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免疫蛋白质组学及其在病原生物学中的研究进展

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国际医学寄生虫病杂志 2012年第5期39卷 304-309页

作者：洪炀傅志强朱传刚陆珂杨健美李浩石耀军苑纯秀林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

免疫蛋白质组学是蛋白质组学与免疫学相结合而产生的一门新兴的交叉学科。该文介绍了免疫蛋白质组学的研究技术及其在病原生物学中的应用，并对其在诊断抗原及疫苗分子筛选中的应用前景及发展的局限性进行了论述。

关键词：免疫蛋白质组学病原生物学应用

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嗜水气单胞菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究

中华微生物学和免疫学杂志 2015年第7期35卷 536-540页

作者：林玲余小岚姚祖杰李碗芯孙丽娜林向民林文雄福建农林大学生命科学学院福州350002

目的建立嗜水气单胞菌ATCC7966外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法。方法利用双向电泳技术对嗜水气单胞菌外膜蛋白进行分离，用LC-LTQ-XL质谱技术鉴定，并结合Westernblot技术寻找具有免疫应答的蛋白质。结果LC-LTQ-XL质谱共鉴定出43个... 详细信息

目的建立嗜水气单胞菌ATCC7966外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法。方法利用双向电泳技术对嗜水气单胞菌外膜蛋白进行分离，用LC-LTQ-XL质谱技术鉴定，并结合Westernblot技术寻找具有免疫应答的蛋白质。结果LC-LTQ-XL质谱共鉴定出43个肽段，共计39个蛋白质。这些蛋白质不仅有外膜蛋白（69％），还有内膜蛋白（12％）等，功能涉及物质运输、细胞运动和生物合成等领域。最终利用2D结合Westernblot技术找到了一个疫苗候选蛋白。结论成功建立了嗜水气单胞菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法，为将来发现更多候选疫苗提供理论基础。

关键词：嗜水气单胞菌外膜蛋白免疫蛋白质组学

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猪链球菌分泌蛋白的免疫蛋白质组学研究

中华流行病学杂志 2008年第3期29卷 267-271页

作者：孙强正罗霞叶长芸肖迪郑翰景怀琦徐建国中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206 中国疾病预防控制中心诊断室

目的寻找猪链球菌（S．suis）SC84菌株分泌蛋白中具有抗原活性的蛋白，为S．suis特异诊断抗原和新的疫苗候选抗原的筛选提供线索。方法采用免疫蛋白质组学和介质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOFMS）技术，分析和鉴定S、suisS... 详细信息

目的寻找猪链球菌（S．suis）SC84菌株分泌蛋白中具有抗原活性的蛋白，为S．suis特异诊断抗原和新的疫苗候选抗原的筛选提供线索。方法采用免疫蛋白质组学和介质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOFMS）技术，分析和鉴定S、suisSC84菌株分泌蛋白中能与感染病例恢复期血清发生免疫杂交的蛋白点。结果在S．suisSC84菌株分泌蛋白的免疫杂交膜上，共发现14个具有抗原活性的蛋白点，其中11个点可以在考马斯蓝染色胶上找到匹配点。11个蛋白点经质谱鉴定，分属于8种蛋白，全部定位于胞壁或胞外。其中溶菌酶释放蛋白、溶血素、细胞外因子为S、suis已知的抗原蛋白；5＇-核苷酸酶、ribonuclease sG和E、金属内肽酶等为新发现的具有抗原活性的蛋白；所有的蛋白均能在测序菌株S．suis 05ZYH33基因组中找到相应的编码基因。结论在S．suis分泌蛋白中发现了新的具有抗原活性的蛋白，可能作为S、suis特异诊断抗原和疫苗候选抗原，用于诊断试剂和疫苗的研究。

关键词：猪链球菌分泌蛋白免疫蛋白质组学

用免疫蛋白质组学方法筛选哈氏弧菌免疫反应蛋白

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水产学报 2010年第4期34卷 635-642页

作者：李岩庞欢瑛鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东海洋大学水产学院广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东海洋大学水产学院中国科学院南海海洋研究所中国科学院研究生院

用免疫蛋白质组学的研究方法鉴定了哈氏弧菌的免疫反应蛋白。将哈氏弧菌接种于TSB培养基28℃培养18h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,一向电泳采用7cmpH4～7的胶条进行等电聚焦,二向用12.5%的SDS-PAGE胶分离蛋白质,考马斯亮蓝染... 详细信息

用免疫蛋白质组学的研究方法鉴定了哈氏弧菌的免疫反应蛋白。将哈氏弧菌接种于TSB培养基28℃培养18h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,一向电泳采用7cmpH4～7的胶条进行等电聚焦,二向用12.5%的SDS-PAGE胶分离蛋白质,考马斯亮蓝染色,获得双向电泳图谱,再结合免疫转印技术检测免疫反应的蛋白质,利用ImageMaster 2D Platinum进行配对分析得到15个非特异性的免疫反应性蛋白点,30个特异性的免疫反应性蛋白点。经过鉴定得到13种非特异性的免疫反应性蛋白质,这其中有2对蛋白在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白;同时得到28种特异性的免疫反应性蛋白质,有一个蛋白点没有在数据库中查找到相对应的蛋白质,还有1对蛋白在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白。将特异性免疫反应蛋白鉴定结果与非特异性比较发现有1对蛋白鉴定为同一种蛋白;另外,No.17和No.19是F0F1 ATP synthase的两个亚基。特异性免疫反应蛋白鉴定结果中有6个蛋白质是已知的其他细菌的具有免疫反应的蛋白,分别为OmpN,OmpW,OmpU,alanine dehydrogenase,Elongation factor Ts(EF-Ts),cysteine synthase成功建立了哈氏弧菌的免疫蛋白质组学研究方法,筛选出28种具有特异性免疫反应的蛋白质,为哈氏弧菌的免疫蛋白研究提供理论依据和操作框架。

关键词：哈氏弧菌免疫蛋白质组学全菌可溶性蛋白双向电泳

运用免疫蛋白质组学方法筛选羊种布鲁氏菌免疫反应性蛋白

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中国科学：生命科学 2011年第9期41卷 739-747页

作者：赵忠鹏闫芳吉文汇罗德炎刘鑫邢丽段跃强杨鹏辉师秀敏李仲王希良北京微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 山西农业大学动物科技学院太谷030801

布鲁氏菌是布鲁氏菌病的病原体,能引起人类慢性感染,造成家畜流产和不孕.在不同种布鲁氏菌中,羊种布鲁氏菌毒力最强,在中国布鲁氏菌病流行中占主导地位.目前,还没有安全的用于预防人类布鲁氏菌感染的疫苗.用于预防家畜布鲁氏菌感染的弱... 详细信息

布鲁氏菌是布鲁氏菌病的病原体,能引起人类慢性感染,造成家畜流产和不孕.在不同种布鲁氏菌中,羊种布鲁氏菌毒力最强,在中国布鲁氏菌病流行中占主导地位.目前,还没有安全的用于预防人类布鲁氏菌感染的疫苗.用于预防家畜布鲁氏菌感染的弱毒活疫苗产生的抗体能够干扰对免疫动物感染布鲁氏菌野毒的诊断,从而对根除布鲁氏菌病的计划实施有负面影响.然而,羊种布鲁氏菌免疫蛋白质谱目前还不完善.为了研制更安全、有效且能区分野毒感染的疫苗,本研究应用免疫蛋白质组学技术筛选羊种布鲁氏菌疫苗株M5的免疫反应性蛋白.经二维电泳结合免疫杂交技术筛选到88个具有免疫反应性的蛋白质点,后经质谱鉴定其归属于61个蛋白,包括许多新的免疫反应性蛋白,如延伸因子G,F0F1ATP合成酶亚单位??,OMP1.本研究为布鲁氏菌病疫苗研制提供了许多免疫反应性候选蛋白.

关键词：布鲁氏菌免疫蛋白质组学免疫反应性蛋白

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布鲁氏菌外膜蛋白免疫蛋白质组学方法的建立

免疫学杂志 2008年第4期24卷 385-388页

作者：吴朔赵忠鹏罗德炎叶艺王希良于三科西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,筛选布鲁氏菌保护性抗原。方法利用双向电泳技术对实验条件下培养的布鲁氏菌疫苗株M5外膜蛋白进行分离,结合WB(Western blotting)技术寻找发生免疫反应的蛋白质。结果21个免疫蛋白点... 详细信息

目的建立布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,筛选布鲁氏菌保护性抗原。方法利用双向电泳技术对实验条件下培养的布鲁氏菌疫苗株M5外膜蛋白进行分离,结合WB(Western blotting)技术寻找发生免疫反应的蛋白质。结果21个免疫蛋白点经胶内酶切、肽提取后用基质辅助激光解析/电子飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定。每个蛋白点的肽质量指纹图谱用Mascot进行检索后,代表了12个开放阅读框。这些蛋白不全是外膜蛋白,还存在胞浆蛋白,其功能涉及生物合成和物质代谢等领域,还有一个功能未知的蛋白。结论成功建立了布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,为寻找保护性抗原及为新型疫苗抗原候选提供新思路。

关键词：布鲁氏菌外膜蛋白双向电泳质谱免疫蛋白质组学

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炭疽杆菌A16R免疫蛋白质组学的研究

炭疽杆菌A16R免疫蛋白质组学的研究

作者：任静晓华中农业大学

学位级别：硕士

炭疽是由炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis, BA）引起的一种烈性人畜共患传染病。由于炭疽芽孢易于大量培养、极难被杀灭、可通过气溶胶途径传播,并且引起的吸入性肺炭疽死亡率较高等特点,所以长期以来一直被某些国家认为是首选的生物... 详细信息

炭疽是由炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis, BA）引起的一种烈性人畜共患传染病。由于炭疽芽孢易于大量培养、极难被杀灭、可通过气溶胶途径传播,并且引起的吸入性肺炭疽死亡率较高等特点,所以长期以来一直被某些国家认为是首选的生物战剂。自美国“911”事件发生后,BA研究再次成为世界各国关注的热点。而预防炭疽最有效的方法是疫苗,所以炭疽疫苗的研究成为目前研究的热点,而从BA中筛选具有免疫原性的蛋白质则是疫苗设计的关键。本研究采用蛋白质组学研究方法,大规模筛选BA营养体和芽孢蛋白中可能存在的免疫原性蛋白质,这将为我们深化炭疽芽孢杆菌的认识,以及检测、诊断炭疽芽孢杆菌与对炭疽的早期治疗提供靶标。主要研究结果如下：以BA A16R菌株为实验菌株,采用固态培养,在含有200 mL的LB固态培养基的罗氏瓶内进行培养,先放于37℃的培养箱内正置一天后,再倒置于30℃培养箱内培养10-15 d,用4℃灭菌纯水清洗培养基表面,8000r／min离心10 min收集芽孢,直至复红美兰染色观察芽孢纯度达到98%为止。然后将收集的芽孢用2 mL的4℃灭菌纯水重悬,稀释涂板计数,得到芽孢浓度为5.5×109CFU／mL。以收集纯化的芽孢免疫4只新西兰大白兔,首次家兔腹股沟免疫,间隔14d后耳静脉免疫2次,后来采用皮下多点免疫,且免疫相隔7d,共免疫5次,以间接ELISA测定血清效价达到12800。免疫印迹实验验证了,所制备的血清可以与炭疽蛋白发生反应,所以制备出的血清为下一步筛选具有免疫原性的蛋白点提供了材料。采用超声裂解方法分别制备BAA16R菌株的营养体和芽孢蛋白样品,蛋白样品经双向电泳分离,电转膜后,用上述制备的多克隆抗体进行免疫印迹。然后将双向电泳的考马斯亮蓝染色胶图与免疫印迹曝光图匹配比对,找出匹配的蛋白点后,进行胶内酶切和质谱鉴定。结果表明,BA的营养体蛋白样品中有86个具有免疫原性的蛋白点,BA的芽孢蛋白样品中有13个具有免疫原性的蛋白点。在这些免疫原性的蛋白点中,19种蛋白质在以前的文献中被报导外,其他的蛋白质均未见报道。本研究结果为BA新疫苗的研发提供了新线索。

关键词：炭疽芽孢杆菌芽孢蛋白营养体蛋白抗原免疫蛋白质组学

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布鲁氏杆菌免疫蛋白质组学的研究进展

中国动物传染病学报 2013年第5期21卷 82-86页

作者：吴永平尹伟邵春艳张小东浙江农林大学动物科技学院临安311300 浙江大学医学院公共技术支撑体系成像平台杭州310058

布鲁氏杆菌(Brucella)是一种兼性胞内寄生菌,可以作为生物武器使用。布鲁氏杆菌病(Brucellosis,简称"布病")是由布鲁氏杆菌引起的严重危害人类健康和畜牧业发展的重要传染病,是世界性的公共卫生问题。免疫蛋白质组学是以双向电泳、生物... 详细信息

布鲁氏杆菌(Brucella)是一种兼性胞内寄生菌,可以作为生物武器使用。布鲁氏杆菌病(Brucellosis,简称"布病")是由布鲁氏杆菌引起的严重危害人类健康和畜牧业发展的重要传染病,是世界性的公共卫生问题。免疫蛋白质组学是以双向电泳、生物质谱及生物信息学为主要技术支撑的蛋白质组学与传统免疫印迹技术相结合而产生的一门学科。本文主要综述了免疫蛋白质组学在布鲁氏杆菌研究中的应用及意义。

关键词：布鲁氏杆菌免疫蛋白质组学研究进展

甲型副伤寒沙门氏菌CMCC 50973外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究

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甲型副伤寒沙门氏菌CMCC 50973外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究

作者：王斌中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

伤寒是一种急性全身性感染，包括伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)引起的伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A，B and C)引起的副伤寒。甲型副伤寒沙门氏菌是甲型副伤寒的病原菌，通过粪—口途径传播，感染剂量为10... 详细信息

伤寒是一种急性全身性感染，包括伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)引起的伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A，B and C)引起的副伤寒。甲型副伤寒沙门氏菌是甲型副伤寒的病原菌，通过粪—口途径传播，感染剂量为10～10，人是唯一宿主。人群对甲型副伤寒沙门氏菌普遍易感，但儿童和青壮年发病最高。现在据估计每年全球伤寒(包括副伤寒)患者约2200万，死亡超过20万人。自1996年以来，我国的甲型副伤寒的发病率也在逐年升高。更为严重的是，甲型副伤寒沙门氏菌临床耐药株以及多重耐药株(MDR)已经相当广泛，使临床治疗变得更加困难，一些患者由于治疗不彻底而成为带菌者。因此，需要研究出安全、高效、简便、经济的疫苗来预防甲型副伤寒。免疫蛋白质组学是通过双向电泳分离病原蛋白质组，再用不同病人的超免血清鉴定出有强免疫性的蛋白，这一蛋白质组的分支，很有希望成为寻找药物和疫苗靶位的有效途径(因为证明这些蛋白能引起宿主的免疫应答)。甲型副伤寒沙门氏菌是无荚膜的革兰氏阴性菌，其外膜蛋白在致病和刺激机体免疫应答方面有非常重要的作用。因为细菌的膜蛋白(尤其是外膜蛋白)抗原，往往是一些反应性抗原，它们与机体免疫系统有十分密切的相互作用。因此，在疫苗研究中，病原体的表面蛋白具有很重要的地位。本实验提取了甲型副伤寒沙门氏菌的外膜蛋白，建立了甲型副伤寒沙门氏菌的外膜蛋白双向电泳参考图谱。在考马斯亮兰染色的胶上共取了80个外膜蛋白点，鉴定出61个，代表30种蛋白。结合根据基因组预测的外膜蛋白对鉴定的所有蛋白质点的等电点/分子量吻合程度、分布以及功能分类等进行了初步的分析。进一步采用免疫蛋白质组的方法，对提取细菌的外膜蛋白进行双向电泳分离后，再转移到PVDF膜上，与甲型副伤寒病人恢复期的血清进行免疫印迹反应，记录具有免疫反应的外膜蛋白点。在考马斯亮兰染色的胶上取外膜蛋白点以及有免疫反应的蛋白点，酶切后进行MALDI-TOF质谱鉴定。在PVDF膜上共有45个免疫反应点，鉴定到42个点，代表23种蛋白质抗原，采用psort(***)软件分析，外膜蛋白13种，胞质蛋白3种，定位不明确(可能是多处定位)1种，未知定位6种。这些蛋白有希望成为药靶或疫苗的候选成分。

关键词：甲型副伤寒沙门氏菌免疫蛋白质组学外膜蛋白