不同化学激活剂对牛卵丘细胞重构胚发育的影响

作     者：王滇 张春燕 刘松柏 杨利国 WANG Dian;ZHANG Chun-yan;LIU Song-bai;YANG Li-guo

作者机构：华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2009年第36卷第1期

页      面：73-76页

学科分类：08[工学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 0836[工学-生物工程] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

基　　金：国家科技支撑计划子项目:公益性行业科技专项(Nyhyzx07-036) 国家科技支撑计划子项目:奶业发展重大关键技术研究与示范(2006BAD04A02-11) 

主　　题：牛 卵母细胞 胞质内直接注射 重构胚胎 化学激活 

摘      要：本研究主要研究了Ⅰ:Ionomycin+6-甲氨基嘌呤(6-DMAP)、Ⅱ:Ionomycin+放线菌酮(CHX)、Ⅲ:体积分数7%乙醇+6-DMAP、Ⅳ:体积分数7%乙醇+CHX 4种不同化学激活方法对牛胞质内卵丘细胞全细胞注射法所获得重构胚的激活及前期发育的影响。Ionomycin和7%乙醇的处理时间为5 min,6-DMAP的处理时间为4 h,CHX的处理时间为5 h。结果表明,重构胚与颗粒细胞单层细胞共培养2 d后,各组卵裂率分别为52.6%、52.8%、53.8%和54.2%,差异不显著(P0.05);培养8 d后,Ⅰ组激活的囊胚发育率(20.0%)极显著高于其他组(P0.01),其他各组之间差异不显著,分别为8.5%、10.2%和6.1%;培养10 d后,Ⅰ组激活的囊胚孵化率(10.7%)极显著高于其他组(P0.01),其他各组之间差异不显著,分别为2.3%、3.0%和1.8%。结果提示,4种激活方法均可以有效的激活重构胚,但Ionomycin+6-DMAP法激活重构胚的囊胚率和囊胚孵化率均极显著高于其它3组,说明Ionomycin+6-DMAP激活法有利于牛重构胚的发育,可以获得较理想的囊胚率,是胞质内全细胞注射法克隆的理想激活方法。