基于CRISPR/Cas12a的叶酸代谢位点MTHFR基因C677T多态性检测方法的建立

作     者：田石 安莉莎 马瑶 金孝华 马旭 张璐 TIAN Shi;AN Li-sha;MA Yao;JIN Xiao-hua;MA Xu;ZHANG Lu

作者机构：北京市海淀区妇幼保健院北京100080 国家卫生健康委科学技术研究所北京100081 国家人类遗传资源中心北京100024 

出 版 物：《生殖医学杂志》 (Journal of Reproductive Medicine)

年 卷 期：2024年第33卷第6期

页      面：785-791页

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82200261) 海淀区属卫生健康系统高层次人才发展计划项目(2022HDXD006) 

主　　题：人亚甲基四氢叶酸还原酶基因 多态性 CRISPR/Cas12a 恒温扩增 

摘      要：目的开发一种基于CRISPR/Cas12a技术的叶酸代谢位点c.677(MTHFR C677T)的高效检测方法,以实现对C677T多态性的快速、准确分析。方法采用重组酶聚合酶扩增(RPA)结合CRISPR/Cas12a建立单管检测反应体系,建立人MTHFR基因C677T基因分型策略;测试200例孕妇人群样本MTHFR基因C677T多态性,并与常规PCR产物测序结果进行一致率比较。结果基于CRISPR/Cas12a检测人MTHFR基因C677T多态性的检测方法结果准确、特异性好,与PCR产物测序结果具有高度一致性。结论建立的基于CRISPR/Cas12a检测技术的人MTHFR C677T基因分型方法简单、快捷、精准,为叶酸代谢位点MTHFR C677T基因型检测提供了新的途径,具有潜在的临床应用前景。