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僧帽牡蛎EGFR基因的克隆及早期发育阶段的表达

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厦门大学学报（自然科学版） 2010年第6期49卷 756-763页

作者：许茜秦骥柯才焕厦门大学海洋与环境学院福建厦门361005

僧帽牡蛎(Crassostrea angulata)也称葡萄牙牡蛎,是我国广泛分布的一种传统大宗养殖贝类.本研究利用消减杂交文库结合RACE技术,从僧帽牡蛎中克隆获得了表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)的cD-NA全长序列.EGFR基... 详细信息

僧帽牡蛎(Crassostrea angulata)也称葡萄牙牡蛎,是我国广泛分布的一种传统大宗养殖贝类.本研究利用消减杂交文库结合RACE技术,从僧帽牡蛎中克隆获得了表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)的cD-NA全长序列.EGFR基因cDNA序列1 608 bp,编码298个氨基酸,预测存在1个跨膜结构域和5个酪蛋白激酶II磷酸化位点.构建了该基因的UPGMA进化树,比对发现其氨基酸序列与高等动物的差异较大.给出了该基因的标准曲线,利用RT-PCR技术检测了该基因在僧帽牡蛎胚胎发育早期阶段的表达量变化.该基因从僧帽牡蛎发育的卵到D型幼虫期间均有表达.其中早期的卵母细胞和后期的担轮幼虫,D型幼虫阶段表达量较高,表明该基因在牡蛎幼体胚胎发育早期具有阶段性调控的作用.

关键词：僧帽牡蛎 EGFR RACE 早期发育阶段

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僧帽牡蛎幼体附着和变态的诱导

水产学报 2000年第3期24卷 229-234页

作者：柯才焕李少菁李复雪郑重厦门大学海洋系!福建厦门361005

采用外加人工化学物质检验对僧帽牡蛎眼点幼体的附着和变态诱导活性 ,结果表明 :去甲肾上腺素、肾上腺素和L 多巴可有效诱导幼体不固着变态。在药物持续作用下 ,肾上腺素的最佳诱导浓度为 1 0 -5mol·L-1（变态率 6 7.4% ） ,去甲肾上... 详细信息

采用外加人工化学物质检验对僧帽牡蛎眼点幼体的附着和变态诱导活性 ,结果表明 :去甲肾上腺素、肾上腺素和L 多巴可有效诱导幼体不固着变态。在药物持续作用下 ,肾上腺素的最佳诱导浓度为 1 0 -5mol·L-1（变态率 6 7.4% ） ,去甲肾上腺素的最佳诱导浓度为 5× 1 0 -5mol·L-1（变态率 5 2 .2 % ） ,L -多巴的最佳诱导浓度为 1 0 -5mol·L-1（变态率 43.0 % ） ,而对照组变态率为 0。幼体大多在药物作用 1 2～ 2 4h之间完成变态。三种药物诱导的变态个体中有 85 %以上是不固着变态。比较多种附着基和EPI的变态诱导活性 ,显示同种贝壳的活性较肾上腺素还高。去甲肾上腺素诱导幼体变态效应对低盐海水有较强耐受能力 ,而对高盐海水适应性差

关键词：僧帽牡蛎附着变态

僧帽牡蛎EGFR基因的原核表达及其在幼体附着变态过程中的表达特性

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厦门大学学报（自然科学版） 2012年第2期51卷 263-267页

作者：韩国栋杨丙晔秦骥柯才焕厦门大学海洋与环境学院福建厦门361005

扩增僧帽牡蛎(Crassostrea gigas angulata)的表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)基因,并与pET32a(+)载体连接,构建pET32a(+)/EGFR重组质粒.将重组质粒导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),成功地表达并纯化了一个50ku的重组蛋白.采用RT-PCR技术,检测了僧帽牡蛎幼体附着变态前后EGFR基因表达量的变化,结果表明,EGFR基因在附着变态前的浮游幼体阶段和附着变态24h后的稚贝阶段低表达,附着后1～6h强烈表达,这预示着EGFR基因在僧帽牡蛎幼体附着变态这一生物学过程中具有重要作用.

关键词：僧帽牡蛎 EGFR 原核表达附着变态

温度、盐度及交互作用对僧帽牡蛎(Saccostrea cucullata)呼吸排泄的影响

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生态学报 2017年第2期37卷 692-699页

作者：焦海峰郑丹严巧娜尤仲杰严小军宁波市海洋与渔业研究院宁波315012 宁波大学海洋学院宁波315211 宁波市江北区海洋与渔业局宁波315020

采用实验生态学方法研究了温度(13、18、23、28、31、34℃)和盐度(18、23、28、33)对僧帽牡蛎(Saccostrea cueullata)耗氧率和排氨率的影响,并分析了二者交互作用对呼吸排泄的影响。结果表明,不同温度条件下,僧帽牡蛎的耗氧率变化范围为... 详细信息

采用实验生态学方法研究了温度(13、18、23、28、31、34℃)和盐度(18、23、28、33)对僧帽牡蛎(Saccostrea cueullata)耗氧率和排氨率的影响,并分析了二者交互作用对呼吸排泄的影响。结果表明,不同温度条件下,僧帽牡蛎的耗氧率变化范围为0.43-3.15mg g^(-1)h^(-1),排氨率的变化范围为72.62-1245.77μg g^(-1)h^(-1),方差分析显示,温度和盐度对僧帽牡蛎耗氧率(F=60.440,P僧帽牡蛎耗氧率(F=4.907,P僧帽牡蛎单位体重耗氧率(Y)与温度(T)呈正相关符合指数方程Y=ae^(bT),其中a的取值范围为0.1378-0.2117,b的取值范围为0.0757-0.0912;单位体重排氨率也与温度呈正相关,符合上述指数方程,其中a的取值范围为20.364-30.634,b的取值范围为0.1004-0.1341。不同温度和盐度条件下,僧帽牡蛎呼吸排泄的氧氮比在2.20-7.78之间,平均值为3.81。

关键词：僧帽牡蛎温度盐度耗氧率排氮率

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僧帽牡蛎三倍体的研究

海洋通报 1994年第6期13卷 34-40页

作者：曾志南陈木林琪陈朴贤刘伟斌福建省水产研究所厦门361012

报道了用细胞松驰素B、高温休克和低温休克方法诱导憎帽牡蛎三倍体的实验结果.在25.0～26.0℃条件下,进行不同浓度梯度的细胞松驰素B(0.1、0.5、1.0和1.5mg/L)和不同的处理时间的诱导实验.结果表明,在受精后18min用1.5mg/L细胞松驰素B... 详细信息

报道了用细胞松驰素B、高温休克和低温休克方法诱导憎帽牡蛎三倍体的实验结果.在25.0～26.0℃条件下,进行不同浓度梯度的细胞松驰素B(0.1、0.5、1.0和1.5mg/L)和不同的处理时间的诱导实验.结果表明,在受精后18min用1.5mg/L细胞松驰素B处理受精卵15min,三倍体诱导率最高,达87.5%.用高温休克方法,在受精后18min分别于32.0、35.0、37.0和39.0℃处理受精卵10min,三倍体诱导率分别为4.1%、37.0%、55.2%和42.5%.低温休克方法,在受精后22min于0～1.0℃的2.0℃分别处理受精卵10min,三倍体诱导率分别为36.7%和23.5%.实验性育苗结果显示实验组的幼虫和稚贝的生长速度明显比对照组快.还就细胞松驰素B和温度休克诱导三倍体的机制及对僧帽牡蛎胚胎及早期幼虫发育的影响进行了讨论.

关键词：僧帽牡蛎细胞松驰素B 低温休克三倍体

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僧帽牡蛎碱性磷酸酶性质的研究

台湾海峡 2003年第4期22卷 475-481页

作者：陈巧陈清西林建城廖金花厦门大学生命科学学院教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室福建厦门361005

从僧帽牡蛎分离纯化出一种碱性磷酸酶,采用Sephadex G-200凝胶过滤柱层析法测得该酶分子量为1.57×10~5.以对硝基苯磷酸为底物,该酶的最适温度为43℃,最适pH值为10.0.在37℃和pH值为10.0的条件下,酶催化反应的米氏常数(K_m)为9.68×10^(... 详细信息

从僧帽牡蛎分离纯化出一种碱性磷酸酶,采用Sephadex G-200凝胶过滤柱层析法测得该酶分子量为1.57×10~5.以对硝基苯磷酸为底物,该酶的最适温度为43℃,最适pH值为10.0.在37℃和pH值为10.0的条件下,酶催化反应的米氏常数(K_m)为9.68×10^(-4)mol/dm^3,活化能(E_a)为45.85kJ/mol,温度系数(Q_(10))为1.80(30～40℃).对该酶的热稳定性研究表明:其在45℃以下较为稳定,50℃以上明显失活,并测定了该酶的热失活速度常数.金属离子对酶活力的效应研究结果表明:Mg^(2+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)、Co^(2+)对酶有激活作用,Ag^+、Hg^(2+)、Zn^(2+)表现为抑制作用,Cd^(2+)几乎没有影响.Mg^(2+)是较有效的激活剂,表现为部分非竞争性效应,激活常数(K_a)为2.48×10^(-4)mol/dm^3,有Mg^(2+)存在时该酶活性中心的转换数量是无Mg^(2+)时的4.0倍.几种效应物对酶的抑制机理研究表明:HPO_4^(2-)、HAsO_4^(2-)、Cys为竞争性,其抑制常数分别为1.61、1.18和0.15mmol/dm^3;L-Phe为反竞争性,抑制常数为3.26mmol/dm^3.

关键词：僧帽牡蛎碱性磷酸酶热稳定性金属离子抑制剂海洋生物

僧帽牡蛎天然活性肽组分BPO-1诱导人胃腺癌BGC-823细胞凋亡作用与机理研究

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僧帽牡蛎天然活性肽组分BPO-1诱导人胃腺癌BGC-823细胞凋亡作用与...

作者：李鹏厦门大学

学位级别：硕士

采用酸抽提、凝胶柱层析、SDS-PAGE 等方法，从僧帽牡蛎(Saccostrea cucullata)体内分离提取到牡蛎天然活性多肽组分(BPO-1，Bioactive Peptides of Oyster in Peak I)，处理人胃腺癌BGC-823细胞，观察研究BPO-1对胃癌细胞的生物学效... 详细信息

采用酸抽提、凝胶柱层析、SDS-PAGE 等方法，从僧帽牡蛎(Saccostrea cucullata)体内分离提取到牡蛎天然活性多肽组分(BPO-1，Bioactive Peptides of Oyster in Peak I)，处理人胃腺癌BGC-823细胞，观察研究BPO-1对胃癌细胞的生物学效应，以细胞凋亡诱导物姜黄素和癌细胞分化诱导物HMBA为平行对照，比较研究BPO-1对人胃腺癌BGC-823细胞的生物学效应，并进一步探索其对胃癌细胞的作用机理。实验结果表明，40μg／mL 的BPO-1 能有效抑制BGC-823细胞增殖活动，细胞生长受到明显抑制，细胞分裂指数下降。免疫细胞化学观察显示，经40μg／mL BPO-1 处理后的BGC-823细胞，碱性磷酸酶活性下降。光镜、透射电镜观察显示经处理后的BGC-823细胞趋于固缩状态，细胞体积减小，核膜崩解，细胞核出现断裂现象形成多个小体，异染色质增多且多为凝聚状态，细胞质空泡化明显，出现凋亡小体等典型的细胞凋亡形态和超微结构特征。流式细胞仪检测和DNA电泳实验显示BGC-823细胞经BPO-1、姜黄素及其组合处理后，亚G1期细胞增多，出现DNA 降解，细胞进入凋亡。BPO-1这一作用与10μg／mL姜黄素对BGC-823细胞的凋亡作用一致，且BPO-1与姜黄素联合处理作用更强，而与HMBA诱导BGC-823细胞的分化作用不同。免疫细胞化学检测显示，BPO-1、姜黄素及其组合均能不同程度地上调BGC-823细胞p16、 c-myc、Fas、p21AFI/CIPI 蛋白表达，下调突变型p53、 bcl-2 蛋白表达。研究结果表明，BPO-1 能有效抑制人胃腺癌 BGC-823 细胞恶性增殖活动，改变人胃腺癌细胞代谢相关酶活性和肿瘤相关抗原表达，改变人胃腺癌细胞的恶性形态与超微结构特征，并诱导胃癌细胞周期发生变化，出现亚G1期，从而对胃癌细胞具有显著的诱导凋亡作用。其诱导癌细胞作用机理与调节和干预bcl-2、 c-myc 等癌基因、p53、 p16、 p21AFI/CIPI等抑癌基因的表达有关。

关键词：海洋生物活性物质僧帽牡蛎天然活性多肽胃癌细胞细胞凋亡

僧帽牡蛎二倍体和三倍体卵母细胞发育的超微结构比较

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台湾海峡 2000年第3期19卷 350-353页

作者：林琪曾志南吴建绍陈朴贤陈木福建省水产研究所厦门361012

本文利用电子显微镜技术观察僧帽牡蛎二倍体和三倍体初级卵母细胞发育过程中细胞和细胞器的超微结构变化。结果表明 :二倍体和三倍体卵母细胞发育差异明显。在卵黄形成期 ,二倍体卵母细胞呈椭圆形 ,细胞核呈伪足状突起 ,核仁呈颗粒状聚... 详细信息

本文利用电子显微镜技术观察僧帽牡蛎二倍体和三倍体初级卵母细胞发育过程中细胞和细胞器的超微结构变化。结果表明 :二倍体和三倍体卵母细胞发育差异明显。在卵黄形成期 ,二倍体卵母细胞呈椭圆形 ,细胞核呈伪足状突起 ,核仁呈颗粒状聚合体 ,细胞器多发达 ,合成卵黄粒多 ,细胞膜外有微绒毛 ,卵母细胞生物合成旺盛、代谢活动强 ;而三倍体卵母细胞大都呈不规则形状 ,核仁小、致密 ,细胞器少且不发达 ,卵黄粒少 ,细胞膜外无微绒毛 ,卵母细胞生物合成及代谢弱。

关键词：僧帽牡蛎二倍体三倍体卵母细胞超微结构

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僧帽牡蛎三倍体和二倍体的生长比较

中国水产科学 1999年第4期6卷 59-61页

作者：曾志南林琪吴建绍陈朴贤陈木福建省水产研究所!厦门361012

１９９３年采用高温（３７ ℃）休克处理受精卵１５ｍｉｎ，抑制第一极体排放诱导出僧帽牡蛎三倍体，在早期幼虫阶段，处理组幼虫平均壳长显著较对照组大，经过１年的养殖，三倍体壳长、壳高、软体部湿重和干重分别比二倍体增加１... 详细信息

１９９３年采用高温（３７ ℃）休克处理受精卵１５ｍｉｎ，抑制第一极体排放诱导出僧帽牡蛎三倍体，在早期幼虫阶段，处理组幼虫平均壳长显著较对照组大，经过１年的养殖，三倍体壳长、壳高、软体部湿重和干重分别比二倍体增加１３．２％、８．９％、１２４．６％和８７．１％。１９９７年采用０．５ｍｇ／Ｌ细胞松弛素Ｂ在５０％受精卵出现第一极体时处理受精卵１５ｍｉｎ诱导出僧帽牡蛎三倍体，经过１４个月养殖，三倍体壳长、壳高、体重和软体部湿重分别比二倍体增加３９．２６％、１７．２５％、７２．５０％和１１８．４２％，除个别月份外，三倍体和二倍体的生长差异显著（Ｐ＜０．０５），僧帽牡蛎三倍体较二倍体具有明显的生长优势。

关键词：僧帽牡蛎三倍体二倍体生长