基于Rho/ROCK通路介导的细胞凋亡探讨补肝散对衰老大鼠心肌损伤的影响

作     者：白德高 张月 霍冉 王杰鹏 方芳 方朝义 BAI Degao;ZHANG Yue;HUO Ran;WANG Jiepeng;FANG Fang;FANG Chaoyi

作者机构：河北中医学院河北石家庄050200 河北省中西医结合肺病研究重点实验室河北石家庄050091 

出 版 物：《中药新药与临床药理》 (Traditional Chinese Drug Research and Clinical Pharmacology)

年 卷 期：2022年第33卷第8期

页      面：1032-1039页

核心收录：

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：河北省中医药类科研计划项目(2020136) 河北中医学院省属高校基本科研业务费专项项目(YJZ2019006) 河北中医学院研究生创新资助项目(XCXZZSS2021010) 2022年度河北省高等学校科学技术研究项目(ZD2022025)。 

主　　题：衰老 Rho/ROCK信号通路 细胞凋亡 补肝散 大鼠 心肌损伤 

摘      要：目的观察衰老大鼠心肌损伤特征并探讨补肝散的干预机制。方法将32只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、补肝散组和维生素E组,除空白组腹腔注射等量生理盐水外,其余各组均腹腔注射D-半乳糖(D-galactose,D-gal)制备衰老大鼠模型。模型复制当日起,补肝散组与维生素E组分别灌胃浓度为14.06 g·kg^(-1)的补肝散和27 mg·kg^(-1)的维生素E,空白组和模型组给予等量生理盐水。以上均每日1次,连续8周,并于模型复制末日测定抓力。取血清及心脏组织,测定心脏脏器指数;检测血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性变化;检测血清谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理形态学变化;Masson染色观察大鼠心肌组织胶原沉积和纤维化情况;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;免疫组织化学染色(ABC法)观察Ras同源基因A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)表达特征;免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织RhoA、ROCK1、Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠心肌细胞形态改变,呈现嗜酸性变性,胞质染色不均,部分心肌细胞坏死,心肌组织胶原沉积和纤维化明显;抓力及心脏脏器指数降低,MDA含量升高,SOD活性降低,心肌细胞凋亡指数及AST、CK、LDH含量升高(均P0.05);RhoA、ROCK1、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少(均P0.05)。与模型组比较,补肝散组大鼠心肌细胞轻度嗜酸性变性,偶有坏死、肥大情况,心肌组织胶原沉积较少,偶有纤维化产生,损伤情况较轻;大鼠抓力及心脏脏器指数升高,MDA含量降低,SOD活性升高,心肌细胞凋亡指数及AST、CK、LDH含量降低(均P0.05);RhoA、ROCK1、Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增加(均P0.05)。结论补肝散可通过调节Rho/ROCK介导的凋亡途径减轻衰老大鼠的心肌损伤,此为探讨肝气虚致衰理论提供了新的思路和实验支持。