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不动杆菌生物合成新型羧酸酯酶的摇瓶培养条件优化

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高校化学工程学报 2005年第4期19卷 523-526页

作者：赵玉巧许建和华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

对一株产(R)-烯丙醇酮乙酸酯对映选择性水解酶的不动杆菌(***0789)摇瓶发酵产酶条件进行了优化。培养基最佳组成为(g?L?1):蔗糖8.5,吐温-801.5,黄豆饼粉20.0,(NH4)2SO42.0,K2HPO42.0,NaCl1.0,MgSO4·7H2O0.2;优化后酯酶产量提高了8.3倍(由46增至427U?L?1)。添加吐温-80可以诱导酶的合成。摇瓶培养最佳条件为:装液量15%,发酵起始pH8.0,接种量6%,发酵温度30℃。考察了细胞生长及产酶的时间进程,最佳培养时间为30h.

关键词： (R)-烯丙醇酮乙酸酯羧酸酯酶不动杆菌产酶条件

不动杆菌静息细胞催化拆分外消旋环戊酮醇乙酸酯反应条件的优化

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催化学报 2003年第8期24卷 613-618页

作者：赵玉巧许建和华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室淮海工学院食品工程系江苏连云港222005

考察了反应条件对不动杆菌Acinetobactersp .YQ2 31催化外消旋环戊酮醇乙酸酯对映选择性水解的反应速度和对映选择性的影响 .确定的最佳酶反应条件为 pH 8 0 ,温度 5 0℃ .不同乳化剂对对映选择性的影响不同 ,以壬基酚聚氧乙烯醚的效果... 详细信息

考察了反应条件对不动杆菌Acinetobactersp .YQ2 31催化外消旋环戊酮醇乙酸酯对映选择性水解的反应速度和对映选择性的影响 .确定的最佳酶反应条件为 pH 8 0 ,温度 5 0℃ .不同乳化剂对对映选择性的影响不同 ,以壬基酚聚氧乙烯醚的效果最好 ,当其加入量为 15 g/L 时 ,反应的对映选择性最高 .产物环戊酮醇对酶活性有显著的抑制作用 .细胞中的酯酶优先水解 (R) 环戊酮醇乙酸酯 ,生成 (R) 环戊酮醇 ,在底物浓度为 2 5 0mmol/L时 ,对映体比率 (E值 )可达 5 0 .

关键词：环戊酮醇乙酸酯对映选择性水解环戊酮醇酶促拆分微生物酯酶不动杆菌

不动杆菌磷脂酶D基因的表达、生物信息学及底物选择性分析

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食品工业科技 2024年第13期45卷 132-139页

作者：吴思怡吴林秀王凡卢梦瑶童欣李敏付新宇胡荣康安徽师范大学生命科学学院安徽芜湖241000 皖南医学院第二附属医院安徽芜湖241000

微生物来源磷脂酶D(Phospholipase D,PLD)因其较高的催化活性和广泛的底物选择谱而成为磷脂合成应用中的热点。本研究以Acinetobacter ***-2来源的PLD(ADPLD)为研究对象,首先通过生物信息学分析蛋白序列特征,然后构建重组质粒并在大肠... 详细信息

微生物来源磷脂酶D(Phospholipase D,PLD)因其较高的催化活性和广泛的底物选择谱而成为磷脂合成应用中的热点。本研究以Acinetobacter ***-2来源的PLD(ADPLD)为研究对象,首先通过生物信息学分析蛋白序列特征,然后构建重组质粒并在大肠杆菌中实现异源表达,进一步纯化酶蛋白并分析ADPLD对不同酰基链长磷脂酰胆碱(PC)的底物选择性,最后通过分子对接和分子模拟探究ADPLD的底物识别机制。通过对ADPLD和其他微生物来源的PLD多序列比对和进化树分析表明,ADPLD与链霉菌来源PLD序列相似度低于30%,且只有一个保守的HKD基序,这表明ADPLD的催化机制可能与传统认知中需要两个HKD基序完成PLD催化过程的反应机制有所不同。ADPLD主要以可溶性蛋白形式表达,仅通过Ni^(2+)亲和层析在50 mmol/L的低浓度咪唑下便能纯化出较为均一的蛋白,以大豆PC为底物时的比活性约为4.09 U/mg。ADPLD对中和短链PC(C6~C14)的活性相对较高,其中ADPLD对8:0/8:0-PC的比活性高于其它酰基链长的PC底物,为13.2 U/mg。当PC的酰基链长从C14增加至C16时,ADPLD对PC的活性明显降低。分子模拟和分子对接结果显示ADPLD的氨基酸残基Thr205、Pro209、Phe293、Ala324、Lys329和Phe453能够分别与PC形成疏水相互作用。Arg383和Gly326能够与PC形成氢键,其中Arg383(N)、Gly326(N)与PC(P)之间的距离<3Å。这些结果表明,ADPLD能够与磷脂分子形成一个稳定的酶与底物的中间体。研究结果为ADPLD的分子改造和进一步工业应用奠定了基础。

关键词：不动杆菌磷脂酶D 酶学性质蛋白表达磷脂

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不动杆菌来源L-天冬氨酸-β-脱羧酶的表达与酶学性质分析

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食品与发酵工业 2020年第12期46卷 8-13页

作者：于佳印赵庭刘中美周丽周哲敏江南大学生物工程学院江苏无锡214122

L-天冬氨酸-β-脱羧酶(L-aspartate-β-decarboxylase,Asd)催化L-天冬氨酸脱羧生成L-丙氨酸,该研究对Acinetobacter radioresistens来源的Asd酶进行酶学性质解析,为工业生产L-丙氨酸提供参考。构建表达质粒pET28a-ArAsd,转化大肠杆菌E. coliBL21(DE3)实现ArAsd基因的异源表达。利用亲和层析纯化获得携带His标签的纯酶后进行酶学性质研究,并考察重组菌底物、产物耐受的能力。结果表明,重组酶比酶活力为753 U/mg,其最适催化温度为55℃,最适反应pH为4. 5,在40~45℃、pH 6. 0~7. 0条件下较稳定,45℃处理3 h酶活力剩余70%左右,pH 7. 0处理12 h酶活力剩余90%左右。产物L-丙氨酸浓度超过500 mmol/L时重组菌细胞酶活力有明显降低,底物L-天冬氨酸对重组菌细胞催化活性有促进作用。该研究首次在E. coli中异源表达Acinetobacter radioresistens来源Asd酶,其比酶活力高于目前已有报道的Asd酶,具有一定的工业应用潜力。

关键词： L-天冬氨酸-β-脱羧酶酶学性质解析不动杆菌 L-丙氨酸

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不动杆菌K7对酚酸类化合物的降解效能

南京农业大学学报 2019年第4期42卷 689-696页

作者：李敏屈欢刘建利代秀秀司海丽张琇杨国平北方民族大学生物科学与工程学院宁夏银川750021 北方民族大学宁夏特殊生境微生物资源开发与利用重点实验室宁夏银川750021

[目的]从宁夏中卫硒砂瓜种植区多年连作土壤中分离获得1株高效降解酚酸类物质的菌株,对其进行分类鉴定,并全面评估其对11种酚酸类物质的降解效能,以期为该菌在酚酸类自毒物质降解领域中的应用提供理论依据。[方法]通过形态特征和16SrRN... 详细信息

[目的]从宁夏中卫硒砂瓜种植区多年连作土壤中分离获得1株高效降解酚酸类物质的菌株,对其进行分类鉴定,并全面评估其对11种酚酸类物质的降解效能,以期为该菌在酚酸类自毒物质降解领域中的应用提供理论依据。[方法]通过形态特征和16SrRNA基因序列分析进行菌株鉴定;采用液相色谱串联二极管阵列检测器研究菌株对多种酚酸物质的降解特性。[结果]经生理生化及分子生物学鉴定,该菌株为不动杆菌属(Acinetobactersp.),命名为K7。该菌株对4-羟基苯甲酸、香豆酸、香草酸、苯甲酸、阿魏酸和咖啡酸具有良好的降解效果,对丁香酸、香草醛、肉桂酸和没食子酸的降解效能较弱,不能降解水杨酸。以咖啡酸为代表,研究不同条件对菌株K7降解效能的影响,发现在中性偏碱(pH7~8)、较高温度(30~40℃)、咖啡酸初始浓度小于100mg·L-1时,菌株K7对咖啡酸具有高效降解能力。[结论]不动杆菌K7对多种酚酸类化合物表现出良好的降解效能。

关键词：酚酸不动杆菌生物降解效能

不动杆菌属中aidE基因编码高丝氨酸内酯酶

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生物工程学报 2017年第9期33卷 1625-1639页

作者：刘春妍郭松艾力.吐热克张俊威张力群中国农业大学植物病理系北京100193

群体感应(Quorum sensing,QS)是细菌在进化过程中形成的依赖于群体密度的细菌间交流方式。许多革兰氏阴性细菌以N-酰基高丝氨酸内酯(AHL)为信号分子,感应自身群体密度并调控致病基因表达。因此,淬灭AHLs信号分子可防治此类细菌引起的植... 详细信息

群体感应(Quorum sensing,QS)是细菌在进化过程中形成的依赖于群体密度的细菌间交流方式。许多革兰氏阴性细菌以N-酰基高丝氨酸内酯(AHL)为信号分子,感应自身群体密度并调控致病基因表达。因此,淬灭AHLs信号分子可防治此类细菌引起的植物病害。本实验室前期已筛选得到了一株具有AHLs信号降解能力的不动杆菌菌株Acinetobacter sp.77,本研究通过基因组文库筛选,自菌株77中克隆得到具有AHLs降解活性的基因aidE。该基因编码268个氨基酸。序列一致性比较发现aidE的氨基酸序列与吉伦伯不动杆菌Acinetobacter gyllenbergii CIP110306中β-内酰胺酶一致性高达95%,但与已知的AHLs降解酶序列一致性较低,最高为缓黄分支杆菌Mycobacterium lentiflavum中AHL内酯酶Att M/Aii B家族蛋白(CQD23908.1),一致性仅为33%。通过高压液相色谱(HPLC)分析Aid E蛋白处理N-己酰基高丝氨酸内酯(C6-HSL)的反应产物,证明aidE为AHL内酯酶。序列比对研究发现,aidE基因在不动杆菌属中并不保守,其在菌株77基因组中的上下游的基因排列存在菌株水平的特异性,且aidE基因下游存在疑似IS插入序列,上述证据表明aidE基因有可能是通过水平转移进入Acinetobacter sp.77基因组中,或其在基因组中的位置发生过重排。表达aidE的软腐果胶杆菌Z3-3中完全检测不到AHLs信号产生,且致病力明显降低。综上所述,aidE为新发现的AHL内酯酶。在防治依赖QS系统表达致病性的细菌病害中具有应用潜力。

关键词：群体感应酰基高丝氨酸内酯不动杆菌 aidE

不动杆菌(Acinetobacter sp.)51-2降解乙腈的研究

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微生物学报 1990年第6期30卷 471-474页

作者：谢树华杨惠芳中国科学院微生物研究所

腈类化台物对人、畜及微生物等均有毒性,但可驯化某些微生物赋予分解这些物抩的能力使之降解。1980年,Jalleges 对腈的生物转化作了综述。70年代,Firmin 等报道了假单咆菌(Pse-udomonas)降解乙腈的代谢途径,随后

关键词：不动杆菌降解作用乙腈

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不动杆菌生物乳化剂活性成分研究

应用与环境生物学报 2008年第4期14卷 553-557页

作者：李晴邵宗泽国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室福建厦门361005 厦门大学生命科学学院福建厦门361005

通过乳化活性分析、化学成分分析和相关基因的分析,对3株海洋来源的不动杆菌分离株和2种不动杆菌模式菌的生物乳化剂产生能力和活性成分进行了分析,结果表明,这些菌都能产生生物乳化剂.通过PCR检测,其中只有深海菌株wp02421编码与乳化剂... 详细信息

通过乳化活性分析、化学成分分析和相关基因的分析,对3株海洋来源的不动杆菌分离株和2种不动杆菌模式菌的生物乳化剂产生能力和活性成分进行了分析,结果表明,这些菌都能产生生物乳化剂.通过PCR检测,其中只有深海菌株wp02421编码与乳化剂Emulsan产生密切相关的酯酶基因.气质联用仪证明该菌所产的乳化剂含有脂肪酸组分,主要是正十六烷酸和正十八烷酸,表明菌株wp02421产生的乳化剂与Emulsan类似,糖脂是主要活性成分之一.此外,通过PCR检测,证明了5株不动杆菌全部编码外膜蛋白A基因(ompA).它们的氨基酸序列与Acinetobacter radioresistens KA53的乳化剂Alasan中的主要活性蛋白AlnA的同源性为71.26%～80.23%.以上结果表明,5株菌的生物乳化剂中都可能含有AlnA的乳化蛋白,而菌株wp02421同时还产类似Emulsan的糖脂.

关键词：不动杆菌生物乳化剂酯酶外膜蛋白A Alasan

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不动杆菌致呼吸机相关肺炎的临床特点

中国医学科学院学报 2004年第3期26卷 285-288页

作者：陈吉泉罗文侗第二军医大学长征医院呼吸内科上海200003

目的探讨不动杆菌所致呼吸机相关肺炎穴VAP雪的临床特点。方法采集45例由不动杆菌所致呼吸机相关肺炎患者下呼吸道及呼吸机通气环回路标本,对分离菌株以纸片法行药物敏感试验。结果45例患者中年龄>60岁者31例;平均通气穴17±11雪d,5d后... 详细信息

目的探讨不动杆菌所致呼吸机相关肺炎穴VAP雪的临床特点。方法采集45例由不动杆菌所致呼吸机相关肺炎患者下呼吸道及呼吸机通气环回路标本,对分离菌株以纸片法行药物敏感试验。结果45例患者中年龄>60岁者31例;平均通气穴17±11雪d,5d后发生VAP者占73.3%。全部患者均有基础疾病,其中最常见的为呼吸系统疾病穴37.8%雪、神经系统疾病穴22.2%雪和外伤穴22.2%雪。28.9%为混合感染。临床表现为发热、呼吸道脓性分泌物、肺部实变。X线主要以双下肺野斑片状阴影为主,病死率37.8%。分离菌株耐药率高,存在多重耐药,较敏感抗生素为多粘菌素、亚胺配南、米诺环素、氧氟沙星、阿米卡星等。结论不动杆菌所致VAP患者基础疾病多,临床表现缺乏特异性,病情严重,病死率高,细菌耐药性广,临床应早期获得病原学诊断、选用敏感抗生素、加强呼吸环路的消毒。

关键词：不动杆菌呼吸机相关肺炎