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柠檬苦素对溃疡性结肠炎大鼠肠道损伤和肠道菌群紊乱的改善作用及机制

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中国药房 2024年第1期35卷 51-56页

作者：张霞贾慧宇康金旺赵汉清河北北方学院附属第二医院消化内科河北张家口075100 河北北方学院附属第二医院检验科河北张家口075100 河北北方学院附属第二医院中医科河北张家口075100

目的探究柠檬苦素对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道损伤和肠道菌群紊乱的改善作用及机制。方法构建UC大鼠模型,将建模成功的70只大鼠随机分为模型组和柠檬苦素低、中、高剂量组(12.5、25、50 mg/kg)以及柳氮磺胺吡啶组(阳性对照组,500 mg/kg)... 详细信息

目的探究柠檬苦素对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道损伤和肠道菌群紊乱的改善作用及机制。方法构建UC大鼠模型,将建模成功的70只大鼠随机分为模型组和柠檬苦素低、中、高剂量组(12.5、25、50 mg/kg)以及柳氮磺胺吡啶组(阳性对照组,500 mg/kg),每组14只;另取14只大鼠作为对照组。各组大鼠灌胃相应药液或等量生理盐水,每天1次,连续2周。末次给药结束24 h后,观察大鼠一般情况并称重,取结肠组织进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;检测大鼠结肠组织中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;观察大鼠结肠组织病理学变化;检测大鼠结肠组织中紧密连接蛋白1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白的表达水平;基于16S rRNA检测大鼠肠道菌群的相对丰度。结果与对照组相比,模型组大鼠精神状态不佳、皮毛较暗、情绪烦躁易发怒,结肠组织腺体排列杂乱,出现炎症细胞浸润和细胞坏死、水肿现象;CMDI评分和结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,HMGB1、RAGE蛋白表达水平以及肠道变形菌门、拟杆菌门菌群的相对丰度均显著升高(P柠檬苦素各剂量组大鼠一般情况和结肠组织病理损伤均改善,上述指标水平均显著逆转(P柠檬苦素高剂量组大鼠各项指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论柠檬苦素可改善UC模型大鼠肠道损伤及肠道菌群紊乱,其作用机制可能与下调HMGB1/RAGE信号通路活性有关。

关键词：柠檬苦素溃疡性结肠炎肠道损伤肠道菌群高迁移率族蛋白B1/晚期糖基化终末产物受体信号通路

柠檬苦素对6-OHDA诱导的帕金森病模型的神经保护作用及其机制

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柠檬苦素对6-OHDA诱导的帕金森病模型的神经保护作用及其机制

作者：高玺宇吉林大学

学位级别：硕士

帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种多发于中老年人的神经退行性疾病。其特点是起病隐匿,病因复杂,目前尚无有效的治愈方法。PD的主要特征是中脑多巴胺能神经元的退行性死亡。研究表明,PD患者黑质区大量死亡的神经元中有一部分具... 详细信息

帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种多发于中老年人的神经退行性疾病。其特点是起病隐匿,病因复杂,目前尚无有效的治愈方法。PD的主要特征是中脑多巴胺能神经元的退行性死亡。研究表明,PD患者黑质区大量死亡的神经元中有一部分具有明显的凋亡特征,且神经元的过度自噬和小胶质细胞的过度激活被证明在PD期间参与了多巴胺能神经元的死亡过程。柠檬苦素(Limonin,LM)是存在于葡萄柚和柑橘类水果中的一种纯天然化合物。已有研究表明,LM具有抑制细胞凋亡和炎症的作用。然而,其在PD中的作用及其机制尚不清楚。因此,本研究旨在探讨LM对6-OHDA诱导的PD大鼠模型的影响及其机制。在体内实验中,我们研究了LM对6-OHDA注射的PD大鼠的影响。首先,我们发现,LM改善6-OHDA诱导的大鼠体重损失和运动功能障碍。进一步研究发现LM改善6-OHDA注射大鼠中脑黑质区多巴胺能神经元损伤和抑制6-OHDA注射大鼠纹状体中多巴胺及其代谢物的减少。此外我们还发现LM抑制6-OHDA注射大鼠中脑黑质区小胶质细胞的活化和促炎介质的表达。这些结果说明,LM改善6-OHDA注射大鼠的运动行为和神经变性。PC12细胞是一种来源于大鼠的神经元细胞系,因为可以合成并储存儿茶酚胺、多巴胺等多种神经元分泌物,已被广泛用于研究神经退行性疾病的神经元替代实验中。为了进一步明确LM的作用,我们探究了LM对6-OHDA诱导的PC12神经元细胞损伤的影响。结果显示,LM改善6-OHDA诱导的PC12神经元细胞损伤。此外,我们还发现LM抑制6-OHDA诱导的PC12神经元细胞过度自噬。进一步探究发现LM通过激活m TOR抑制神经元过度自噬,进而抑制6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡。PD发病期间,多巴胺能神经元损伤过程中伴随有神经炎症的发生。BV2细胞是来源于小胶质细胞的永生细胞系,它具备小胶质细胞的形态学、表型以及各项功能,因此已成为体外研究神经炎症的首选替代细胞。为了进一步明确LM的作用,我们还研究了LM对LPS诱导的BV2细胞炎症的影响。结果显示,LM通过激活AKT/Nrf-2/HO-1通路抑制LPS诱导的BV2细胞炎症。进一步研究我们还发现,LM通过抑制小胶质细胞炎症改善炎症介导的神经损伤,发挥神经保护作用。综上所述,本研究发现,LM缓解6-OHDA诱导的PD大鼠模型的运动功能障碍和中脑多巴胺能神经元损伤。体外研究显示,LM通过激活m TOR恢复自噬和凋亡之间的平衡,以及通过抑制小胶质细胞活化减少神经元细胞凋亡。总之,本研究表明,LM可能通过靶向自噬-凋亡平衡和神经炎症,在PD中发挥神经保护作用。

关键词：帕金森病柠檬苦素 6-OHDA 自噬神经炎症

负载柠檬苦素的双蛋白高内相乳液表征及其稳定性研究

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食品与发酵工业 2024年

作者：梁鑫富曾泽政戴梓茹蔡秋杏董庆亮北部湾大学食品工程学院广西高校北部湾海产品高值化利用与预制食品重点实验室广西大学轻工与食品工程学院

柠檬苦素（limonin）具有多种生理活性，但其结构稳定性差，限制了柠檬苦素的广泛应用。为了提高柠檬苦素的结构稳定性，该文以乳清蛋白（whey protein， WP）-玉米醇溶蛋白（Zein）复合纳米颗粒为高内相乳液的稳定剂，制备负载柠檬苦... 详细信息

柠檬苦素（limonin）具有多种生理活性，但其结构稳定性差，限制了柠檬苦素的广泛应用。为了提高柠檬苦素的结构稳定性，该文以乳清蛋白（whey protein， WP）-玉米醇溶蛋白（Zein）复合纳米颗粒为高内相乳液的稳定剂，制备负载柠檬苦素的高内相乳液，并对该乳液进行表征，进一步探究乳液负载对柠檬苦素结构稳定性的影响。结果表明，随着玉米醇溶蛋白的质量增加，负载柠檬苦素的双蛋白复合物高内相乳液粒径呈现先减小后增大的趋势，激光共聚焦显微镜结果也证实了这一粒径变化规律，乳液D(2，3)和D(4，3)最小值分别为（13.55±2.02）μm和（136.13±0.93）μm；该乳液呈现假塑性流动行为，并形成了以弹性为主的凝胶状网络结构；此外，该乳液还具有良好的热稳定性、光照稳定性和贮藏稳定性，而柠檬苦素经该高内相乳液负载后，热处理和光照处理下的最高保留率分别为（93.46±0.68）%和（76.47±0.95）%，提高了柠檬苦素的热稳定性和光照稳定性。该研究结果可为进一步开发和应用柠檬苦素提供理论依据。

关键词：柠檬苦素双蛋白纳米颗粒高内相乳液稳定性

光谱法结合分子对接技术研究柠檬苦素与牛血清白蛋白的相互作用

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食品工业科技 2024年第21期45卷 37-44页

作者：梁鑫富董庆亮广西大学轻工与食品工程学院广西南宁530000 北部湾大学食品工程学院广西钦州535000 广西高校北部湾海产品高值化利用与预制食品重点实验室广西钦州535000

为研究柠檬苦素（Limonin，LM）与牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）相互作用，本文采用紫外光谱法、荧光光谱法及分子对接技术研究LM与BSA的相互作用机制。结果表明：LM能有效淬灭BSA的内源荧光，其淬灭类型为静态淬灭;两者... 详细信息

为研究柠檬苦素（Limonin，LM）与牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）相互作用，本文采用紫外光谱法、荧光光谱法及分子对接技术研究LM与BSA的相互作用机制。结果表明：LM能有效淬灭BSA的内源荧光，其淬灭类型为静态淬灭;两者发生相互作用可形成1个结合位点，分子间作用力主要为氢键和范德华力，该相互作用过程为自发反应;紫外光谱及同步荧光光谱表明，LM与BSA发生相互作用后，可以增加BSA上酪氨酸（Tyr）、色氨酸（Trp）残基微环境的疏水性;通过竞争位点实验及分子对接，发现LM与BSA的结合位点在siteⅠ附近，LM可以与BSA上的Trp-213形成氢键，与Tyr-340/451等残基之间存在范德华力。

关键词：柠檬苦素牛血清白蛋白相互作用荧光光谱分子对接

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基于STAT3信号通路研究柠檬苦素对胃癌模型小鼠免疫因子表达的影响

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中国老年学杂志 2024年第6期44卷 1458-1461页

作者：刘雪石柳林晔张静智温建军赣州市人民医院消化内科江西赣州341000

目的分析柠檬苦素对胃癌小鼠模型免疫因子表达的影响并探索其作用机制。方法选取50只SPF级小鼠,随机分为5组各10只,构建MFC胃癌荷瘤模型,建模成功后随机分为模型组、阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组并给予对应药物灌胃,1次/d,连... 详细信息

目的分析柠檬苦素对胃癌小鼠模型免疫因子表达的影响并探索其作用机制。方法选取50只SPF级小鼠,随机分为5组各10只,构建MFC胃癌荷瘤模型,建模成功后随机分为模型组、阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组并给予对应药物灌胃,1次/d,连续14 d。计算脾指数、胸腺指数及抑瘤率;流式细胞术检测CD4^(+)、CD8^(+) T细胞及其比值;酶联免疫吸附试验检测血清免疫因子白细胞介素(IL)-2、IL-10、干扰素(IFN)-γ的表达水平;免疫组化法检测胃癌组织磷酸化信号转导与转录激活因子(p-STAT3)、基质金属蛋白酶(MMP)-9阳性表达率;Western印迹法检测胃癌细胞STAT3磷酸化水平。结果与模型组相比,阳性对照组脾指数、胸腺指数显著降低(P柠檬苦素低、中、高剂量组脾指数、胸腺指数显著升高(P柠檬苦素低、中、高剂量组抑瘤率均显著增加(P柠檬苦素低、中、高剂量组CD4^(+)、CD8^(+) T淋巴细胞百分数和CD4^(+)/CD8^(+)比值较模型组显著上升(P柠檬苦素低、中、高剂量组IL-2、IFN-γ水平显著增加,IL-10显著降低(P柠檬苦素低、中、高剂量组p-STAT3、MMP-9的阳性表达率均显著下降(P柠檬苦素低、中、高剂量组第705位点酪氨酸的磷酸化STAT3蛋白(pTyr^(705)-STAT3)水平均显著降低(P柠檬苦素能抑制胃癌小鼠模型肿瘤组织的发展,这与其提高小鼠免疫水平与抑制STAT3通路激活密切相关。

关键词：信号转导与转录激活因子(STAT3)信号通路柠檬苦素胃癌免疫因子

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柠檬苦素类化合物生物活性研究进展

安徽农学通报 2024年第1期30卷 21-26页

作者：张文琦纪宏秀吴倩王猛魏德莉聊城大学生命科学学院山东聊城252059 聊城市人民医院山东聊城252200

柠檬苦素类化合物是一类高度氧化的四环三萜类次生代谢产物,主要存在于芸香科(Rutaceae)和楝科(Meliaceae)植物中,包括柠檬苦素、诺米林和黄柏酮等物质。本文对柠檬苦素类化合物的生理活性进行概述,总结其各类生物学活性及作用机制,为... 详细信息

柠檬苦素类化合物是一类高度氧化的四环三萜类次生代谢产物,主要存在于芸香科(Rutaceae)和楝科(Meliaceae)植物中,包括柠檬苦素、诺米林和黄柏酮等物质。本文对柠檬苦素类化合物的生理活性进行概述,总结其各类生物学活性及作用机制,为柠檬苦素进一步用于健康保护、食品开发和农业生产等提供参考。

关键词：柠檬苦素生物活性抗癌抗菌

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HPLC法测定泡吴茱萸中柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量

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江西化工 2024年第2期40卷 39-41,57页

作者：谭甜霞姜军华江西省药品检验检测研究院国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心江西南昌330029

目的:建立用高效液相色谱法(HPLC)测定泡吴茱萸中柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱三种成分的含量。方法:色谱柱为Eclipse XDB C18(4.6×250mm,5μm),流动相:A乙腈,B甲醇,C 0.05%磷酸溶液,各流动相配比为30∶20∶50,流速:1.000mL·min^(-... 详细信息

目的:建立用高效液相色谱法(HPLC)测定泡吴茱萸中柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱三种成分的含量。方法:色谱柱为Eclipse XDB C18(4.6×250mm,5μm),流动相:A乙腈,B甲醇,C 0.05%磷酸溶液,各流动相配比为30∶20∶50,流速:1.000mL·min^(-1),检测波长:215nm,柱温:30℃。结果:柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱三者依次在0.1303~1.6291μg(r=0.9995)、0.0500~0.6251μg(r=1.0000)、0.0354~0.4429μg(r=0.9999)范围内与其峰面积有良好的线性关系,且三者的平均加样回收率和RSD值分别为100.11%(RSD=0.7%)、100.74%(RSD=1.4%)和99.39%(RSD=1.3%)。结论:该方法操作简单,结果稳定,有着高准确度,适用于泡吴茱萸中柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱含量的测定。

关键词： HPLC 含量测定柠檬苦素吴茱萸碱吴茱萸次碱泡吴茱萸

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柠檬苦素脂质体的制备和制剂学评价

中草药 2019年第24期50卷 5957-5962页

作者：李思敏吴文瀚高丽娜张蕾吴诗涵刘雨萌周忠民乔宏志淄博市中心医院肾内科山东淄博255036 南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药高效给药系统工程技术研究中心江苏南京210023

目的针对柠檬苦素(limonin,LM)的成药性问题,开发其脂质体制剂,优化处方和制备工艺,并考察其体外抗肿瘤活性。方法采用薄膜分散法制备柠檬苦素脂质体(LM@Lip),通过单因素实验和正交试验筛选LM@Lip的制备工艺和处方,采用Malvern粒度仪检... 详细信息

目的针对柠檬苦素(limonin,LM)的成药性问题,开发其脂质体制剂,优化处方和制备工艺,并考察其体外抗肿瘤活性。方法采用薄膜分散法制备柠檬苦素脂质体(LM@Lip),通过单因素实验和正交试验筛选LM@Lip的制备工艺和处方,采用Malvern粒度仪检测所制备LM@Lip粒径、PDI及Zeta电位,采用HPLC检测其包封率和载药量,透析法研究LM@Lip体外释放情况,MTT法评价LM@Lip对HepG2及A549细胞的毒性。结果优化后的脂质体制备条件:药脂比为1∶150,胆脂比为1∶9,探头超声条件为功率120 W、时间6 min(间隔1 s)。载药脂质体的平均粒径为(119.5±6.2)nm,PDI为0.318±0.124,Zeta电位为(−17.2±1.3)mV,包封率为87.9%,载药量为0.57%,药物质量浓度为63.4μg/mL。体外释放实验结果显示,12 h累积释放量为58.59%。MTT结果显示,LM@Lip对HepG2和A549细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为20.16、15.39μg/mL,其肿瘤抑制作用优于LM单药。结论将LM制备成LM@Lip可以增加药物的稳定性及溶解度,药物表现出一定的缓释现象,并且能明显抑制肿瘤细胞增殖,效果优于LM。

关键词：柠檬苦素脂质体薄膜分散法正交试验体外释放抗肿瘤成药性

柠檬苦素诱导塔宾曲霉UA13高产柠檬苦素转化酶的研究

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食品与发酵工业 2023年第18期49卷 224-231页

作者：陈钰亭李文杰杨睿昕雷生姣王顺顺杨丹丹欧阳侬非三峡大学生物与制药学院湖北宜昌443002 河南工业大学国际教育学院河南郑州450000

以柠檬苦素为代表的三萜化合物是柑橘类水果在加工过程中产生“后苦味”的主要原因,采用酶法转化使柠檬苦素的含量降低是目前较适合果汁加工业的方法。该研究以实验室前期分离并经等离子体(atmospheric room temperature plasma,ARTP)... 详细信息

以柠檬苦素为代表的三萜化合物是柑橘类水果在加工过程中产生“后苦味”的主要原因,采用酶法转化使柠檬苦素的含量降低是目前较适合果汁加工业的方法。该研究以实验室前期分离并经等离子体(atmospheric room temperature plasma,ARTP)诱变获得的塔宾曲霉UA13为出发菌株,采用柠檬苦素作为诱导物对其进行产酶诱导,并对菌株的发酵产酶工艺和酶的底物亲和性进行研究。结果表明,在1 L发酵罐培养基中,接种量10%(体积分数)、初始pH值5.0、搅拌转速250 r/min、30℃的最适条件下发酵,柠檬苦素转化酶活力最高可达48.52 U/mL。酶对柠檬苦素的底物亲和性研究结果表明,柠檬苦素转化酶的K m值为0.622 mmol/L,说明诱导后的菌株UA13所产酶对柠檬苦素的亲和力增强。同时研究结果显示,柠檬苦素转化酶具有较好的耐热性和耐酸性,在柑橘果汁加工业中具有非常好的应用前景。

关键词：柠檬苦素诱导转化酶塔宾曲霉发酵罐优化柑橘果汁