检索结果-南通市图书馆

牛乳铁蛋白肽基因LfcinB的合成及真核表达载体的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2009年第5期36卷 95-98页

作者：孙东波林云成郭东华王建发张敏林玉才武瑞黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

根据APD抗菌肽数据库报道的牛乳铁蛋白肽LfcinB氨基酸序列,合成编码LfcinB基因的2条互补的寡核苷酸链,退火后在5′端和3′端分别形成含有BamHI和XhoI位点粘性末端的双链DNA。真核表达载体pcDNA3.1(+)经BamHI和XhoI限制性内切酶双酶切处... 详细信息

根据APD抗菌肽数据库报道的牛乳铁蛋白肽LfcinB氨基酸序列,合成编码LfcinB基因的2条互补的寡核苷酸链,退火后在5′端和3′端分别形成含有BamHI和XhoI位点粘性末端的双链DNA。真核表达载体pcDNA3.1(+)经BamHI和XhoI限制性内切酶双酶切处理后与合成的LfcinB基因进行连接,连接产物转化***5α感受态细胞,提取质粒DNA进行测序。测序结果显示,牛乳铁蛋白肽LfcinB基因成功克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,为进一步表达和抗菌活性研究奠定物质基础。

关键词：牛乳铁蛋白牛乳铁蛋白肽真核表达载体

牛乳铁蛋白的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国乳品工业 2003年第4期31卷 44-46页

作者：林成招张彦明邹思湘陈伟华南京农业大学动物医学院农业部动物生理生化重点开放实验室

用牛乳铁蛋白(Bovine Lactoferrin,BLf)、纯品免疫新西兰白兔制得兔抗BLf的多克隆抗体,琼扩效价最高为1:64。经ELISA方法检测,该抗体与牛乳中的主要蛋白质:α-乳清蛋白、β-乳球蛋白、血清白蛋白以及酪蛋白之间不存在免疫交叉性,说明抗... 详细信息

用牛乳铁蛋白(Bovine Lactoferrin,BLf)、纯品免疫新西兰白兔制得兔抗BLf的多克隆抗体,琼扩效价最高为1:64。经ELISA方法检测,该抗体与牛乳中的主要蛋白质:α-乳清蛋白、β-乳球蛋白、血清白蛋白以及酪蛋白之间不存在免疫交叉性,说明抗体特异性良好。以BLf纯品为包被抗原,自制抗体为一抗,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG为二抗,邻苯二胺(OPD)为底物,建立了BLf的竞争抑制性ELISA方法。包被抗原及抗体的浓度均由方阵稀释实验确定。所建立的ELISA方法孔间误差1.6％,板间误差4.3％,灵敏度25μg/L,检测范围25～800μg/L。标准曲线线性方程(Logit)Y=-1.488 lg C+3.811 6,相关系数R=0.990。

关键词：牛乳铁蛋白酶联免疫吸咐分析法检测多克隆抗体食品

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

牛乳铁蛋白直接竞争ELISA检测法的建立

安徽农业科学 2008年第18期36卷 7650-7652,7761页

作者：冯挺财邵谱胡珩杨正涛张乃生吉林大学畜牧兽医学院动物营养与中毒病研究室吉林长春130062

[目的]建立一种检测牛乳铁蛋白（LF）含量的竞争ELISA检测方法。[方法]制备鼠抗牛LF单克隆抗体，采用直接竞争ELISA测定酶标记物效价，建立牛LF的直接竞争ELISA检测方法。[结果]纯化后，制备的鼠抗牛LF单抗效价达1：1280000，且鉴定为I... 详细信息

[目的]建立一种检测牛乳铁蛋白（LF）含量的竞争ELISA检测方法。[方法]制备鼠抗牛LF单克隆抗体，采用直接竞争ELISA测定酶标记物效价，建立牛LF的直接竞争ELISA检测方法。[结果]纯化后，制备的鼠抗牛LF单抗效价达1：1280000，且鉴定为IgGl。该单抗对牛乳铁蛋白具有很强的特异性。制备酶标单抗的效价为1：640000。抗原包被物和酶标单抗的最适工作浓度分别为1．0μg／ml和1：40000。抗原用碳酸盐缓冲液（pH值为9．6）包被先在4℃过夜、再37℃放置2h的效果最好。采用2％牛血清白蛋白作为封闭剂的效果最好。在31．25．1000 ng／ml浓度范围内，牛乳铁蛋白的logit（B／B0）与牛乳铁蛋白浓度的对数值呈显著的线性关系，其回归方程为γ=-1．8991x＋5．0433（R^2=0．9873）。[结论]该研究为研制用于奶牛乳腺炎诊断的牛LF检测试剂盒奠定基础。

关键词：牛乳铁蛋白 cELISA 定量检测

牛乳铁蛋白对脂多糖体外诱导大鼠空肠上皮细胞炎症的抑制作用及机制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华实用儿科临床杂志 2017年第7期32卷 539-542页

作者：孔祥永郭婧杨梅王瑞娟封志纯陆军总医院附属八一儿童医院极早产儿监护科 100700 南方医科大学陆军总医院临床医学院 100700 陆军总医院263临床部儿科 101149

目的探讨牛乳铁蛋白（bLF）在体外对大鼠空肠上皮细胞株（IEC-6）细胞增殖和对脂多糖（LPS）诱导的细胞炎性反应的影响及机制。方法体外培养IEC-6细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度bLF时IEC-6细胞的活性，5-溴脱氧尿苷（Brdu... 详细信息

目的探讨牛乳铁蛋白（bLF）在体外对大鼠空肠上皮细胞株（IEC-6）细胞增殖和对脂多糖（LPS）诱导的细胞炎性反应的影响及机制。方法体外培养IEC-6细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度bLF时IEC-6细胞的活性，5-溴脱氧尿苷（Brdu）标记检测bLF对细胞增殖能力的影响，荧光定量PCR及酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA水平，Western blot检测bLF对LPS诱导的炎症信号通路中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及核因子-κB（NF-κB）水平。结果bLF在体外可促进IEC-6细胞活性和增生能力，并呈浓度依赖效应（F＝3.825、5.861，均P〈0.05），当处理质量浓度为100 mg/L时，IEC-6细胞活性和增殖能力逐渐增强（q＝5.240、3.765，均P〈0.05）。应用100 mg/L质量浓度的bLF预处理IEC-6细胞可明显降低IL-1β、IL-6及TNF-α 的mRNA表达水平（q＝14.28、10.12、16.45，均P〈0.001），并降低IL-6和TNF-α蛋白的表达（q＝15.06、6.74，均P〈0.001）。与单独LPS组相比，应用100 mg/L质量浓度的bLF预处理IEC-6细胞可使MAPK/NF-κB通路的激活水平下降（q＝12.96、18.54，均P〈0.001）。结论bLF在体外可促进大鼠IEC-6细胞活性及增殖能力，并通过抑制MAPK/NF-κB信号通路起到抑制LPS诱导的炎性反应的作用。

关键词：牛乳铁蛋白空肠上皮细胞增殖炎症

基因拷贝数对重组毕赤酵母的牛乳铁蛋白功能片段表达及细胞存活率的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

食品与发酵工业 2021年第4期47卷 1-6页

作者：钱晓芬吴涛赵理想孙杰汪钊魏春浙江工业大学生物工程学院浙江杭州310014

为了提高牛乳铁蛋白功能片段(bovine lactoferrin functional fragment,BlfFf)产量,研究了基因拷贝数对重组毕赤酵母蛋白表达及酵母存活率的影响。将未折叠蛋白响应(unfolded protein response,UPR)激活因子基因HAC1、信号肽切割酶基因K... 详细信息

为了提高牛乳铁蛋白功能片段(bovine lactoferrin functional fragment,BlfFf)产量,研究了基因拷贝数对重组毕赤酵母蛋白表达及酵母存活率的影响。将未折叠蛋白响应(unfolded protein response,UPR)激活因子基因HAC1、信号肽切割酶基因Kex2导入重组毕赤酵母BlfFfG01,并以核糖体rDNA非转录基因间隔区同源整合的方法结合PTVA(posttransformational vector amplification)法扩增重组菌株的基因拷贝数。利用SDS-PAGE、Western Blot、ELISA及流式细胞术分析多拷贝重组菌株发酵产物。分析表明,重组蛋白产量随着BlfFf基因拷贝数的增加而增加,但并非线性递增。HAC1拷贝数为3的BlfFfG12菌株产量相比单拷贝的BlfFfG10提高了150%,但更高的HAC1基因拷贝数降低了重组蛋白产量。流式细胞术分析显示,发酵末细胞存活率随着重组菌株中BlfFf基因拷贝数增加而下降,而HAC1基因拷贝数增加可一定程度上提高细胞存活率。摇瓶中BlfFf产量最高的BlfFfG12菌株(11拷贝BlfFf、3拷贝HAC1),在5 L罐进行高密度发酵,表达量为133.4 mg/L。BlfFf与HAC1基因拷贝数对重组蛋白产量及细胞存活率影响显著,优化其基因拷贝数可有效增加重组蛋白产量。

关键词：牛乳铁蛋白毕赤酵母 HAC1 基因拷贝数流式细胞术

高效液相色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱分离鉴定牛乳铁蛋白素

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

色谱 2010年第2期28卷 180-184页

作者：安美忱刘宁东北农业大学乳品科学教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150030

建立了高效液相色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)分离鉴定牛乳铁蛋白素(bovine lactoferricin,LfcinB)的方法。采用胃蛋白酶酶解牛乳铁蛋白,酶解液离心后取上清液,经过离子交换色谱、反相液相色谱、透析等... 详细信息

建立了高效液相色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)分离鉴定牛乳铁蛋白素(bovine lactoferricin,LfcinB)的方法。采用胃蛋白酶酶解牛乳铁蛋白,酶解液离心后取上清液,经过离子交换色谱、反相液相色谱、透析等技术分离,对分离得到的目标产物进行抗菌活性分析、蛋白含量测定和MALDI-TOF/TOF MS鉴定。分离得到高活性的LfcinB,其相对分子质量为3124.89,蛋白含量为18.20μg/mL。本方法具有精度高、分析速度快和分辨能力强等优点,是其他传统的分析鉴定LfcinB方法所无法比拟的,为进一步研究LfcinB奠定了基础。

关键词：高效液相色谱基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱牛乳铁蛋白素牛乳铁蛋白

重组牛乳铁蛋白功能片段在毕赤酵母中的表达及高密度发酵

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

食品与发酵工业 2019年第11期45卷 29-33页

作者：魏春任郑吴涛钱晓芬孙杰汪钊浙江工业大学生物工程学院

该研究合成了密码子优化后的牛乳铁蛋白功能片段(bovine lactoferrin functional fragment, BlfFf ),转入毕赤酵母GS115中重组表达并筛选抗性菌株,通过镍亲和层析纯化BlfFf,以Western Blot、液质联用和ELISA对重组蛋白进行鉴定及检测。... 详细信息

该研究合成了密码子优化后的牛乳铁蛋白功能片段(bovine lactoferrin functional fragment, BlfFf ),转入毕赤酵母GS115中重组表达并筛选抗性菌株,通过镍亲和层析纯化BlfFf,以Western Blot、液质联用和ELISA对重组蛋白进行鉴定及检测。比较了5 L发酵罐生产中3种不同高密度发酵培养基对BlfFf生产的影响。结果表明:重组转化子正确表达了BlfFf。镍亲和层析中,150 mmol/L咪唑洗脱可得到电泳纯37 kDa的目标条带。在3种高密度发酵培养基中,RDM最优,诱导48 h,菌体湿细胞密度达到297 g/L,BlfFf表达量为38.1 mg/L。

关键词：牛乳铁蛋白毕赤酵母高密度发酵分泌表达纯化鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

牛乳铁蛋白稳定性研究

中国药房 2005年第3期16卷 215-216页

作者：许宁姚京忠徐文斌浙江省衢州市人民医院药剂科衢州市324000

目的 :研究牛乳铁蛋白原料的稳定性。方法 :以反相高效液相色谱法测定牛乳铁蛋白及其杂蛋白的含量 ,分别用强光照射法、加速试验法和室温留样观察法对牛乳铁蛋白原料进行稳定性试验。结果 :牛乳铁蛋白检测浓度线性范围为25～1000μg/ml,... 详细信息

目的 :研究牛乳铁蛋白原料的稳定性。方法 :以反相高效液相色谱法测定牛乳铁蛋白及其杂蛋白的含量 ,分别用强光照射法、加速试验法和室温留样观察法对牛乳铁蛋白原料进行稳定性试验。结果 :牛乳铁蛋白检测浓度线性范围为25～1000μg/ml,RSD=0 .05 % ;其在强光照射、加速试验和室温留样观察试验中 ,各项指标均符合质量标准。结论 :牛乳铁蛋白在室温、密闭的贮存条件下性质稳定。

关键词：牛乳铁蛋白杂蛋白含量反相高效液相色谱法稳定性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

牛乳铁蛋白治疗小鼠实验性乳腺炎的效果研究

牛乳铁蛋白治疗小鼠实验性乳腺炎的效果研究

作者：周晓菲吉林大学

学位级别：硕士

为了验证牛乳铁蛋白(BLF)治疗奶牛乳腺炎的可能性和效果,本课题选取了乳腺炎四种致病菌(无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌),通过BLF对这四种病菌的体外抑菌实验、观察BLF在特定浓度下对这四种病菌黏附乳腺上皮细胞的... 详细信息

为了验证牛乳铁蛋白(BLF)治疗奶牛乳腺炎的可能性和效果,本课题选取了乳腺炎四种致病菌(无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌),通过BLF对这四种病菌的体外抑菌实验、观察BLF在特定浓度下对这四种病菌黏附乳腺上皮细胞的影响和BLF治疗小鼠实验性乳腺炎的体内效果这三个实验,来评价BLF治疗奶牛乳腺炎的可能效果,并为BLF治疗奶牛乳腺炎提供理论依据。实验结果如下: BLF对无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌乳腺炎四种致病菌的MIC分别是2mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、3mg/mL, MBC分别是4.5 mg/mL、4 mg/mL、2 mg/mL、6 mg/mL。结果证明BLF对革兰氏阳性菌的抑制效果优于革兰氏阴性菌,在革兰氏阳性菌中对葡萄球菌的抑制效果好于对链球菌的抑制效果。用组织块种植法分离培养获得昆明孕鼠乳腺上皮细胞,经过黏附实验验证BLF抑制和解离细菌对乳腺上皮细胞的黏附,使乳腺上皮细胞不易被感染,实验结果表明,通过添加BLF可以使黏附在乳腺上皮细胞上的细菌脱离,使感染不再加剧,降低细菌对乳腺的危害性。用乳腺基部注射一定量细菌悬液的方法感染小鼠乳腺,成功建立小鼠实验性乳腺炎模型。通过BLF对小鼠乳腺炎的治疗实验,结果表明:BLF对四种细菌性乳腺炎均有一定的治疗效果,其治愈率分别为,BLF对无乳链球菌性乳腺炎的治愈率为40%,对停乳链球菌性乳腺炎的治愈率为30%,对金黄色葡萄球菌性乳腺炎的治愈率为80%,对大肠杆菌性乳腺炎的治愈率为60%。同时从BLF对这四种细菌性乳腺炎的治愈率可以看出,BLF治疗金葡菌性乳腺炎效果优于治疗大肠杆菌性乳腺炎,对无乳链球菌和停乳链球菌性乳腺炎治疗效果相对较差。

关键词：牛乳铁蛋白乳腺炎黏附治疗