用Gateway技术克隆并表达汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序
作者单位：第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心
会议名称：《第七次全国肾综合征出血热学术会议》
会议日期：2006年
学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 07[理学] 071005[理学-微生物学] 10[医学]
关 键 词：汉坦病毒 囊膜糖蛋白类 免疫受体酪氨酸活化基序
摘 要：目的克隆并表达汉滩病毒G1蛋白胞浆区尾段ITAM样基序及其突变体。方法采用RT-PCR方法,扩增汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,然后应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI 中经L-阿拉伯糖诱导表达,免疫印迹确证融合蛋白的表达。结果成功地构建了2个含汉滩病毒G1胞浆区尾段ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-L、pDEST-ITAM和1个含保守酪氨酸残基突变的G1 ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-YY-FF(Y615F, Y628F),并在大肠埃希杆菌中得到高效表达,免疫印迹证实目的蛋白与GST融合表达。结论获得了3种与GST融合的G1 ITAM样基序及其突变基序的重组蛋白,为进一步探讨汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用奠定基础。