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多指标-响应面法结合熵权法优选酒蒸蛇床子炮制工艺

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中国现代应用药学 2024年第3期41卷 347-353页

作者：袁诗农贾玉倩张亚京王少男段绪红郑玉光河北中医学院药学院石家庄050200 河北省中药炮制技术创新中心石家庄050200 河北省中药资源利用与质量评价国际联合研究中心石家庄050200 河北化工医药职业技术学院石家庄050030

目的优化酒蒸蛇床子的炮制工艺。方法以花椒毒酚、花椒毒素、佛手柑内酯、异佛手柑内酯、欧前胡素和蛇床子素为评价指标,采用响应面设计法结合熵权法,考察加黄酒量、浸润时间和蒸制时间对酒蒸蛇床子炮制工艺的影响,优选最佳炮制工艺。... 详细信息

目的优化酒蒸蛇床子的炮制工艺。方法以花椒毒酚、花椒毒素、佛手柑内酯、异佛手柑内酯、欧前胡素和蛇床子素为评价指标,采用响应面设计法结合熵权法,考察加黄酒量、浸润时间和蒸制时间对酒蒸蛇床子炮制工艺的影响,优选最佳炮制工艺。结果酒蒸蛇床子的最佳炮制工艺为30 g蛇床子加入黄酒4 mL,浸润18.5 h,再蒸制10 h。结论优选得到的酒蒸工艺稳定可行,建立测定酒蒸蛇床子中6种成分的HPLC分析方法准确可靠,可用于酒蒸蛇床子饮片的质量控制。

关键词：蛇床子酒蒸香豆素类多指标-响应曲面法熵权法炮制工艺

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人参叶绿体基因组密码子偏好性分析

分子植物育种 2024年

作者：李阳王杰敏古军霞韩晓伟马东来郑玉光严玉平孙会改河北中医药大学河北省中药炮制技术创新中心

为了研究人参叶绿体基因组密码子的使用偏性，本研究从NCBI下载51条人参的CDS（coding DNA sequence），利用Python脚本、CodonW软件、EMBOSS的CUSP程序等软件计算密码子偏好性参数和核苷酸组成。结果显示：51条CDS序列的GC含量为39.84%... 详细信息

为了研究人参叶绿体基因组密码子的使用偏性，本研究从NCBI下载51条人参的CDS（coding DNA sequence），利用Python脚本、CodonW软件、EMBOSS的CUSP程序等软件计算密码子偏好性参数和核苷酸组成。结果显示：51条CDS序列的GC含量为39.84%，GC1、GC2、GC3的GC含量分别为48.81%、39.61%和31.09%，说明人参叶绿体基因组偏向于A/T结尾的密码子；相关分析结果显示GC12和GC3的相关性不显著；中性绘图、奇偶偏好性和有效密码子数的综合分析表明决定人参叶绿体密码子偏性的最关键因素是自然选择，筛选出GCA、ACA、CUU、GGU、CAU等14个密码子为最优密码子，其中多数以A或U结尾。本研究为提高人参外源基因的表达水平和优化育种等研究提供一定的参考。

关键词：人参叶绿体基因组密码子偏性基因组编码序列

亚麻木酚素通过抑制TXNIP和激活NLRP3炎症小体减轻慢性间歇性低氧小鼠肾脏炎症损伤

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中国病理生理杂志 2020年第9期36卷 1631-1638页

作者：刘寒郭亚净赵亚硕任静周健吉恩生河北中医学院科研中心河北石家庄050200

目的:探讨亚麻木酚素/开环异落叶松脂素二葡萄糖苷(SDG)对慢性间歇性低氧(CIH)小鼠肾脏炎症损伤的改善作用及潜在机制。方法:将SPF及雄性C57BL/6N小鼠分为正常组、CIH组和SDG治疗组。记录小鼠体重变化;HE染色观察肾脏组织形态;生化检测... 详细信息

目的:探讨亚麻木酚素/开环异落叶松脂素二葡萄糖苷(SDG)对慢性间歇性低氧(CIH)小鼠肾脏炎症损伤的改善作用及潜在机制。方法:将SPF及雄性C57BL/6N小鼠分为正常组、CIH组和SDG治疗组。记录小鼠体重变化;HE染色观察肾脏组织形态;生化检测血清肌酐和血尿素氮的含量;羟胺法和硫代巴比妥酸比色法测定肾脏组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;免疫组织化学检测硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的蛋白表达情况;ELISA法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β等促炎因子的含量;Western blot检测TXNIP、NLRP3炎症小体相关蛋白[NLRP3、含CARD的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和caspase-1]、IL-1β和IL-18的蛋白表达情况。结果:3组小鼠的体重和肾脏指数无显著差异(P>0.05)。HE染色显示,CIH组肾小球形态不规则,肾小管上皮细胞肿胀,胞浆模糊,出现轻微的水泡变性,经SDG治疗后有所改善。与正常组相比,CIH组小鼠血清肌酐及炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的含量显著升高(P<0.05),免疫组织化学染色显示,CIH组肾小管上皮细胞胞浆内NLRP3和TXNIP的表达显著升高(P<0.05),SDG治疗后均显著下降(P<0.05)。与正常组相比,CIH组肾脏组织的SOD活性降低,MDA含量增多(P<0.05),TXNIP、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白水平上调,且经过SDG治疗后均显著下降(P<0.05)。结论:亚麻木酚素可减轻CIH小鼠的肾脏炎症损伤,其机制可能与抑制氧化应激和NLRP3炎症小体的激活有关。

关键词：慢性间歇性低氧肾脏炎症损伤亚麻木酚素/开环异落叶松脂素二葡萄糖苷硫氧还蛋白相互作用蛋白 NLRP3炎症小体氧化应激

当归补血汤含药血清对间歇性低氧暴露H9c2心肌细胞损伤的作用及机制

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中国中药杂志 2023年第21期48卷 5881-5887页

作者：李亭亭陈捷吉恩生郭亚净河北中医药大学河北石家庄050200 河北省中医药结合氢医学技术创新中心河北石家庄050091

该研究利用间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)细胞模型,观察当归补血汤(Danggui Buxue Decoction,DBD)含药血清对H9c2心肌细胞损伤的作用及机制。将H9c2细胞分为5组:对照(control,CON)组、间歇性低氧(IH)组、间歇性低氧加DBD含药血... 详细信息

该研究利用间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)细胞模型,观察当归补血汤(Danggui Buxue Decoction,DBD)含药血清对H9c2心肌细胞损伤的作用及机制。将H9c2细胞分为5组:对照(control,CON)组、间歇性低氧(IH)组、间歇性低氧加DBD含药血清处理(IH+DBD)组、间歇性低氧加自噬增强剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)组(IH+RAPA)、间歇性低氧加DBD含药血清处理和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)(IH+DBD+3-MA)组。丹酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色检测细胞自噬小体变化情况;细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶(creatine kinase,CK)试剂盒检测心肌细胞活性、细胞培养液中LDH和CK的含量,观察细胞损伤情况;原位末端转移酶标记(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)染色法检测心肌细胞凋亡情况;JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位变化情况;Western blot方法检测线粒体自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ型(microtubule-associated proteins light chain 3Ⅱ,LC3Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ型(microtubule-associated proteins light chain 3Ⅰ,LC3Ⅰ)、P62、Parkin和凋亡相关蛋白半胱天冬酶-3前体(pro caspase-3)、半胱天冬酶-3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)基因、Bcl-2-associated X(Bax)蛋白的表达变化情况。结果显示,与CON组比较,IH组MDC染色荧光强度、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Parkin表达显著降低,P62表达显著升高,细胞存活率显著下降,培养液中LDH及CK含量显著升高,TUNEL阳性细胞数量显著增加,pro caspase-3/caspase-3、Bcl-2/Bax比值显著下降,线粒体膜电位显著下降。与IH组比较,IH+DBD组及IH+RAPA组MDC染色荧光强度、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Parkin表达显著升高,P62表达显著降低,细胞存活率显著增加,培养液中LDH及CK含量显著减少,TUNEL阳性细胞数量显著减少,pro caspase-3/caspase-3、Bcl-2/Bax显著升高,线粒体膜电位显著升高;IH+DBD+3-MA组差异无统计学意义。与IH+DBD组比较,IH+DBD+3-MA组MDC染色荧光强度、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Parkin表达显著降低,P62表达显著升高,细胞存活率显著下降,培养液中LDH及CK含量显著升高,TUNEL阳性细胞数量显著增加,pro caspase-3/caspase-3、Bcl-2/Bax比值显著下降,线粒体膜电位显著下降。综上,当归补血汤可以促进IH暴露H9c2心肌细胞的线粒体自噬,抑制心肌细胞凋亡,改善心肌细胞损伤。

关键词：当归补血汤间歇性低氧线粒体自噬细胞凋亡心肌细胞损伤

基于线粒体自噬研究补肝散对衰老大鼠肝脏损伤的影响

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中华中医药杂志 2023年第3期38卷 1039-1045页

作者：张月白德高霍冉王杰鹏方芳方朝义王少贤河北中医学院石家庄050200 河北省中西医结合肺病研究重点实验室石家庄050091

目的:基于肝气虚理论和线粒体自噬探讨衰老机制,观察补肝散对衰老大鼠肝脏损伤的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠32只,随机分为空白组、模型组、补肝散组、雷帕霉素组,每组8只。除空白组腹腔注射0.9%氯化钠溶液(10 mL/kg)外,其余各组均腹腔... 详细信息

目的:基于肝气虚理论和线粒体自噬探讨衰老机制,观察补肝散对衰老大鼠肝脏损伤的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠32只,随机分为空白组、模型组、补肝散组、雷帕霉素组,每组8只。除空白组腹腔注射0.9%氯化钠溶液(10 mL/kg)外,其余各组均腹腔注射D-半乳糖溶液(D-gal,400 mg/kg),复制衰老大鼠模型。造模同时,补肝散组灌服补肝散煎液(14.06 g/kg),雷帕霉素组灌服雷帕霉素溶液(1 mg/kg),空白组和模型组灌服等量0.9%氯化钠溶液,连续56 d。测定各组大鼠体质量、抓力,血清丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)含量。HE染色观察各组大鼠肝组织病理学变化;RT-qPCR检测线粒体融合蛋白(Mfn)1、Mfn2、自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62 mRNA表达水平;免疫组化染色(ABC法)检测Beclin1、p62蛋白表达;Western Blot测定Mfn1、Mfn2、LC3蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠出现肝细胞水肿,肝血窦受挤压变窄,轻度脂肪变性及少量肝细胞坏死,另可见肝细胞嗜酸性病变及凋亡的肝细胞;体质量和抓力显著降低(P<0.05);血清MDA含量升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),ALT、AST、ALP含量升高(P<0.05);肝组织中Mfn1、Mfn2、p62 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05),Beclin1、LC3 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,补肝散组大鼠肝细胞水肿减轻,脂肪变性减少,嗜酸性病变及凋亡的肝细胞明显减少;体质量和抓力显著升高(P<0.05);血清MDA含量降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05),ALT、AST、ALP含量降低(P<0.05);肝组织中Mfn1、Mfn2、p62 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),Beclin1、LC3 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:衰老大鼠肝脏损伤与线粒体自噬功能下降关系密切,可作为肝虚致衰的重要机制;补肝散可通过提高肝脏线粒体自噬水平,减缓衰老大鼠肝脏损伤程度。

关键词：衰老线粒体自噬肝脏损伤肝气亏虚补肝散 D-半乳糖

雏菊叶龙胆酮通过调节Nrf2/HO-1和caspase-3通路减轻阿霉素诱导的H9c2心肌细胞损伤

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中国病理生理杂志 2023年第1期39卷 103-109页

作者：吴江立贾玉涛田雨卿崔清卓周勇杰武若愚李爱英河北中医学院科研中心河北石家庄050035 石家庄学院化工学院河北石家庄050035 河北省心脑血管病中医药防治重点实验室河北石家庄050200

目的:探究雏菊叶龙胆酮(bellidifolin)对阿霉素(adriamycin;又称多柔比星,doxorubicin, DOX)诱导的H9c2心肌细胞损伤的作用及机制。方法:培养大鼠H9c2心肌细胞,采用CCK-8法筛选出DOX和雏菊叶龙胆酮的作用浓度和时间。将H9c2细胞随机分... 详细信息

目的:探究雏菊叶龙胆酮(bellidifolin)对阿霉素(adriamycin;又称多柔比星,doxorubicin, DOX)诱导的H9c2心肌细胞损伤的作用及机制。方法:培养大鼠H9c2心肌细胞,采用CCK-8法筛选出DOX和雏菊叶龙胆酮的作用浓度和时间。将H9c2细胞随机分为正常对照组、DOX组和DOX+雏菊叶龙胆酮组进行相应处理,TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blot检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1, HO-1)、谷氨酰半胱氨酸连接酶修饰亚基(glutamate cysteine ligase modifier subunit, GCLM)、NAD(P)H醌氧化还原酶1[NAD(P)Hquinone oxidoreductase 1, NQO1]、Bax和caspase-3蛋白的表达。结果:0.5~40μmol/L DOX处理H9c2细胞24 h,细胞活力呈剂量依赖性下降(P<0.05)。其中5μmol/L DOX处理24 h使细胞活力下降到59%。50μmol/L雏菊叶龙胆酮预处理H9c2细胞10 h可显著提高DOX诱导的细胞活力(P<0.05)。与对照组相比,DOX组H9c2细胞中Keap1、Nrf2、HO-1、GCLM和NQO1蛋白表达及Bcl-2/Bax比值显著下降(P<0.05),而caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05),细胞凋亡比例增多(P<0.05);雏菊叶龙胆酮预处理可以显著提高DOX处理的H9c2细胞中Keap1、Nrf2、HO-1、GCLM和NQO1蛋白表达及Bcl-2/Bax比值(P<0.05),降低caspase-3蛋白表达并减少细胞凋亡(P<0.05)。结论:雏菊叶龙胆酮可能通过激活Nrf2/HO-1通路、抑制caspase-3通路来减轻DOX诱导的H9c2心肌细胞损伤。

关键词：多柔比星雏菊叶龙胆酮心肌细胞 Nrf2/HO-1信号通路细胞凋亡

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基于Rho/ROCK通路介导的细胞凋亡探讨补肝散对衰老大鼠心肌损伤的影响

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中药新药与临床药理 2022年第8期33卷 1032-1039页

作者：白德高张月霍冉王杰鹏方芳方朝义河北中医学院河北石家庄050200 河北省中西医结合肺病研究重点实验室河北石家庄050091

目的观察衰老大鼠心肌损伤特征并探讨补肝散的干预机制。方法将32只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、补肝散组和维生素E组,除空白组腹腔注射等量生理盐水外,其余各组均腹腔注射D-半乳糖(D-galactose,D-gal)制备衰老大鼠模型。... 详细信息

目的观察衰老大鼠心肌损伤特征并探讨补肝散的干预机制。方法将32只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、补肝散组和维生素E组,除空白组腹腔注射等量生理盐水外,其余各组均腹腔注射D-半乳糖(D-galactose,D-gal)制备衰老大鼠模型。模型复制当日起,补肝散组与维生素E组分别灌胃浓度为14.06 g·kg^(-1)的补肝散和27 mg·kg^(-1)的维生素E,空白组和模型组给予等量生理盐水。以上均每日1次,连续8周,并于模型复制末日测定抓力。取血清及心脏组织,测定心脏脏器指数;检测血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性变化;检测血清谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理形态学变化;Masson染色观察大鼠心肌组织胶原沉积和纤维化情况;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;免疫组织化学染色(ABC法)观察Ras同源基因A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)表达特征;免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织RhoA、ROCK1、Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠心肌细胞形态改变,呈现嗜酸性变性,胞质染色不均,部分心肌细胞坏死,心肌组织胶原沉积和纤维化明显;抓力及心脏脏器指数降低,MDA含量升高,SOD活性降低,心肌细胞凋亡指数及AST、CK、LDH含量升高(均P<0.05);RhoA、ROCK1、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少(均P<0.05)。与模型组比较,补肝散组大鼠心肌细胞轻度嗜酸性变性,偶有坏死、肥大情况,心肌组织胶原沉积较少,偶有纤维化产生,损伤情况较轻;大鼠抓力及心脏脏器指数升高,MDA含量降低,SOD活性升高,心肌细胞凋亡指数及AST、CK、LDH含量降低(均P<0.05);RhoA、ROCK1、Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增加(均P<0.05)。结论补肝散可通过调节Rho/ROCK介导的凋亡途径减轻衰老大鼠的心肌损伤,此为探讨肝气虚致衰理论提供了新的思路和实验支持。

关键词：衰老 Rho/ROCK信号通路细胞凋亡补肝散大鼠心肌损伤

益气养阴方药对慢性间歇性低氧暴露小鼠气阴两虚症状的影响

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中华中医药杂志 2023年第6期38卷 2930-2934页

作者：司建超杨胜昌郑钰莹陈琦吉恩生河北中医学院生理学教研室石家庄050200 河北省中医药结合氢医学技术创新中心石家庄050091

目的:探讨4种益气养阴方药对慢性间歇性低氧(CIH)暴露小鼠气阴两虚症状的改善作用。方法:36只雄性C57BL/6小鼠随机分为常氧对照组、慢性间歇性低氧组、生脉饮组、沙参麦冬汤组、生脉地黄汤组和生脉地黄汤加丹参组,每组6只。常氧对照组... 详细信息

目的:探讨4种益气养阴方药对慢性间歇性低氧(CIH)暴露小鼠气阴两虚症状的改善作用。方法:36只雄性C57BL/6小鼠随机分为常氧对照组、慢性间歇性低氧组、生脉饮组、沙参麦冬汤组、生脉地黄汤组和生脉地黄汤加丹参组,每组6只。常氧对照组暴露于常氧环境,其他组暴露于CIH环境(低氧舱氧气浓度在5%~21%循环,5 min/循环,每天8 h,共35 d)。同时,各中药组于每日上午灌胃相应中药,常氧对照组与慢性间歇性低氧组灌胃等体积纯水。造模结束后测量小鼠摄食、摄水量及体质量,应用旷场实验观测自发活动,高架十字平台迷宫实验、强迫游泳实验和糖水偏好实验检测焦虑、抑郁情况,B超检测心功能,检测小鼠出血、凝血时间及肝肾功能。结果:与常氧对照组比较,慢性间歇性低氧组小鼠体质量和摄食量显著减少(P中医药治疗方案。

关键词：慢性间歇性低氧气阴两虚生脉饮沙参麦冬汤生脉地黄汤丹参

基于BDNF/TrkB介导的海马突触可塑性研究补肝散对衰老大鼠学习记忆功能的影响

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北京中医药大学学报 2021年第4期44卷 323-331页

作者：王硕李伟王浩王杰鹏方芳王少贤王建方朝义河北中医学院河北050200 河北省中西医结合肺病研究重点实验室

目的基于肝气虚理论和海马突触可塑性探讨衰老机制,观察补肝散对D-半乳糖致衰老大鼠学习记忆能力的影响。方法 40只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、吡拉西坦组和补肝散组,各10只。模型组、吡拉西坦组、补肝散组腹腔注射400... 详细信息

目的基于肝气虚理论和海马突触可塑性探讨衰老机制,观察补肝散对D-半乳糖致衰老大鼠学习记忆能力的影响。方法 40只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、吡拉西坦组和补肝散组,各10只。模型组、吡拉西坦组、补肝散组腹腔注射400 mg/kg D-半乳糖制备衰老大鼠模型,空白对照组腹腔注射等量生理盐水,每日1次,连续8周。造模当日始,补肝散组予以补肝散煎液灌胃(14.06 g/kg),吡拉西坦组予以吡拉西坦混悬液灌胃(0.40 g/kg),空白对照组和模型组给予等量蒸馏水(10 mL/kg),每日1次,连续8周。取材前1天称量大鼠体质量;抓力实验检测大鼠抓力大小;八臂迷宫和跳台实验评估大鼠学习记忆能力;尼氏染色观察海马神经元病理变化;免疫组织化学染色观察海马突触素(SYN)和突触后致密蛋白95(PSD95)表达特征;实时荧光定量PCR和免疫印迹法(Western blotting)分别检测海马脑源性神经营养因子(BDNF)、原肌球蛋白相关激酶B(TrkB)基因和蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠体质量下降,抓力降低,工作记忆错误、参考记忆错误和总记忆错误次数明显升高,平台潜伏期缩短,海马神经元数量明显减少,SYN和PSD95表达水平显著下降,BDNF、TrkB基因和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与模型组比较,补肝散组大鼠体质量增加,抓力增大,工作记忆错误、参考记忆错误和总记忆错误次数显著下降,平台潜伏期延长,海马神经元数量显著增加,SYN和PSD95表达水平升高,BDNF、TrkB基因和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论肝气亏虚是机体衰老的重要机制,调补肝气为其有效治法;补肝散可通过上调BDNF和TrkB水平以增强衰老大鼠海马突触可塑性,从而改善学习记忆能力,达到延缓衰老的目的。

关键词：衰老肝气亏虚海马突触可塑性 BDNF/TrkB信号通路学习记忆补肝散大鼠