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病毒学报 2007年第6期23卷 424-428页

作者：牟丹蕾王英鹏姜泓肖书渊于旭李光玉王平忠孙永涛聂青和黄长形白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038 德州大学医学院病理和内科学系德克萨斯州加尔维斯敦美国77555 哈佛大学艾滋病研究中心和感染病科马萨诸塞州波士顿美国02129

汉滩病毒（HTNV）的G1蛋白胞质区尾段包含保守的免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）样基序，该基序与许多重要的免疫受体胞质区ITAM基序同源性较高。为了研究HTNV的G1ITAM样基序的免疫信号转导功能，首先人工合成了一段保守的酪氨酸残基磷... 详细信息

汉滩病毒（HTNV）的G1蛋白胞质区尾段包含保守的免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）样基序，该基序与许多重要的免疫受体胞质区ITAM基序同源性较高。为了研究HTNV的G1ITAM样基序的免疫信号转导功能，首先人工合成了一段保守的酪氨酸残基磷酸化的G1ITAM样基序多肽，应用体外蛋白激酶共沉淀实验，分别从Jur—kat细胞和Raji细胞裂解物中初筛到5～9种与该基序相互作用的磷酸化蛋白或激酶；然后通过突变体分析、体外磷酸化实验和体外激酶共沉淀-免疫印迹分析，进一步确证了G1ITAM样基序在体外可以与Src家族蛋白酪氨酸激酶（PTK）Lyn、Fyn及其下游Syk家族激酶Syk、ZAP-70相互作用，而这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。上述研究表明，HTNVG1蛋白胞质区包含一个高度保守的功能性ITAM样基序，该基序在体外可以与TCR和BCR信号转导中关键的PTK相互作用，为进一步探讨HTNVG1蛋白ITAM样基序在肾综合征出血热（HFRS）免疫信号传递中的作用奠定了基础。

关键词：汉坦病毒囊膜糖蛋白类免疫受体酪氨酸活化基序蛋白酪氨酸激酶信号转导

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汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk细胞内相互作用

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中国免疫学杂志 2008年第3期24卷 205-209,215页

作者：牟丹蕾王英鹏姜泓王平忠于旭肖书渊孙永涛聂青和王临旭张岩李新红黄长形白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心西安710038 美国波士顿哈佛医学院麻省医院艾滋病和感染病研究中心美国德克萨斯州德州大学医学部内科病理学系

目的:研究汉滩病毒(HTNV)G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的细胞内相互作用。方法:构建用于研究Syk和G1 ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物细胞双杂交系统,验证G1 ITAM样基序与Syk之间是否存在细胞内相互作用。结果:哺乳动物细胞双杂交分... 详细信息

目的:研究汉滩病毒(HTNV)G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的细胞内相互作用。方法:构建用于研究Syk和G1 ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物细胞双杂交系统,验证G1 ITAM样基序与Syk之间是否存在细胞内相互作用。结果:哺乳动物细胞双杂交分析证实G1 ITAM样基序在哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用;而突变体分析表明,这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。结论:HTNV G1蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外和哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用,为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。

关键词：汉坦病毒囊膜糖蛋白类免疫受体酪氨酸活化基序蛋白酪氨酸激酶信号转导

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用Gateway技术克隆并表达汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序

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第四军医大学学报 2007年第15期28卷 1345-1348页

作者：牟丹蕾姜泓王英鹏李光玉潘蕾李新红王临旭张岩黄长形白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

目的:克隆并表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(G1)胞质区尾段ITAM样基序及其突变体.方法:采用RT-PCR方法,扩增HTNVG1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI... 详细信息

目的:克隆并表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(G1)胞质区尾段ITAM样基序及其突变体.方法:采用RT-PCR方法,扩增HTNVG1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI中经L-阿拉伯糖诱导表达,免疫印迹确证融合蛋白的表达.结果:成功地构建了2个含汉滩病毒G1胞质区尾段ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-L,pDEST-ITAM和1个含保守酪氨酸残基突变的G1ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-YY-FF(Y615F,Y628F),并在大肠埃希杆菌中得到高效表达,免疫印迹证实目的蛋白与GST融合表达.结论:获得了3种与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合的G1ITAM样基序及其突变基序的重组蛋白,为进一步探讨HTNVG1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用奠定了基础.

关键词：汉坦病毒囊膜糖蛋白类免疫受体酪氨酸活化基序

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汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用

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世界感染杂志 2007年第2期7卷 106-109页

作者：牟丹蕾姜泓王英鹏王平忠李光玉徐哲张野黄长形白雪帆中国人民解放军第四军医大学全军感染病诊疗中心陕西西安710038 加尔维斯敦德州大学医学院病理和内科学部美国德克萨斯州77555

目的研究汉滩病毒（HTNV）G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用。方法通过体外激酶共沉淀和免疫印迹分析，获取G1ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用的证据。结果体外激酶共沉淀一免疫印迹分析证明，在体外HTNVG1 ITAM样基序可以... 详细信息

目的研究汉滩病毒（HTNV）G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用。方法通过体外激酶共沉淀和免疫印迹分析，获取G1ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用的证据。结果体外激酶共沉淀一免疫印迹分析证明，在体外HTNVG1 ITAM样基序可以与Syk相互作用。结论HTNVGI蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用，为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。

关键词：汉坦病毒囊膜糖蛋白类免疫受体酪氨酸活化基序蛋白酪氨酸激酶信号转导

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用Gateway技术克隆并表达汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序

用Gateway技术克隆并表达汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序

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第七次全国肾综合征出血热学术会议

作者：牟丹蕾白雪帆黄长形王英鹏李光玉潘蕾李新红王临旭张岩第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心

目的克隆并表达汉滩病毒G1蛋白胞浆区尾段ITAM样基序及其突变体。方法采用RT-PCR方法,扩增汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,然后应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI 中经L-... 详细信息

目的克隆并表达汉滩病毒G1蛋白胞浆区尾段ITAM样基序及其突变体。方法采用RT-PCR方法,扩增汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,然后应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI 中经L-阿拉伯糖诱导表达,免疫印迹确证融合蛋白的表达。结果成功地构建了2个含汉滩病毒G1胞浆区尾段ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-L、pDEST-ITAM和1个含保守酪氨酸残基突变的G1 ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-YY-FF(Y615F, Y628F),并在大肠埃希杆菌中得到高效表达,免疫印迹证实目的蛋白与GST融合表达。结论获得了3种与GST融合的G1 ITAM样基序及其突变基序的重组蛋白,为进一步探讨汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用奠定基础。

关键词：汉坦病毒囊膜糖蛋白类免疫受体酪氨酸活化基序

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汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk相互作用的研究

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk相互作用的研究

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第七次全国肾综合征出血热学术会议

作者：白雪帆牟丹蕾王英鹏黄长形王平忠李光玉于旭肖书渊潘蕾孙永涛聂青和王临旭张岩徐哲李新红张野第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心

目的研究汉滩病毒(HTNV)G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的相互作用。方法首先通过体外激酶共沉淀-免疫印迹分析和突变体分析,获取G1 ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用的证据,然后构建用于研究Syk和G1 ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物... 详细信息

目的研究汉滩病毒(HTNV)G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的相互作用。方法首先通过体外激酶共沉淀-免疫印迹分析和突变体分析,获取G1 ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用的证据,然后构建用于研究Syk和G1 ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物细胞双杂交系统,进一步验证G1 ITAM样基序与Syk之间是否存在细胞内相互作用。结果体外激酶共沉淀-免疫印迹分析证明,在体外HTNV G1 ITAM样基序可以与Syk相互作用;哺乳动物细胞双杂交分析,进一步证实G1 ITAM样基序在哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用;而突变体分析表明,这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。结论 HTNV G1蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外和哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用,为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。

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