甲型副伤寒沙门氏菌CMCC 50973外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究

作     者：王斌 

作者单位：中国人民解放军军事医学科学院 

学位级别：硕士

导师姓名：章金刚

授予年度：2006年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：甲型副伤寒沙门氏菌 免疫蛋白质组学 外膜蛋白 

摘      要：伤寒是一种急性全身性感染，包括伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)引起的伤寒和甲、乙、丙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A，B and C)引起的副伤寒。甲型副伤寒沙门氏菌是甲型副伤寒的病原菌，通过粪—口途径传播，感染剂量为10～10，人是唯一宿主。人群对甲型副伤寒沙门氏菌普遍易感，但儿童和青壮年发病最高。现在据估计每年全球伤寒(包括副伤寒)患者约2200万，死亡超过20万人。自1996年以来，我国的甲型副伤寒的发病率也在逐年升高。更为严重的是，甲型副伤寒沙门氏菌临床耐药株以及多重耐药株(MDR)已经相当广泛，使临床治疗变得更加困难，一些患者由于治疗不彻底而成为带菌者。因此，需要研究出安全、高效、简便、经济的疫苗来预防甲型副伤寒。 免疫蛋白质组学是通过双向电泳分离病原蛋白质组，再用不同病人的超免血清鉴定出有强免疫性的蛋白，这一蛋白质组的分支，很有希望成为寻找药物和疫苗靶位的有效途径(因为证明这些蛋白能引起宿主的免疫应答)。甲型副伤寒沙门氏菌是无荚膜的革兰氏阴性菌，其外膜蛋白在致病和刺激机体免疫应答方面有非常重要的作用。因为细菌的膜蛋白(尤其是外膜蛋白)抗原，往往是一些反应性抗原，它们与机体免疫系统有十分密切的相互作用。因此，在疫苗研究中，病原体的表面蛋白具有很重要的地位。 本实验提取了甲型副伤寒沙门氏菌的外膜蛋白，建立了甲型副伤寒沙门氏菌的外膜蛋白双向电泳参考图谱。在考马斯亮兰染色的胶上共取了80个外膜蛋白点，鉴定出61个，代表30种蛋白。结合根据基因组预测的外膜蛋白对鉴定的所有蛋白质点的等电点/分子量吻合程度、分布以及功能分类等进行了初步的分析。进一步采用免疫蛋白质组的方法，对提取细菌的外膜蛋白进行双向电泳分离后，再转移到PVDF膜上，与甲型副伤寒病人恢复期的血清进行免疫印迹反应，记录具有免疫反应的外膜蛋白点。在考马斯亮兰染色的胶上取外膜蛋白点以及有免疫反应的蛋白点，酶切后进行MALDI-TOF质谱鉴定。在PVDF膜上共有45个免疫反应点，鉴定到42个点，代表23种蛋白质抗原，采用psort(***)软件分析，外膜蛋白13种，胞质蛋白3种，定位不明确(可能是多处定位)1种，未知定位6种。这些蛋白有希望成为药靶或疫苗的候选成分。