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爱普列特抑制体外培养的大鼠前列腺上皮细胞生长(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第3期22卷 67-73页

作者：武淑芳孙宏志屠曾宏吴虹燕上海中国 200032 中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所中国科学院上海生命科学研究院上海药物研究所上海中国 200031 复旦大学医学院附属上海市第一人民医院泌尿科

目的:研究爱普列特对体外培养前列腺上皮细胞表皮生长因子受体和胰岛素样生长因子-Ⅰ受体表达的影响,探讨其抗前列腺增生的分子机制。方法:MTT法检测爱普列特对外源性表皮生长因子(epider-mal growth factof,EGF),胰岛素样生长因Ⅰ(insu... 详细信息

目的:研究爱普列特对体外培养前列腺上皮细胞表皮生长因子受体和胰岛素样生长因子-Ⅰ受体表达的影响,探讨其抗前列腺增生的分子机制。方法:MTT法检测爱普列特对外源性表皮生长因子(epider-mal growth factof,EGF),胰岛素样生长因Ⅰ(insulin-like growth factor Ⅰ,IGF-Ⅰ)诱导的大鼠前列腺上皮细胞增殖的作用,逆转录PCR及流式细胞术定量检测体外培养前列腺上皮细胞EGFR和IGF-ⅠR mRNA及蛋白表达。结果:爱普列特180nmol/L和360nmol/L可以明显抑制IGF-Ⅰ5,25μg/L诱导的细胞增殖;爱普列特360 nmol/L可以抑制EGF25μg/L诱导的细胞增殖;爱普列特360nmol/L可以明显下调EGFR、IGF-ⅠR mRNA的表达,而爱普列特180nmol/L则没有明显作用;爱普列特180nmol/L和360nmol/L均可以明显下调EGFR和IGF-ⅠR蛋白的表达。结论:爱普列特抗前列腺增生的分子机制与纠正增生时异常表达的生长因子有关。

关键词：爱普列特前列腺上皮培养的细胞表皮生长因子受体 IGF Ⅰ型受体逆转录聚合酶链反应流式细胞术

去上皮对离体气管平滑肌反应性的影响(英文)

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中国药理学报 1994年第4期15卷 344-346页

作者：李锦张海娟靳素珍杨贺松承德医学院药理教研室

去上皮致敏豚鼠气管标本对乙酰胆碱。组胺,P物质和氯化钡的敏感性比未去上皮标本为高。上述药物在去上皮标本上得到的EC_(50)仅为未去上皮的1/6—1/30。由抗原抗体反应或电场刺激所引起的去上皮标本的收缩幅度和对照组相比升高了50％—... 详细信息

去上皮致敏豚鼠气管标本对乙酰胆碱。组胺,P物质和氯化钡的敏感性比未去上皮标本为高。上述药物在去上皮标本上得到的EC_(50)仅为未去上皮的1/6—1/30。由抗原抗体反应或电场刺激所引起的去上皮标本的收缩幅度和对照组相比升高了50％—100％。这些实验结果提示,气管上皮对呼吸道,尤其是对其过敏性收缩具有重要调节作用。

关键词：乙酰胆碱组胺 P物质气管上皮

离子电渗介导的跨上皮角膜交联术治疗较薄型圆锥角膜的早期疗效观察

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中华眼科杂志 2015年第9期51卷 677-682页

作者：林志荣吴护平罗顺荣刘昭升董诺商旭敏李学治厦门大学附属厦门眼科中心眼表与角膜病科 361001

目的探讨离子电渗技术介导的跨上皮角膜交联术（i-CXL）治疗较薄型圆锥角膜的早期临床效果.方法前瞻性非随机临床研究.2013年5至12月间在厦门大学附属厦门眼科中心确诊为进展期圆锥角膜且符合最薄角膜厚度（含上皮）为380～ 420 μm... 详细信息

目的探讨离子电渗技术介导的跨上皮角膜交联术（i-CXL）治疗较薄型圆锥角膜的早期临床效果.方法前瞻性非随机临床研究.2013年5至12月间在厦门大学附属厦门眼科中心确诊为进展期圆锥角膜且符合最薄角膜厚度（含上皮）为380～ 420 μm的患者,予住院治疗并进行i-CXL术.在术前和术后1周内,术后1、3、6及12个月时分别进行疼痛及异物感评分、裂隙灯检查、裸眼与矫正视力、角膜地形图、前节OCT、角膜内皮细胞计数及角膜共聚焦显微镜检查,记录并配对t检验进行统计分析.结果绝大多数患者接受i-CXL术后1d时存在中度疼痛和异物感,在术后3d时基本消失.术后早期存在少量角膜上皮缺损,术后3d内完全修复.部分患者裸眼视力提高,部分患者最佳矫正视力提高.术后3至12个月的角膜最大曲率及最小曲率均低于术前,其中术后第12个月Kmax值为（52.94±4.87）,术前为（54.37±5.56）,术后第12个月最小曲率Kmin值为（46.78±3.71）,术前为（48.53±3.57）,差异均具有统计学意义（Kmax,t=2.912,P＜0.01;Kmin,t=2.508,P＜0.05）.术后1个月内,前节OCT可见浅层基质密度增高,前后基质间存在“分界线”;共聚焦显微镜下可见浅层基质内纤维增粗,纤维间连接增加,深度约133 μm.术前及术后12个月角膜内皮细胞密度差异无统计学意义（t=0.915,P＞0.05）.所有患者未见角膜感染、瘢痕、角膜溃疡、持续性上皮缺损等并发症.结论 i-CXL治疗进展期圆锥角膜效果良好,尤其适用于最薄角膜厚度约400 μm者;其手术时间短,恢复快,几乎无明显不良反应.

关键词：圆锥角膜胶原交联试剂离子透入法核黄素上皮角膜

BIGH3基因定点突变体R555W的构建及其对人角膜上皮细胞的影响

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中华眼科杂志 2010年第1期46卷 56-61页

作者：葛红岩宋甄施展刘平哈尔滨医科大学附属第一临床医学院眼科 150001

目的构建野生型BIGH3和突变型R555W—BIGH3基因的真核表达载体，探讨其过表达对人角膜上皮细胞的影响。方法以pMDl8．T／BIGH3载体为模板扩增野生型BIGH3基因全长编码序列，克隆至真核表达载体plRES2-EGFP上，采用快速体外定点诱变技术... 详细信息

目的构建野生型BIGH3和突变型R555W—BIGH3基因的真核表达载体，探讨其过表达对人角膜上皮细胞的影响。方法以pMDl8．T／BIGH3载体为模板扩增野生型BIGH3基因全长编码序列，克隆至真核表达载体plRES2-EGFP上，采用快速体外定点诱变技术获得R555W突变体。瞬时转染体外培养的人角膜上皮细胞，免疫印迹检测野生与突变型BIGH3基因的表达，流式细胞仪和透射电镜定量和定性检查细胞凋亡，分析caspase3活性。多组间数据采用单因素方差分析进行统计学处理。结果PCR成功扩增了野生型和R555W突变型的BIGH3基因。荧光显微镜下可见成功转染BIGH3／***的CRL-11135细胞发绿色荧光，转染率为30．1％。瞬时转染48h后的HCE细胞的上清液及其细胞裂解液免疫印迹分析显示，BIGH3／R555W-BIGH3-pIRES2-EGFP两组免疫印迹条带的密度比分别为1．26±0．06和1．27±0．08。正常HCE细胞组、转染pIRES2-EGFP空质粒及BIGH3-pIRES2-EGFP细胞凋亡率分别为（1．49±0．02）％、（1．53±0．02）％、（1．50±0．06）％，转染***3-pIRES2-EGFP组细胞凋亡率达到19．46％±0．08％。差异有统计学意义（F=175261．23，P〈O．01）。透射电镜下可见转染组细胞核内染色质凝集，固缩，分布于核膜下，核仁消失，有的胞核碎裂，细胞呈典型的凋亡改变。转染R555W-BIGH3-plRES2-EGFP组caspase-3活性为561．03±1．05，与其他组相比，差异有统计学意义（F=629347．38，P〈0．01）。结论应用快速体外定点诱变技术，成功获得突变型***3基因，转染人角膜上皮细胞后，通过caspase3途径引起细胞凋亡。

关键词：转化生长因子8 细胞外基质蛋白质类诱变定点上皮角膜上皮细胞转染细胞凋亡

高渗透压对兔眼表上皮和黏蛋白5AC表达的影响

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中华眼科杂志 2011年第3期47卷 252-259页

作者：蔡蓉蓉王艳徐建江张朝然复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031

目的探讨高渗透压对兔眼表上皮和黏蛋白（MUC）5AC表达的影响.方法实验研究.将18只健康新西兰大白兔采用计算机随机数字法分为3组,分别为高渗盐溶液（500 mmol/L）、生理盐水（308 mmol/L）滴眼组及空白对照组,每组6只兔.实验第0、7... 详细信息

目的探讨高渗透压对兔眼表上皮和黏蛋白（MUC）5AC表达的影响.方法实验研究.将18只健康新西兰大白兔采用计算机随机数字法分为3组,分别为高渗盐溶液（500 mmol/L）、生理盐水（308 mmol/L）滴眼组及空白对照组,每组6只兔.实验第0、7、14天测定泪液分泌量与泪膜破裂时间（BUT）,结膜印迹细胞学测定杯状细胞密度.实验第7、14天处死动物,行角结膜光镜和电镜观察,结膜组织末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱脲苷三磷酸缺口末端标记法（TUNEL）检测,第14天的结膜组织另行MUC5AC表达的免疫组织化学染色和免疫印迹法检测.同一时间点上泪液分泌量值、BUT值和杯状细胞密度的组间比较采用单因素方差分析法,进一步两两比较采用Bonferroni法;若方差不齐则采用Kruskal-Wallis H检验.组内不同时间点比较采用配对t检验.结果实验第7和第14天,高渗液组BUT分别为（7.6±2.5）和（7.0±2.3）s,较第0天的（10.3±2.5）s显著缩短（t=5.800,4.950;均P＜0.01）,与空白对照和生理盐水组相比亦明显缩短（F=8.030,P＜0.01）.高渗液组结膜杯状细胞密度明显减少,第7和第14天分别为（19.5±16.6）和（32.3±18.2）个/mm2,与第0天（75.7±43.4）个/mm2相比,差异有统计学意义（t=5.319,2.970;均P＜0.05）.高渗盐溶液滴眼第14天,光镜下可见结膜上皮下炎性细胞浸润,角膜上皮部分脱落;扫描电镜下可见角膜上皮细胞肿胀、脱屑、微绒毛减少;透射电镜下可见角膜上皮细胞问连接松弛,基底层上皮细胞内自噬空泡增多,结膜上皮微绒毛减少,杯状细胞内分泌颗粒减少;TUNEL检测结膜上皮可见明显的阳性染色;结膜组织免疫组织化学染色和免疫印迹检测则发现MUC5AC表达明显低于其他两组.生理盐水组与空白对照组的结膜杯状细胞密度及角结膜上皮细胞结构在实验中则均无明显变化.结论眼表高渗压力可破坏角结膜上皮细胞结构,造成杯状细胞密度降低和MUC5AC表达水平下降,并导致泪膜稳定性下降.

关键词：渗透压眼上皮黏蛋白5AC 泪器

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耳科组织工程化上皮补片构建的实验研究

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2016年第10期51卷 756-760页

作者：张文瑾孙建军海军总医院全军耳鼻咽喉头颈外科中心北京100048

目的应用人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSC）复合细胞外基质支架（extracellular matrix,ECM）初步构建组织工程化上皮补片,观察其形态特征和生物学行为.方法将培养、纯化的hADSC与ECM支架复... 详细信息

目的应用人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSC）复合细胞外基质支架（extracellular matrix,ECM）初步构建组织工程化上皮补片,观察其形态特征和生物学行为.方法将培养、纯化的hADSC与ECM支架复合培养,扫描电镜观察成膜后hADSC在ECM上的黏附特征,激光共聚焦显微镜检测hADSC在ECM支架上的活性和凋亡情况,荧光定量聚合酶链反应（qPCR）测定hADSC的自分泌功能[肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）、转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）、表皮细胞生长因子（epidermal growth factor,EGF）].结果在ECM环境中,hADSC增殖活跃.扫描电镜显示ECM底部光滑,表面有粗细不一、广泛交联的胶原束,hADSC在ECM表面具有较好的黏附性,重叠生长.免疫荧光显示hADSC在ECM上增殖稳定,未出现大量凋亡.qPCR显示ECM培养组hADSC的分泌功能明显高于无支架组（P值均＜0.05）.结论 hADSC与ECM支架有良好的相容性,在ECM环境中生长良好,并具有活跃的分泌功能.

关键词：间质干细胞细胞外基质上皮组织工程

抗过敏滴眼液对体外培养的人角膜上皮细胞的毒性作用

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中华眼科杂志 2010年第1期46卷 43-50页

作者：李骏晏晓明北京大学第一医院眼科 100034

目的探讨0．1％奥洛他定、0．025％富马酸酮替酚及0．1％吡嘧司特钾对体外培养的人角膜上皮细胞的毒性作用。方法实验研究。使用无血清角膜细胞培养基（K-SFM）进行人角膜上皮细胞的体外培养；将传2～4代的细胞暴露于0．1％奥洛他定（A... 详细信息

目的探讨0．1％奥洛他定、0．025％富马酸酮替酚及0．1％吡嘧司特钾对体外培养的人角膜上皮细胞的毒性作用。方法实验研究。使用无血清角膜细胞培养基（K-SFM）进行人角膜上皮细胞的体外培养；将传2～4代的细胞暴露于0．1％奥洛他定（A组）、0．025％富马酸酮替酚（B组）、0．1％吡嘧司特钾（C组）3种滴眼液，以无血清角膜细胞培养基将滴眼液分别稀释到50．0％、20．0％、4．0％、0．8％的浓度，与细胞共同孵育的时间分别为10、30min，2、6、12、24h。滴眼液所致细胞毒性的评估采用光学显微镜和扫描电镜对细胞进行的形态学观察、钙贡绿素和乙锭同型二聚体活性与毒性荧光双染色及四唑氮蓝还原法（MTT Assay）。统计学方法使用单因素方差分析、组间两两比较SNK-q检验。结果（1）形态学改变：于光镜下观察，随着药物浓度的增加、作用时间延长，细胞连接逐渐松解、细胞变圆、脱落。于扫描电镜下观察，3组药物均可减少细胞表面的微绒毛层，细胞膜出现裂孔。滴眼液稀释到20．0％时，A组细胞膜形态的改变较B、C组轻。（2）细胞活性与毒性荧光染色：乙锭同型二聚体阳性提示细胞膜受损、通透性升高。20．0％浓度时A组6、12、24h的胞膜受损细胞的百分比低于B、C组[A组分别为（29．7±2．6）％、（36．9±3．2）％、（51．2±4．3）％；B组分别为（36．5±3．1）％、（48．5±4．3）％、（75．5±3．8）％；C组分别为（37．1±2．2）％、（52．7±3．4）％、（71．1±5．1）％]，差异均有统计学意义（6h时，qA-B=3．27，P=0．031；qA-C=4．31，P=0．023）。钙贡绿素阴性提示细胞质内酯酶活性丧失。A、B、C组药物作用于细胞后，随着浓度和作用时间的提高，细胞内酯酶活性逐渐降低，但3组之间差异无统计学意义[作用24h时A、B、C组无酯酶活性细胞的百分比：50．0％浓度时，3组均为100．0％；20．0％浓度时，分别为（23．2±4．6）％、（29．5±5．2）％、（31．1±5．5）％，F=1．97，P=0．377]。（3）MTT分析：除滴眼液稀释到0．8％浓度外，其余随药物浓度升高、作用时间延长，则MTT值降低。滴眼液稀释到20．0％浓度、作用6h时（A、B、C组MTT值为0．429±0．028、0．367±0．038、0．379±0．012）和4．0％浓度、作用24h时（A、B、C组MTT值为0．457±0．025、0．401±0．008、0．387±0．012），A组MTT值高于B、C组，差异有统计学意义（浓度20．0％、6h时，gA-B=3．01，P=0．044，qA-C=3．77，P=0．038；浓度4．0％、24h时，qA-B=3．63，P=0．028，qA-C=4．11，P=0．031）。其余浓度的各作用时间点3组之间比较，差异无统计学意义。结论0．1％奥洛他定对体外培养的人角膜上皮细胞的毒性比0．025％富马酸酮替酚和0．1％毗嘧司特钾小，在临床长期使用治疗过敏性角膜、结膜炎时，可能比后两种药物对角膜上皮细胞的毒性低。

关键词：上皮角膜上皮细胞细胞培养的毒理学眼药水组胺拈抗药

维生素A棕榈酸酯对兔机械性角膜上皮损伤愈合及结膜杯状细胞的作用研究

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中华眼科杂志 2010年第2期46卷 151-160页

作者：邱晓頔龚岚陈敏洁复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031

目的探讨维生素A棕榈酸酯与重组牛碱性成纤维细胞生长因子对兔机械性角膜上皮损伤愈合及结膜上皮细胞、杯状细胞的作用。方法实验研究。选取雄性新西兰大白兔120只，建立机械性角膜上皮损伤模型（角膜中央直径8mm上皮刮除），随机数字... 详细信息

目的探讨维生素A棕榈酸酯与重组牛碱性成纤维细胞生长因子对兔机械性角膜上皮损伤愈合及结膜上皮细胞、杯状细胞的作用。方法实验研究。选取雄性新西兰大白兔120只，建立机械性角膜上皮损伤模型（角膜中央直径8mm上皮刮除），随机数字表法分为4组，每组30只。A组使用盐酸林可霉素滴眼液，B组合用维生素A棕榈酸酯凝胶与盐酸林可霉素滴眼液，C组合用重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶与盐酸林可霉素滴眼液，D组合用重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶与维生素A棕榈酸酯凝胶及盐酸林可霉素滴眼液。各组均于机械性角膜上皮损伤建模后当日开始用药。用法均为3次／d，1滴／次，观察时间为7d。在模型建立第0、1、4、7天共4个时间点采用前节裂隙灯显微镜照相系统进行眼表照相，并计算角膜上皮损伤及其修复面积；在模型建立前及建立后第1、4、7天共4个时间点进行角结膜组织透射电镜检查、角膜光镜组织学检查及结膜印迹细胞学检查，对角膜上皮、结膜上皮细胞修复情况及结膜杯状细胞形态数量进行分析。采用方差分析、Tukey显著性检验等对数据进行统计学分析。结果造模后第1天各组角膜上皮已愈合面积比较差异有统计学意义（F=17．663，P=0．000），角膜上皮已愈合面积A组（53．512±18．850）mm^2，B组（92．194±14．367）mm^2，C组（89．779±20．535）mm^2，D组（127．816±16．379）mm^2，B组与C组之间差异无统计学意义（P=0．995）；结膜印迹细胞学检查显示，各组结膜杯状细胞数量（每740μm×550μm面积）明显下降，A组（10．083±4．441）个，B组（10．667±3．551）个，C组（9．583±4．502）个，D组（9．167±5．606）个，但各组之间的差异无统计学意义（F=0．239，P=0．868）。造模后第4天各组角膜上皮已愈合面积比较差异有统计学意义（F=37．665，P=0．000），角膜上皮已愈合面积A组（120．369±11．839）mm^2，B组（156．606±8．087）mm^2，C组（154．216±9．990）mm^2，D组（175．181±5．168）mm^2，B组与C组之间差异无统计学意义（P=0．968）；结膜印迹细胞学检查显示，各组结膜杯状细胞数量（每740μm×550μm面积）开始恢复，A组（41．250±4．575）个，B组（56．083±6．374）个，C组（48．417±4．562）个，D组（61．917±5．017）个，各组之间比较差异有统计学意义（F=36．210，P=0．000）。造模后第7天各组角膜上皮已愈合面积A组（177．472±3．585）mm^2，B组（186．715±3．022）mm^2，C组（182．293±3．158）mm^2，D组（194．106±2．176）mm^2，D组角膜上皮已愈合面积大于其他3组（P〈0．05）；结膜印迹细胞学检查显示，各组结膜杯状细胞数量（每740μm×550μm面积）明显恢复，A组（63．167±11．488）个，B组（99．501±15．877）个，C组（82．015±9．175）个，D组（104．750±9．659）个，各组之间比较差异有统计学意义（F=30．312，P=0．000），B组与D组之间比较差异无统计学意义（P=0．700）。透射电镜下观察角膜组织，维生素A棕榈酸酯和重组牛碱性成纤维细胞生长因子均能促进角膜上皮细胞之间连接的建立，维生素A棕榈酸酯具有保护角膜上皮细胞、防止上皮角化、促进角膜上皮增殖分化的作用。电镜检查结膜组织，可见B、D组新生的结膜杯状细胞数量较多，胞内分泌颗粒密集，与A、C组有明显差异，B、C、D组新生的结膜上皮细胞连接紧密。结论维生素A棕榈酸酯和重组牛碱性成纤维细胞生长因子均能够有效促进机械性角膜上皮损伤的角膜上皮修复，合并用药时作用最明显。维生素A棕榈酸酯可促进结膜杯状细胞的再生，促进结膜上皮细胞间连接的建立，明显优于重组牛碱性成纤维细胞生长因子。

关键词：上皮角膜伤口愈合杯状细胞维生素A 成纤维细胞生长因子2

跨上皮快速角膜胶原交联术治疗较薄型圆锥角膜的早期疗效观察

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中华眼科杂志 2017年第9期53卷 694-700页

作者：林志荣吴护平罗顺荣刘昭升董诺商旭敏谢智文闫蕾方颉厦门大学附属厦门眼科中心眼表与角膜病科 361001

目的探讨使用跨上皮快速角膜胶原交联术（A—TE—CXL）治疗较薄型圆锥角膜的早期临床效果。方法前瞻性非随机临床研究。收集2015年1至2月间在厦门大学附属厦门眼科中心确诊为进展期圆锥角膜且符合最薄角膜厚度（含上皮）为380～420μm... 详细信息

目的探讨使用跨上皮快速角膜胶原交联术（A—TE—CXL）治疗较薄型圆锥角膜的早期临床效果。方法前瞻性非随机临床研究。收集2015年1至2月间在厦门大学附属厦门眼科中心确诊为进展期圆锥角膜且符合最薄角膜厚度（含上皮）为380～420μm的19例患者（19只眼），予使用KXL快速交联系统进行A—TE—CXL术。在术前和术后1周内，术后1、3、6及12个月时分别进行疼痛及异物感评分、裂隙灯检查、裸眼与矫正视力、角膜地形图、前节光学相干层析成像术（OCT）、角膜共聚焦显微镜及角膜内皮细胞计数检查，记录并使用配对t检验进行统计分析。结果患者接受A—TE—CXL术后1d内存在轻度刺痛和中度异物感，术后1d时基本消失。术后24h存在少量角膜上皮缺损，术后2d时恢复至术前水平。部分患者裸眼视力提高，部分患者最佳矫正视力提高。术后1个月时角膜最薄点厚度为（378．9±17．1）μm，较术前（395．2±13．8）μm降低（t=2．982，P〈0．01）。术后角膜前表面曲率参数均低于术前值，其中术后12个月KMAX值为（55．67±4．91）D，术前为（57．35±5．54）D；术后12个月K2值为（52．18±3．70）D，术前为（52．70±3．56）D，差异均具有统计学意义（KMAX：t=3．044，P〈0．01；K2：t=2．384，P〈0．05）。术后1个月内，前节OCT可见浅层基质密度增高，前后基质问存在“分界线”；共聚焦显微镜下可见浅层基质内纤维显著增粗，纤维间连接增加，深度90-120μm。术前及术后12个月角膜内皮细胞密度差异无统计学意义（t=0．692，P〉0．05）。所有患者未见角膜感染、瘢痕、角膜溃疡、持续性上皮缺损等并发症。结论A—TE—CXL治疗较薄型进展期圆锥角膜早期效果良好，其手术时间短，恢复迅速，尚未见不良反应，是一种良好的角膜交联方案。

关键词：圆锥角膜核黄素交联试剂胶原上皮角膜治疗结果