基于TACI和BAFF结构的BAFF拮抗肽的研究

作     者：杨璐淼 

作者单位：天津大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孙剑

授予年度：2012年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：BAFF TACI ELISA 拮抗肽 

摘      要：B细胞活化因子（BAFF），是1999年发现的肿瘤坏死因子配体超家族的成员，BAFF能够促进B细胞增殖、分化和成熟，并能维持B细胞的生理功能，在体液免疫反应中发挥着非常重要的作用。正常生理条件下，BAFF通过与三个已知受体——TACI、BCMA和BR3的特异性结合，可调节B细胞功能和维持机体免疫平衡。而BAFF的缺乏会导致机体免疫功能低下，引起免疫缺陷病;BAFF的过量表达则会诱发B细胞介导的自身免疫和B细胞恶性增殖，引起多种疾病如系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）、干燥综合征（SS）和B淋巴细胞瘤。对于免疫缺陷病，可以采取补充BAFF的方法来进行治疗;而对于自身免疫病和B淋巴细胞瘤，则需要以BAFF或B细胞为靶点来进行其功能的抑制而实现治疗。目前，以BAFF为靶点来抑制BAFF功能的研究主要包括抗BAFF单克隆抗体、BAFF的可溶性受体和抑制性短肽，其中，基于BCMA和BR3结构的拮抗肽已经被证明具有一定的抑制BAFF与相应受体结合的作用。本课题是研究以TACI和BAFF的3D结构为基础而设计和合成得到拮抗肽，通过体外实验，初步证明了以TACI型短肽作为治疗手段具有一定的可行性。具体研究结果如下： （1）以pET-30a-BAFF1为基础，利用不同的内切酶和引物，构建得到一个新的重组表达载体——pET-30a-BAFF2，在相同的诱导表达和纯化条件下，获得可溶性的BAFF1、BAFF2蛋白。 （2）采用间接法ELISA，以BAFF作为抗原， TACI-Fc作为一抗，证明了纯化得到的BAFF1和BAFF2都具有生物学活性，都能与TACI-Fc在体外发生显著的特异性结合，而且BAFF2比BAFF1呈现出更强的结合活性，TACI-Fc与BAFF2结合的饱和浓度约为10μg/mL。 （3）利用设计和合成得到的两种基于TACI关键氨基酸残基的拮抗肽——TA和TC，来进行竞争性ELISA，证明了TA、TC具有特异性抑制BAFF2与TACI-Fc结合的作用;与无关肽NRP维持7%的抑制率相比，拮抗肽TA和TC的抑制率随着肽浓度的增大而显著增大，当浓度为100μg/mL时，抑制率分别达到31%和51%，这就为将来的细胞实验和动物实验奠定了基础。