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基于CRISPR/Cas12a的叶酸代谢位点MTHFR基因C677T多态性检测方法的建立

生殖医学杂志 2024年第6期33卷 785-791页

作者：田石安莉莎马瑶金孝华马旭张璐北京市海淀区妇幼保健院北京100080 国家卫生健康委科学技术研究所北京100081 国家人类遗传资源中心北京100024

目的开发一种基于CRISPR/Cas12a技术的叶酸代谢位点c.677(MTHFR C677T)的高效检测方法,以实现对C677T多态性的快速、准确分析。方法采用重组酶聚合酶扩增(RPA)结合CRISPR/Cas12a建立单管检测反应体系,建立人MTHFR基因C677T基因分型策略... 详细信息

目的开发一种基于CRISPR/Cas12a技术的叶酸代谢位点c.677(MTHFR C677T)的高效检测方法,以实现对C677T多态性的快速、准确分析。方法采用重组酶聚合酶扩增(RPA)结合CRISPR/Cas12a建立单管检测反应体系,建立人MTHFR基因C677T基因分型策略;测试200例孕妇人群样本MTHFR基因C677T多态性,并与常规PCR产物测序结果进行一致率比较。结果基于CRISPR/Cas12a检测人MTHFR基因C677T多态性的检测方法结果准确、特异性好,与PCR产物测序结果具有高度一致性。结论建立的基于CRISPR/Cas12a检测技术的人MTHFR C677T基因分型方法简单、快捷、精准,为叶酸代谢位点MTHFR C677T基因型检测提供了新的途径,具有潜在的临床应用前景。

关键词：人亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性 CRISPR/Cas12a 恒温扩增

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TaqMan-ARMS法快速检测人MTHFR基因多态性

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临床检验杂志 2018年第5期36卷 324-329页

作者：程力维刘绪何龙华中科技大学同济医学院附属普爱医院检验科武汉430033 武汉大学基础医学院武汉430072

目的利用PCR引物的错配扩增和荧光定量PCR技术,建立一种针对人亚甲基四氢叶酸还原酶(methylene tetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因多态性的快速荧光扩增检测方法。方法收集已经测序验证的MTHFR基因C677T,A1 298C位点的野生型、杂... 详细信息

目的利用PCR引物的错配扩增和荧光定量PCR技术,建立一种针对人亚甲基四氢叶酸还原酶(methylene tetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因多态性的快速荧光扩增检测方法。方法收集已经测序验证的MTHFR基因C677T,A1 298C位点的野生型、杂合型和突变型样本,并据此构建野生型和突变型质粒;根据野生型MTHFR基因序列设计ARMS(扩增阻碍突变系统)引物和Taq Man探针并筛选出最合适的突变检测体系,与已知突变信息的214例样本进行比较,以验证该检测体系的可行性。结果建立的Taq Man-ARMS法性能评估优异,样本的最低检测限为10 copies/μL,样本间交叉检测无核酸扩增,体系检测阴性对照无核酸扩增;重复性及实验室内精密度结果良好,MTHFR-667位点和1 298位点重复性检测的标准差介于0.11~0.44,纯合和杂合样本的变异系数(CV)均基因多态性方法简单,快捷,精确,适合用于临床样本快速诊断。

关键词：人亚甲基四氢叶酸还原酶基因 TaqMan-ARMS法基因多态性

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人类MTHFR基因多态性快速检测方法

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生物化工 2018年第5期4卷 22-26页

作者：吴凯魏赵延李思慧林伟强江苏正大天创生物工程有限公司江苏泰州225300

利用PCR引物的错配扩增和荧光定量PCR技术,建立一种针对人亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylene Tetrahydrofolate Reductase,MTHFR)基因多态性的快速荧光扩增检测方法。根据MTHFR基因序列设计ARMS(扩增阻碍突变系统)引物和TaqMan探针与已知... 详细信息

利用PCR引物的错配扩增和荧光定量PCR技术,建立一种针对人亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylene Tetrahydrofolate Reductase,MTHFR)基因多态性的快速荧光扩增检测方法。根据MTHFR基因序列设计ARMS(扩增阻碍突变系统)引物和TaqMan探针与已知突变信息的50例样本进行比较,以验证该检测体系的可行性。本研究建立的快速荧光扩增检测方法性能评估优异,样本的最低检测限为8.3×10^(-3) ng/μL,样本间和阴性样本无交叉,重复性结果良好。50例临床样本用该法检测结果与测序法的一致性为100%。因此基于TaqMan-ARMS法检测MTHFR的基因多态性方法简单、快捷、精确,适合用于临床样本快速诊断。

关键词：人亚甲基四氢叶酸还原酶基因基因多态性扩增阻碍突变系统

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