.2mg/L的MS培养基,愈伤生长旺盛,松散,淡黄色。在光照下培养12h/d,可以有效避免愈伤木质化的产生。低于这个浓度很容易出现根的分化,伴有褐化现象;3.建立悬浮细胞培养体系,测定出在使用6-BA 1.5mg/L,N AA 0.5mg/L的MS液体培养基时,诱导率最高,生长势最好;4.杂交构树愈伤组织在激素为6-BA 2.0mg/L,NAA 1.0mg/L的MS培养基中,体细胞胚的胚胎发生效率最高,可达到17.9%;5.在海藻酸钠中加入MS培养基和2.0mg/L 6-BA和20g/L蔗糖制备成的人工种子萌发率最高,可达33.3%。