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HAb18G/CD147拮抗肽对体内血管生成的影响

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中国药理学通报 2003年第3期19卷 355-357页

作者：商澎骞爱荣胡佩珍马福成朱平陈志南第四军医大学细胞工程研究中心西安710033 第四军医大学病理学教研室西安710033 第四军医大学西京医院临床免疫科西安710033

肿瘤的侵袭、转移过程是多因素、多步骤的过程 ,一般涉及肿瘤细胞黏附、运动 ,细胞外基质降解 ,肿瘤新生血管生成等多个环节[1] 。抗肿瘤血管生成是目前抗肿瘤转移药物研究的重要靶环节之一[2 ] 。ＣＤ14 7是新近命名的ＣＤ分子[3 ] ,... 详细信息

肿瘤的侵袭、转移过程是多因素、多步骤的过程 ,一般涉及肿瘤细胞黏附、运动 ,细胞外基质降解 ,肿瘤新生血管生成等多个环节[1] 。抗肿瘤血管生成是目前抗肿瘤转移药物研究的重要靶环节之一[2 ] 。ＣＤ14 7是新近命名的ＣＤ分子[3 ] ,又称为Ｅｍｍｐｒｉｎ ,其主要功能是诱导基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ)的产生 ,促进肿瘤的侵袭和转移[4] 。ＨＡｂ18Ｇ是本研究中心利用ＨＡｂ18单克隆抗体筛选获得的相关抗原分子 ,与ＣＤ14 7分子高度同源[5] ,具有促进肿瘤转移的作用[6,7] 。ＨＡｂ18Ｇ/ＣＤ14 7分子拮抗多肽 (ａｎｔａｇｏ

关键词： HAb18G CD147 拮抗肽血管生成

7肽和12肽两种M13噬菌体展示库筛选肿瘤坏死因子alpha拮抗肽的比较

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中国生物工程杂志 2017年第5期37卷 1-8页

作者：胡昌武谢君朱乃硕复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室微生物与分子免疫学实验室上海200438

肿瘤坏死因子alpha的拮抗剂是治疗多种炎症性自身免疫疾病的首选,但抗体类拮抗物因副作用明显而使用受限,尤其是机体内抗抗体的产生,严重影响治疗效果和药物代谢。而肽类物除免疫原性低之外,和小分子相比也有更低的毒性和更强的靶标特... 详细信息

肿瘤坏死因子alpha的拮抗剂是治疗多种炎症性自身免疫疾病的首选,但抗体类拮抗物因副作用明显而使用受限,尤其是机体内抗抗体的产生,严重影响治疗效果和药物代谢。而肽类物除免疫原性低之外,和小分子相比也有更低的毒性和更强的靶标特异性。使用7肽和12肽两种M13噬菌体展示库筛选TNFα拮抗肽,以分析7肽和12肽分别作为TNFα拮抗肽的亲和性与功能性。经过3~4轮的筛选和验证,得到2条7肽序列和2条12肽序列。利用ELISA方法检测合成肽与TNFα结合的亲和性,编号632的7肽亲和性最强,Kd=138nmol/L;编号636的12肽亲和性稍差,Kd=8.59μmol/L。InsightⅡ软件分别分析632肽和636肽与TNFα二聚体结合,发现632肽与TNFα二聚体结合更加稳定,并且在细胞水平上632肽拮抗TNFα活性功能比636肽更强,有632肽存在的条件下TNFα诱导的L929细胞生存率上升了3倍,而636肽的作用只有2倍。7肽比12肽更适合作为TNFα拮抗肽。

关键词：噬菌体展示库肿瘤坏死因子拮抗肽

应用噬菌体展示肽库技术淘选大鼠CCR5膜外第一、二胞外环特异性结合的活性拮抗肽与初步鉴定

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中国病理生理杂志 2015年第7期31卷 1225-1230页

作者：刘思雪胡梅叶小研黄花荣钟英强中山大学孙逸仙纪念医院消化内科广东广州510120 广东药学院附属第一医院消化内科广东广州510080 中山大学孙逸仙纪念医院儿科广东广州510120

目的：利用噬菌体展示肽库技术淘选与大鼠CC趋化因子受体5（CCR5）膜外第一、二胞外环特异性结合的短肽,并鉴定其与CCR5的结合能力。方法：在蛋白质数据库中查得大鼠CCR5第一、二胞外环的氨基酸序列,合成相应的线性短肽作为淘选的靶分子... 详细信息

目的：利用噬菌体展示肽库技术淘选与大鼠CC趋化因子受体5（CCR5）膜外第一、二胞外环特异性结合的短肽,并鉴定其与CCR5的结合能力。方法：在蛋白质数据库中查得大鼠CCR5第一、二胞外环的氨基酸序列,合成相应的线性短肽作为淘选的靶分子,利用噬菌体展示7肽文库进行3~4轮淘选,用ELISA法鉴定所选肽与靶分子的结合,并测定其与浓度的关系。结果：与CCR5第一、二胞外环特异性结合的噬菌体展示的短肽序列分别为GHWKVWL和HYIDFRW,ELISA鉴定呈阳性反应,且短肽与靶分子的结合具有浓度依赖性和可饱和性。结论：利用噬菌体展示技术成功获得了2条CCR5特异性结合的短肽,并在体外证明其可与CCR5第一、二胞外环具有结合能力。

关键词： CC趋化因子受体5 拮抗肽噬菌体展示

HAb18G/CD147拮抗肽对荷瘤裸鼠的实验性治疗作用

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肿瘤 2003年第4期23卷 279-282页

作者：商澎骞爱荣李郁黄宝成梅其炳朱平陈志南第四军医大学细胞工程研究中心西安710033 第四军医大学药理学教研室第四军医大学西京医院临床免疫科

目的　研究肝癌转移相关因子HAb18G /CD14 7的合成拮抗肽 (APs)对荷人肝癌裸鼠的实验性治疗作用。方法　采用皮下接种人肝癌细胞系HHCC和肝脏原位接种人高转移肝癌细胞系MHCC97 H形成瘤块的BALB /C裸鼠模型 ,静脉给予APs :2 .5mg /kg ,... 详细信息

目的　研究肝癌转移相关因子HAb18G /CD14 7的合成拮抗肽 (APs)对荷人肝癌裸鼠的实验性治疗作用。方法　采用皮下接种人肝癌细胞系HHCC和肝脏原位接种人高转移肝癌细胞系MHCC97 H形成瘤块的BALB /C裸鼠模型 ,静脉给予APs :2 .5mg /kg ,皮下组 :隔日 1次 ,共 12次 ;原位组 :每日 1次 ,共 15次。皮下组 :观察接种HHCC细胞后皮下肿瘤生长情况 ,从d 10开始 ,每 4d测定 1次肿瘤体积 ;观察 15 0d裸鼠生存情况。原位组 :接种MHCC97 H后 ,d 2 1杀裸鼠 ,观察肝脏各叶肿瘤播散情况 ,计数灶数 ;观察肺脏和腹腔淋巴结转移情况 ;肝脏、肺脏和淋巴结结合病理学切片检查。结果　皮下荷HHCC实验 :在d 30AP I治疗组瘤体积 2 15 .0± 2 5 9.5mm3 ,对照组 4 71.4± 187.5mm3 ,差异有显著性 (P 拮抗多肽AP 1和AP 6对裸鼠皮下和肝脏原位接种人肝癌的生长抑制和延长生命有明显的作用。

关键词：肝癌肿瘤转移 HAbl8G/CDl47 拮抗肽

枯草芽孢杆菌A30菌株产生的拮抗肽的分离纯化与理化性质研究

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中国水稻科学 2002年第4期16卷 361-365页

作者：何青芳陈卫良马志超浙江大学生物技术研究所浙江杭州310029

平皿测试表明 Bacillussubtilis A30菌株对多种植物病原真菌 ,例如水稻纹枯病菌 (Rhizoctonia solani)、稻瘟病菌 (Magnaporthegrisea)等有强烈抑制作用。在小区试验中 A30菌液对水稻纹枯病也表现出了较好的防治效果。 A30菌株培养液经... 详细信息

平皿测试表明 Bacillussubtilis A30菌株对多种植物病原真菌 ,例如水稻纹枯病菌 (Rhizoctonia solani)、稻瘟病菌 (Magnaporthegrisea)等有强烈抑制作用。在小区试验中 A30菌液对水稻纹枯病也表现出了较好的防治效果。 A30菌株培养液经硫酸铵沉淀、FPL C疏水色谱、HPLC反相色谱后 ,纯化得到一种拮抗活性物质 ,命名为 P1。 P1对热稳定 ,对蛋白酶不敏感 ;茚三酮反应呈阴性 ,用酸水解后茚三酮反应和双缩脲反应呈阳性。经 L C- ESI- MS分析初步判断 P1的分子量为14 76 .

关键词：分离纯化理化性质枯草芽孢杆菌拮抗肽水稻纹枯病菌拮抗菌纹枯病

HAb18G/CD147拮抗肽抗肝癌转移作用的体外实验

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世界华人消化杂志 2003年第3期11卷 255-259页

作者：骞爱荣商澎李郁黄宝成朱平梅其炳陈志南中国人民解放军第四军医大学细胞工程研究中心陕西省西安市710032 中国人民解放军第四军医大学西京医院临床免疫科陕西省西安市710033 中国人民解放军第四军医大学药理教研室陕西省西安市710032

目的:筛选获得HAb18G/CD147高亲和性拮抗肽中具有体外抗肝癌细胞转移作用的拮抗肽.方法:对于采用HAb18G/CD147纯抗原筛选噬菌体随机12肽库所获得的9条高亲和性的12肽(AP-1-AP-9).分别采用:MTT法测定AP-1-AP-9的对肝癌细胞(HHCC)的直接毒... 详细信息

目的:筛选获得HAb18G/CD147高亲和性拮抗肽中具有体外抗肝癌细胞转移作用的拮抗肽.方法:对于采用HAb18G/CD147纯抗原筛选噬菌体随机12肽库所获得的9条高亲和性的12肽(AP-1-AP-9).分别采用:MTT法测定AP-1-AP-9的对肝癌细胞(HHCC)的直接毒性;明胶酶谱法分析AP1-AP-9对基质金属蛋白酶(MMPs)产生及其激活过程的影响;重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭抑制实验测定AP-1-9对肝癌细胞(HHCC)侵袭力的的影响;观察AP-1-AP-9对HHCC与细胞外基质蛋白(Matrigel,FN,LN,CollogenⅣ)、HHCC与间质细胞(成纤维细胞fb)黏附能力;以及AP1-9对HHCC运动能力的影响.结果:拮抗肽AP-1-AP-9对HHCC无明显细胞毒性作用;AP-1,6,9对HHCC刺激fb细胞产生MMP-2其激活过程具有明显的抑制作用;AP-1,3,6,7,8,9对HHCC侵袭力有明显的抑制作用(P拮抗肽对HHCC与细胞外基质蛋白Matrigel,FN无明显的抑制作用,但AP-3,9对HHCC与CollogenⅣ,LN的黏附有抑制作用;AP-1,6,9对HHCC与fb细胞之间的黏附有抑制作用;AP-6可抑制HHCC的运动能力,抑制率54%,但统计学上差异无显著性(P>0.05).结论:HAb18G/CD147拮抗肽(AP-1-AP-9)对肝癌的侵袭转移相关的多个环节有明显的抑制作用,为研究开发新的抗肿瘤转移多肽药物开辟了新途径.

关键词： HAb18G/CD147 拮抗肽抗肝癌转移体外实验肿瘤转移

利用生物信息学方法预测HAb18G/CD147拮抗肽的性质和功能

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第四军医大学学报 2003年第15期24卷 1422-1425页

作者：商澎骞爱荣罗志清赵文明陈志南西安交通大学生命科学与技术学院陕西西安710049 第四军医大学细胞工程研究中心陕西西安710033 西北工业大学机电工程学院陕西西安710072

目的 :利用生物信息学方法对HAb1 8G/CD1 4 7拮抗肽 (AP 1～ 9)进行理化性质的预测及相似性的比较 ,为拮抗肽的结构与功能研究提供预测和帮助 .方法 :应用ExPASy数据库分析短肽的Mr、等电点、疏水性等理化性质 .利用Blastp,PDB_ISL和SCO... 详细信息

目的 :利用生物信息学方法对HAb1 8G/CD1 4 7拮抗肽 (AP 1～ 9)进行理化性质的预测及相似性的比较 ,为拮抗肽的结构与功能研究提供预测和帮助 .方法 :应用ExPASy数据库分析短肽的Mr、等电点、疏水性等理化性质 .利用Blastp,PDB_ISL和SCOP等数据库对HAb1 8G/CD1 4 7拮抗肽进行相似性比较 .结果 :经ExPASy数据库分析 9条拮抗肽中有 6条呈碱性 ,且大部分呈亲水性 ,半衰期由 1 .3～ 30 .0h不等 .Blastp分析AP 2与血管紧张素转化酶Ⅱ的活性中心部分序列相似 .PDB_ISL分析AP 3,9与NADPH氧化酶部分序列相似 .SCOP分析AP 2与Ras结合蛋白 (RBD) ,CAD结构域及金属蛋白酶催化结构域相似 ;AP 7与环亲和素及微管蛋白C 末端结构域相似 .结论

关键词：生物信息学拮抗肽结构与功能预测

CD147拮抗肽和基质金属蛋白酶抑制剂多西环素对胆囊癌细胞的作用

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中华实验外科杂志 2017年第7期34卷 1145-1148页

作者：王世行刘超黄涛刘新江罗乾坤庞志刚郑州大学第二附属医院普外科 450014 郑州大学附属肿瘤医院肝胆外科 450008

目的观察CD147拮抗肽-9（AP-9）及多西环素（DOX）分别及联合用药对胆囊癌细胞（GBC-SD）的增殖、凋亡、CD147表达和基质金属蛋白酶（MMP）-9活性的影响。方法将AP-9（50、100、200、400 μg/ml）、DOX（5、10、20、40 μg/ml）和联合... 详细信息

目的观察CD147拮抗肽-9（AP-9）及多西环素（DOX）分别及联合用药对胆囊癌细胞（GBC-SD）的增殖、凋亡、CD147表达和基质金属蛋白酶（MMP）-9活性的影响。方法将AP-9（50、100、200、400 μg/ml）、DOX（5、10、20、40 μg/ml）和联合用药（AP-9 200 μg/ml ＋ DOX 20 μg/ml）作用于胆囊癌细胞12、24、48 h，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖，Western blot法检测CD147表达，明胶酶谱法检测MMP-9活性，膜联蛋白V（Annexin V）/碘化丙锭（PI）染色法流式细胞仪检测早期凋亡率，结果采用t检验。结果不同浓度AP-9处理组的早期凋亡率（2.13±0.10）%、（2.92±0.19）%较对照组（1.58±0.08）%升高（P=0.002、P=0.001）；MMP-9活性（320.08±33.90、249.59±33.63、259.63±34.08、172.31±35.20）较对照组（446.08±42.42）降低（P=0.013、0.002、0.003、0.001）；增殖抑制率较对照组升高（P均=0.001）且呈时间和剂量依赖趋势。不同浓度多西环素处理组的早期凋亡率（3.25±0.12）%、（3.63±0.24）%较对照组（1.58±0.08）%明显升高（P均=0.001）；MMP-9活性（203.52±18.25、175.22±23.30、147.86±22.83、109.99±29.22）较对照组（446.08±42.42）降低（P均=0.001）；增殖抑制率较对照组升高（P均=0.001），CD147表达（0.97±0.12、0.80±0.10、0.69±0.11、0.51±0.12）较对照组（2.04±0.15）明显降低（P均=0.001）。联合用药后较单独用药，细胞增殖抑制率（38.78±0.39）%、（43.76±0.71）%、（52.00±0.91）%升高（P=0.001、P=0.003），MMP-9活性（110.19±24.74）降低（P=0.001、P=0.024），早期凋亡率（3.73±0.29）%升高（P=0.001、P=0.048）。结论DOX可减少胆囊癌细胞CD147表达，AP-9和DOX单独或联合用药均可以抑制胆囊癌细胞增殖、抑制MMP-9活性，促进细胞凋亡，且联合用药后抑制作用增强。

关键词：胆囊癌 CD147 细胞外基质金属蛋白酶-9 拮抗肽多西环素

基于TACI和BAFF结构的BAFF拮抗肽的研究

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基于TACI和BAFF结构的BAFF拮抗肽的研究

作者：杨璐淼天津大学

学位级别：硕士

B细胞活化因子（BAFF），是1999年发现的肿瘤坏死因子配体超家族的成员，BAFF能够促进B细胞增殖、分化和成熟，并能维持B细胞的生理功能，在体液免疫反应中发挥着非常重要的作用。正常生理条件下，BAFF通过与三个已知受体——TACI、BCMA... 详细信息

B细胞活化因子（BAFF），是1999年发现的肿瘤坏死因子配体超家族的成员，BAFF能够促进B细胞增殖、分化和成熟，并能维持B细胞的生理功能，在体液免疫反应中发挥着非常重要的作用。正常生理条件下，BAFF通过与三个已知受体——TACI、BCMA和BR3的特异性结合，可调节B细胞功能和维持机体免疫平衡。而BAFF的缺乏会导致机体免疫功能低下，引起免疫缺陷病;BAFF的过量表达则会诱发B细胞介导的自身免疫和B细胞恶性增殖，引起多种疾病如系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）、干燥综合征（SS）和B淋巴细胞瘤。对于免疫缺陷病，可以采取补充BAFF的方法来进行治疗;而对于自身免疫病和B淋巴细胞瘤，则需要以BAFF或B细胞为靶点来进行其功能的抑制而实现治疗。目前，以BAFF为靶点来抑制BAFF功能的研究主要包括抗BAFF单克隆抗体、BAFF的可溶性受体和抑制性短肽，其中，基于BCMA和BR3结构的拮抗肽已经被证明具有一定的抑制BAFF与相应受体结合的作用。本课题是研究以TACI和BAFF的3D结构为基础而设计和合成得到拮抗肽，通过体外实验，初步证明了以TACI型短肽作为治疗手段具有一定的可行性。具体研究结果如下：（1）以pET-30a-BAFF1为基础，利用不同的内切酶和引物，构建得到一个新的重组表达载体——pET-30a-BAFF2，在相同的诱导表达和纯化条件下，获得可溶性的BAFF1、BAFF2蛋白。（2）采用间接法ELISA，以BAFF作为抗原， TACI-Fc作为一抗，证明了纯化得到的BAFF1和BAFF2都具有生物学活性，都能与TACI-Fc在体外发生显著的特异性结合，而且BAFF2比BAFF1呈现出更强的结合活性，TACI-Fc与BAFF2结合的饱和浓度约为10μg/mL。（3）利用设计和合成得到的两种基于TACI关键氨基酸残基的拮抗肽——TA和TC，来进行竞争性ELISA，证明了TA、TC具有特异性抑制BAFF2与TACI-Fc结合的作用;与无关肽NRP维持7%的抑制率相比，拮抗肽TA和TC的抑制率随着肽浓度的增大而显著增大，当浓度为100μg/mL时，抑制率分别达到31%和51%，这就为将来的细胞实验和动物实验奠定了基础。

关键词： BAFF TACI ELISA 拮抗肽