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化学激活和季节对克隆猪出生率的影响

中国科学（C辑） 2009年第4期39卷 384-391页

作者：马育芳卫恒习李燕李秋艳方锐赵蕊张坤薛恺娄颜坤戴蕴平连林生李宁中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100193 中国农业大学动物科技学院北京100193 北京济普霖生物技术有限公司北京100193

为了解化学激活对克隆猪出生效率的影响,研究了体外成熟的猪卵母细胞被激活恢复减数分裂到克隆猪出生的整个过程.首先研究了电激活(Ele),Ele+CHX+CB和Ele+6-DMAP3种激活方法对猪卵母细胞孤雌激活(parthenogenetic,PA)和核移植(nucleartr... 详细信息

为了解化学激活对克隆猪出生效率的影响,研究了体外成熟的猪卵母细胞被激活恢复减数分裂到克隆猪出生的整个过程.首先研究了电激活(Ele),Ele+CHX+CB和Ele+6-DMAP3种激活方法对猪卵母细胞孤雌激活(parthenogenetic,PA)和核移植(nucleartransfer,NT)重构胚体外发育的影响.比较了Ele或Ele+CHX+CB激活方法对克隆猪出生效率的影响.实验中单独列出了PA胚的扩张囊胚率或NT优质囊胚率来代表囊胚的质量.结果表明:化学联合激活提高了PA的囊胚率和扩张囊胚率,但对PA胚的卵裂率和囊胚细胞数没有显著影响(P>0.05).Ele+6-DMAP对PA胚的囊胚率和扩张囊胚率有显著提高(P激活方法使克隆猪出生率有所提高但不显著.本文还研究了季节对猪孤雌发育和克隆猪出生率的影响.结果表明,春季收集的猪卵母细胞使用3种激活方法卵母细胞的孤雌囊胚率均高于冬季收集的猪卵母细胞的囊胚率.春季和冬季进行移植,克隆猪出生率没有区别.综上,在PA中获得的结果与NT胚中获得的结果不一定完全匹配,说明孤雌激活和重构胚的激活机制还是有区别的.化学联合激活虽然能提高囊胚率,但它的作用相当于降低囊胚形成的门槛,却不是从本质上改变囊胚发育能力,因此不能显著提高克隆猪出生效率.春季收集的卵母细胞在体外培养中的发育能力好于冬季收集的卵母细胞,但季节对克隆猪出生率没有显著影响.

关键词：孤雌激活化学激活体细胞核移植克隆猪季节

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化学激活在小鼠生精细胞体外受精中的应用

化学激活在小鼠生精细胞体外受精中的应用

作者：黄静安徽医科大学

学位级别：硕士

第一部分小鼠单倍体精子细胞显微注射方法学研究目的：探讨改良持卵针的显微操作系统在小鼠精子细胞体外授精中的应用价值。方法：通过反复锻烧将常规持卵针制作成喇叭形开口状，制成改良持卵针，辅以独特的显微注射操作手法，... 详细信息

第一部分小鼠单倍体精子细胞显微注射方法学研究目的：探讨改良持卵针的显微操作系统在小鼠精子细胞体外授精中的应用价值。方法：通过反复锻烧将常规持卵针制作成喇叭形开口状，制成改良持卵针，辅以独特的显微注射操作手法，对小鼠生精细胞体外培养所获单倍体圆形精子进行卵胞浆内显微注射（ROSI），计算ROSI后30min昆明小白鼠卵母细胞的存活数和存活率，并与常规窄口持卵针行ROSI后的卵母细胞存活率进行比较。结果：分别采用常规和改良后的持卵针进行小鼠ROSI，每种方法各注射320个卵母细胞。改良持卵针组ROSI后30min的卵母细胞存活率显著高于未改进持卵针组（P＜0.05）。结论：改良持卵针制备简单，易于操作，ROSI后卵母细胞存活率高，且不需依赖piezo系统，在小鼠单倍体精子细胞体外受精的研究中有较高的临床应用价值。第二部分化学激活在小鼠圆形精子体外受精中的应用目的：通过对生精细胞体外培养所获圆形精子显微注射后的小鼠卵母细胞进行单一和联合化学激活，寻找小鼠圆形精子体外受精的最佳激活方案。方法：选取乙醇（ethanol，EH）、钙离子载体A23187（calcium ionophore A23187，CIA）、离子霉素（ionomycin，Ion）、氯化锶（strontium chloride，SrCl2）、放线菌酮（cycloheximide，CHX）及6-二甲基苯胺嘌呤（6-dimethylaminopurine，6-DMAP）作为外源性化学激活剂，采用不同浓度的单一化学激活剂对ROSI后的卵母细胞进行不同作用时间激活，观察其受精率、卵裂率和桑囊胚形成率。根据激活不同的途径，联合两种最佳激活浓度和激活时间的单一激活剂对ROSI后的卵母细胞进行联合激活，比较不同联合方案对卵母细胞的激活效果;并以成年小鼠睾丸内圆形精子ROSI作为对照，比较体内精子细胞和体外培养精子细胞的受精能力及胚胎发育潜能。结果：（1）单一激活时，各激活剂的最佳方案分别为①乙醇：7%、6min;②CIA：5μmol/L、5min;③Ion：5μmol/L、5min;④6-DMAP：2mmol/L、2h;⑤SrCl2：10mmol/L、1.5h;⑥CHX：10μg/mL、1.5h，其中10mmol/L SrCl2作用1.5h激活效果最佳，显著优于CHX方案，但与其它各组无显著性差异;（2）联合激活时，乙醇+6-二甲基苯胺嘌呤组桑囊胚率（29.63%）显著高于其它各组，以及除SrCl2以外所有单一激活方案（P＜0.05），为最佳联合激活方案;（3）对成年小鼠睾丸中圆形精子ROSI后的卵母细胞进行乙醇+6-二甲基苯胺嘌呤激活后，其正常受精率、卵裂率及桑囊胚率与体外培养所获圆形精子间均无显著性差异。结论：单一激活方案中10mmol/L SrCl2单独作用1.5h，联合方案中7%EH作用6min+2mmol/L6-DMAP作用2h对体外培养所获圆形精子ROSI后的卵母细胞激活效果最佳;体外培养所获圆形精子ROSI后受精率、胚胎发育潜能与成年小鼠睾丸内圆形精子间无显著性差异。

关键词：生精细胞圆形精子氯化物锶化学激活 ROSI

不同化学激活方法对小鼠卵母细胞孤雌激活效果的影响

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华南师范大学学报（自然科学版） 2010年第1期42卷 98-104页

作者：张玉影曾晓辉付晓兰李雪峰华南师范大学生命科学学院广东广州510631

通过比较几种常用的化学激活方法对小鼠卵母细胞的孤雌激活和孤雌生殖胚胎体外发育的影响,从而筛选出小鼠卵母细胞孤雌激活的适宜方法.选取成熟小鼠卵母细胞,随机分为以下9组进行激活处理:①离子霉素(I)+6-二甲氨基嘌呤(D);②I+D+细胞... 详细信息

通过比较几种常用的化学激活方法对小鼠卵母细胞的孤雌激活和孤雌生殖胚胎体外发育的影响,从而筛选出小鼠卵母细胞孤雌激活的适宜方法.选取成熟小鼠卵母细胞,随机分为以下9组进行激活处理:①离子霉素(I)+6-二甲氨基嘌呤(D);②I+D+细胞松弛素B(CB);③I+放线菌酮(C);④I+C+CB;⑤φ(乙醇)=7%的乙醇(E)+D;⑥E+D+CB;⑦E+C;⑧E+C+CB;⑨Sr2++CB.比较了这9种化学激活方法以及SrCl2的作用时间和卵龄对小鼠卵母细胞激活效果的影响.实验结果表明:小鼠卵母细胞孤雌激活率与激活措施和卵龄有关;小鼠卵母细胞可以被I+D+CB或SrCl2+CB有效激活,激活率及孵化囊胚发育率均高于其他激活方法(P激活的最适卵龄,其最佳处理时间为4h.对小鼠卵母细胞而言,6-DMAP比放线菌酮的激活效果好.

关键词：卵母细胞化学激活激活方法,小鼠

不同化学激活剂对牛卵丘细胞重构胚发育的影响

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中国畜牧兽医 2009年第1期36卷 73-76页

作者：王滇张春燕刘松柏杨利国华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

本研究主要研究了Ⅰ:Ionomycin+6-甲氨基嘌呤(6-DMAP)、Ⅱ:Ionomycin+放线菌酮(CHX)、Ⅲ:体积分数7%乙醇+6-DMAP、Ⅳ:体积分数7%乙醇+CHX 4种不同化学激活方法对牛胞质内卵丘细胞全细胞注射法所获得重构胚的激活及前期发育的影响。Ionom... 详细信息

本研究主要研究了Ⅰ:Ionomycin+6-甲氨基嘌呤(6-DMAP)、Ⅱ:Ionomycin+放线菌酮(CHX)、Ⅲ:体积分数7%乙醇+6-DMAP、Ⅳ:体积分数7%乙醇+CHX 4种不同化学激活方法对牛胞质内卵丘细胞全细胞注射法所获得重构胚的激活及前期发育的影响。Ionomycin和7%乙醇的处理时间为5 min,6-DMAP的处理时间为4 h,CHX的处理时间为5 h。结果表明,重构胚与颗粒细胞单层细胞共培养2 d后,各组卵裂率分别为52.6%、52.8%、53.8%和54.2%,差异不显著(P>0.05);培养8 d后,Ⅰ组激活的囊胚发育率(20.0%)极显著高于其他组(P激活的囊胚孵化率(10.7%)极显著高于其他组(P激活方法均可以有效的激活重构胚,但Ionomycin+6-DMAP法激活重构胚的囊胚率和囊胚孵化率均极显著高于其它3组,说明Ionomycin+6-DMAP激活法有利于牛重构胚的发育,可以获得较理想的囊胚率,是胞质内全细胞注射法克隆的理想激活方法。

关键词：牛卵母细胞胞质内直接注射重构胚胎化学激活

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奶牛卵母细胞化学激活与电激活比较研究

中国草食动物 2009年第3期29卷 38-39页

作者：马红黑龙江农业科学院哈尔滨150086

目前,体细胞核移植技术已在牛、羊、小鼠、猪等动物上获得成功, 然而该技术还存在许多问题,如核移植成功率普遍比较低、重构胚的发育率低、畸形胚的比率高等.影响这些问题的因素很多,其中就包括受体卵母细胞的体外培养成熟率和成熟质量... 详细信息

目前,体细胞核移植技术已在牛、羊、小鼠、猪等动物上获得成功, 然而该技术还存在许多问题,如核移植成功率普遍比较低、重构胚的发育率低、畸形胚的比率高等.影响这些问题的因素很多,其中就包括受体卵母细胞的体外培养成熟率和成熟质量[1]以及激活率[2]低下,本研究的目的就是探索出一套有效的牛卵母细胞体外成熟和激活的方法,为进一步的胚胎工程技术研究提供实验基础.

关键词：牛卵母细胞电激活化学激活体细胞核移植技术卵母细胞体外成熟胚胎工程技术体外培养实验基础

供体细胞的不同处理及重组胚化学激活对体细胞克隆胚胎发育的影响综述

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畜禽业 2005年第9期16卷 37-39页

作者：李晟阳罗光彬薛可纪英卓孙明亮沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161

哺乳动物体细胞克隆经过几年的发展,已取得了很大进展。已有多种细胞被采用并得到了克隆后代。但动物克隆效率仍然很低,供体细胞的选择和重组胚激活是动物克隆中的重要步骤。供体细胞的细胞周期、细胞类型、冷冻处理和化学激活等方面都... 详细信息

哺乳动物体细胞克隆经过几年的发展,已取得了很大进展。已有多种细胞被采用并得到了克隆后代。但动物克隆效率仍然很低,供体细胞的选择和重组胚激活是动物克隆中的重要步骤。供体细胞的细胞周期、细胞类型、冷冻处理和化学激活等方面都可能影响动物克隆的效率。

关键词：核移植供体细胞化学激活

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植物防卫机制的化学激活

精细化工化纤信息通讯 2002年第5期 2-5页

作者：高德霖张琪联合国南通农药剂型开发中心 226006

利用作物自身的防卫机制实现植物保护功能,是植保工作者长时间来梦寐以求、孜孜探索的目标。本文将在概述植物免疫系统和系统获得性抗性的基础上,着重论及几个最具代表性的化学激活剂,以期能在国内植保界和农药界中引起更为广泛的关注。

关键词：化学激活植物防卫机制化学激活剂系统获得性抗性苯并噻二唑硫代羧酸甲酯环丙酰菌胺水杨酸免疫系统植物保护

不同化学激活剂对牛卵丘细胞重构胚发育的影响

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不同化学激活剂对牛卵丘细胞重构胚发育的影响

不同化学激活剂对牛卵丘细胞重构胚发育的影响

中国奶业协会2008年会

作者：王滇张春燕刘松柏杨利国华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室

本研究主要研究了①Ionomycin+6-甲氨基嘌呤(6-DMAP)、②Ionomycin+放线菌酮(CHX)、③体积分数7%乙醇+6-DMAP、④体积分数7%乙醇+CHX四种不同化学激活方法对牛胞质内卵丘细胞全细胞注射法所获得重构胚的激活及前期发育的影响。Ionomycin... 详细信息

本研究主要研究了①Ionomycin+6-甲氨基嘌呤(6-DMAP)、②Ionomycin+放线菌酮(CHX)、③体积分数7%乙醇+6-DMAP、④体积分数7%乙醇+CHX四种不同化学激活方法对牛胞质内卵丘细胞全细胞注射法所获得重构胚的激活及前期发育的影响。Ionomycin和7%乙醇的处理时间为5min,6-DMAP的处理时间为4h,CHX的处理时间为5小时。结果表明,重构胚与颗粒细胞单层细胞共培养2d后,各组卵裂率分别为52.6%,52.8%,53.8%和54.2%,差异不显著(P>0.05);培养8d后,①组激活的囊胚发育率(20.0%)极显著高于其他组(P激活的囊胚孵化率(10.7%)极显著高于其他组(P激活方法均可以有效的激活重构胚,但lonomycin+6-甲氨基嘌呤(6-DMAP)法激活重构胚的囊胚率和囊胚孵化率均极显著高于其它3组,说明Ionophore+6-DMAP激活法有利于牛重构胚的发育,可以获得较理想的囊胚率,是胞质内全细胞注射法克隆的理想激活方法。

关键词：牛卵母细胞胞质内直接注射重构胚胎化学激活

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国奶牛 2008年第12期 15-18页

作者：王滇张春燕刘松柏杨利国华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

本文主要研究了①离子霉素(Ion)+6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)、②Ion+放线菌酮(CHX)、③体积分数7%乙醇+6-DMAP、④体积分数7%乙醇+CHX四种不同化学激活方法对牛胞质内卵丘细胞全细胞注射法所获得重构胚的激活及前期发育的影响。Ion和7%... 详细信息

本文主要研究了①离子霉素(Ion)+6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)、②Ion+放线菌酮(CHX)、③体积分数7%乙醇+6-DMAP、④体积分数7%乙醇+CHX四种不同化学激活方法对牛胞质内卵丘细胞全细胞注射法所获得重构胚的激活及前期发育的影响。Ion和7%乙醇的处理时间为5min,6-DMAP的处理时间为4h,CHX的处理时间为5h。结果表明,重构胚与颗粒细胞单层细胞共培养2d后,各组卵裂率分别为52.7%、51.5%、53.2%和54.0%,差异不显著(P>0.05);培养8d后,①组激活的囊胚发育率(20.0%)极显著高于其他组(P激活的囊胚孵化率(10.7%)极显著高于其他组(P激活方法均可以有效地激活重构胚,但Ion+6-DMAP法激活重构胚的囊胚率和囊胚孵化率均极显著高于其他3组,说明Ion+6-DMAP激活法有利于牛重构胚的发育,可以获得较理想的囊胚率,是胞质内全细胞注射法克隆的理想激活方法。

关键词：牛卵母细胞胞质内直接注射重构胚化学激活