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用高效液相色谱-质谱联用法测定新生儿血浆中苯巴比妥的浓度

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中国临床药理学杂志 2024年第16期40卷 2388-2391页

作者：马英华安志华赵宜乐河北省儿童医院药学部河北石家庄050031

目的建立高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法测定新生儿微量血浆中苯巴比妥(PHB)的浓度。方法用有机溶剂沉淀蛋白进行前处理,以PHB-D5为内标,反相色谱柱,流动相:0.05%甲酸-1 mmoL·L^(-1)乙酸铵-水(A)和甲醇(B),梯度洗脱,流速为0.5 mL... 详细信息

目的建立高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法测定新生儿微量血浆中苯巴比妥(PHB)的浓度。方法用有机溶剂沉淀蛋白进行前处理,以PHB-D5为内标,反相色谱柱,流动相:0.05%甲酸-1 mmoL·L^(-1)乙酸铵-水(A)和甲醇(B),梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^(-1),柱温为50℃,进样量为2μL。用负离子电喷雾离子源负,多反应监测(MRM)模式扫描。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、残留和稀释效应、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果血浆样品中PHB的线性方程式为y=109.38×10^(-3)x+19.57×10^(-3)(r=0.9996),PHB在1~75μg·mL^(-1)线性关系良好,定量下限为1μg·mL^(-1)。批内和批间精密度相对标准偏差≤5.74%,准确度为91.29%~103.31%,提取回收率为102.83%~111.22%,稳定性良好,不受血浆基质的影响。结论本方法快速、简便、灵敏且专属性强,适用于新生儿血浆中PHB的治疗药物监测和药代动力学-药效学研究。

关键词：苯巴比妥高效液相色谱-质谱联用法同位素内标治疗药物监测新生儿

用HPLC-MS/MS法测定重症感染患儿微量血浆/血清中利奈唑胺和万古霉素浓度

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中国临床药理学杂志 2024年第7期40卷 1044-1048页

作者：姜锡娟雷蓉秦亚彬赵宜乐河北省儿童医院药学部河北石家庄050031 河北省药品医疗器械检验研究院河北省中药质量评价与标准研究重点实验室河北石家庄050227

目的建立一种高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法快速测定重症感染患儿微量血浆/血清中利奈唑胺和万古霉素浓度。方法血浆/血清10μL经甲醇沉淀蛋白后取上清液直接进样分析,内标分别为利奈唑胺-D3和去甲万古霉素;用Kinetex^(R)EVOC18柱... 详细信息

目的建立一种高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法快速测定重症感染患儿微量血浆/血清中利奈唑胺和万古霉素浓度。方法血浆/血清10μL经甲醇沉淀蛋白后取上清液直接进样分析,内标分别为利奈唑胺-D3和去甲万古霉素;用Kinetex^(R)EVOC18柱(30.0mm×2.1mm,2.6μm)分离,以0.1%甲酸-水和0.1%甲酸-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速:0.5mL·min^(-1),柱温:40℃,进样量:2μL,分析时长:2min。电喷雾离子源正离子扫描下,用多反应监测模式进行质谱分析。考察该方法的专属性、定量下限和标准曲线、准确度和精密度、回收率、基质效应、稳定性、血清和血浆样品的交叉验证、溶血效应和高脂效应。结果利奈唑胺、万古霉素及内标利奈唑胺-D3、去甲万古霉素的保留时间分别为1.18、1.03、1.17、1.01min。利奈唑胺在0.2~25.6μg·mL^(-1)内呈良好的线性关系,回归方程是y=8.95×10^(-1)x+3.49×10^(-3)(r=0.9971),定量下限为0.2μg·mL^(-1);万古霉素在1~128μg·mL-内呈良好的线性关系,回归方程是y=3.13×10^(-1)x+6.93×10^(-2)(r=0.9974),定量下限为1μg·mL^(-1);批内、批间精密度的相对标准偏差(RSD)均≤9.55%。2种药物的平均提取回收率均在96.24%~104.57%;内标归一化基质因子的RSD≤7.58%;血浆和血清基质样品可交叉检测,利奈唑胺和万古霉素最高可承受的溶血程度分别为2%和5%,高脂效应均不影响2种抗菌药测定结果。样品的稳定性在试验条件下均良好。该法成功用于我院28例重症感染患儿血浆样本分析。结论本方法所需样本量少,简单、快速、准确、稳定、应用范围广,可应用于利奈唑胺和万古霉素在儿童治疗药物监测及联合用药研究。

关键词：利奈唑胺万古霉素高效液相色谱-质谱联用治疗药物监测重症感染儿科患者

Notch通路与Th1/Th2细胞在结核分枝杆菌感染过程中的调节机制

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中华医院感染学杂志 2024年 3064-3068页

作者：章敏唐莹杜希越武汉市金银潭医院检验科衡水市人民医院呼吸科

目的探讨Notch通路与Th1/Th2细胞在肺结核患者结核分枝杆菌感染过程中的调节机制。方法选择2021年5月-2023年1月武汉市金银潭医院收治的128例肺结核患者设为疾病组,并选取同期医院收治的诊断的60例结核菌素试验阴性患者为正常组;采集... 详细信息

目的探讨Notch通路与Th1/Th2细胞在肺结核患者结核分枝杆菌感染过程中的调节机制。方法选择2021年5月-2023年1月武汉市金银潭医院收治的128例肺结核患者设为疾病组,并选取同期医院收治的诊断的60例结核菌素试验阴性患者为正常组;采集两组受试者未治疗前的空腹外周血,使用人淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMCs),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法测定Notch1和Jagged2的m RNA表达,流式细胞术测定Th1/Th2细胞;将疾病组分离的PBMCs接种在96孔板中,设置γ-分泌酶抑制剂(DAPT)不同浓度组(0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L),流式细胞术测定Th1/Th2细胞,Westernblot法测定不同DAPT浓度组Notch1和Jagged2蛋白表达。结果疾病组PBMCs中Notch1 m RNA和Jagged2 m RNA分别为19.73±3.42、21.13±4.05高于正常组(P <0.05);疾病组PBMCs中Th1、Th2占比为(3.89±1.13)%、(3.99±1.28)%高于正常组,正常组Th1/Th2为0.97±0.28低于疾病组(P<0.05);不同DAPT浓度组Th1占比差异无统计学意义;随着DAPT浓度增加,Th2占比逐渐降低,Th1/Th2比值逐渐增加(P<0.05);Notch1蛋白和Jagged2蛋白水平降低(P<0.05)。结论肺结核患者中Notch通路蛋白异常高表达,Th1/Th2比例失衡;应用DAPT下调Notch通路表达可拮抗Notch1和Jagged2蛋白表达,并可纠正Th1/Th2比例。

关键词：肺结核结核分枝杆菌 Th1/Th2细胞 Notch通路作用机制

miR-135a/MYC介导维奈克拉治疗骨髓增生异常综合征与急性髓系白血病的耐药机制研究

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中国临床药理学杂志 2024年第13期40卷 1855-1859页

作者：郭素青石锐吴燕李英华衡水市人民医院血液内科河北衡水053000

目的探讨miR-135a/MYC介导维奈克拉治疗骨髓增生异常综合征(MDS)与急性髓系白血病(AML)的耐药机制。方法选取病例86例,其中健康供者23例(对照组),MDS维奈克拉耐药患者47例(MDS组),由骨髓增生异常综合征转化的AML维奈克拉耐药患者16例(AM... 详细信息

目的探讨miR-135a/MYC介导维奈克拉治疗骨髓增生异常综合征(MDS)与急性髓系白血病(AML)的耐药机制。方法选取病例86例,其中健康供者23例(对照组),MDS维奈克拉耐药患者47例(MDS组),由骨髓增生异常综合征转化的AML维奈克拉耐药患者16例(AML组),检测3组miR-135a和MYC的表达水平。将THP1细胞分为miR-NC组(转染无义序列)和miR-135a minics组(转染miR-135a minics),用含0、0.01、1、100μmol·L^(-1)的维奈克拉处理细胞24 h,检测各组细胞活力和凋亡率。结果对照组、MDS组和AML组患者miR-135a的表达水平分别为1.00±0.14、0.21±0.04和0.25±0.08,MYC的蛋白表达水平分别为1.00±0.15、1.31±0.12和1.49±0.16(P<0.05)。在细胞水平方面,BMSCs组、MUTZ-1组、THP1组MYC mRNA表达水平分别为1.00±0.11、1.31±0.15和1.93±0.23,MYC蛋白表达水平分别为1.00±0.15、1.57±0.22和1.97±0.31,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。细胞活力检测结果显示,在0、0.01、1、100μmol·L^(-1)维奈克拉药物浓度下,miR-NC组细胞活力分别为(100.00±13.26)%、(92.33±10.28)%、(85.41±11.37)%和(28.24±6.02)%,miR-135a mimics组细胞活力分别为(105.12±12.35)%、(82.11±12.07)%、(46.13±8.06)%和(18.20±5.03)%,仅在1μmol·L^(-1)维奈克拉药物浓度中2组在统计学上差异有统计学意义(P<0.05)。细胞凋亡检测结果显示:在0、0.01、1、100μmol·L^(-1)维奈克拉药物浓度下,miR-NC组凋亡率分别为(100.00±11.45)%、(92.48±12.04)%、(108.72±9.63)%和(207.15±21.49)%,miR-135a mimics组的细胞凋亡率分别为(106.34±16.21)%、(117.26±10.13)%、(269.41±23.59)%和(184.33±19.28)%,仅在1μmol·L^(-1)维奈克拉药物浓度中2组差异在统计学上有统计学意义(P<0.05)。结论miR-135a/MYC介导维奈克拉治疗MDS和AML的耐药机制。

关键词： miR-135a/MYC 维奈克拉骨髓增生异常综合征急性髓系白血病耐药机制

烧伤创面感染病原菌耐药性及外周血T淋巴细胞亚群和MC1R基因多态性

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中华医院感染学杂志 2024年 3316-3320页

作者：张建涛安亮恩周辉芳赵跃李海鑫武警第一机动总队医院外一科联勤保障部队第九八〇医院烧伤整形科联勤保障部队第九八〇医院感染科

目的探讨烧伤创面感染病原菌耐药性及外周血T淋巴细胞亚群和黑皮质素-1受体（MC1R）基因多态性。方法选取2021年8月-2023年8月联勤保障部队第980医院收治的68例烧伤发生创面感染患者为研究组,随机选取72例同期符合纳入排除标准的烧伤... 详细信息

目的探讨烧伤创面感染病原菌耐药性及外周血T淋巴细胞亚群和黑皮质素-1受体（MC1R）基因多态性。方法选取2021年8月-2023年8月联勤保障部队第980医院收治的68例烧伤发生创面感染患者为研究组,随机选取72例同期符合纳入排除标准的烧伤未发生创面感染患者为对照组,统计病原菌分布,进行耐药性分析,比较两组外周血T淋巴细胞亚群水平（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）及MC1R基因多态性分布情况。结果 68例烧伤发生创面感染患者共培养出79株病原菌,主要包括铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。铜绿假单胞菌对头孢唑林、氨苄西林耐药严重,对环丙沙星敏感;金黄色葡萄球菌对青霉素耐药严重,对替加环素敏感。研究组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+表达低于对照组（P研究组MC1R基因分型CC、等位基因C高于对照组（P<0.05）,等位基因T低于对照组（P<0.05）。两组MC1R基因分型TT、TC比较,无统计学差异。结论烧伤创面感染患者主要病原菌为铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌对头孢唑林、氨苄西林耐药严重,金黄色葡萄球菌对青霉素耐药严重。烧伤患者创面感染与T淋巴细胞亚群水平、MC1R基因多态性有关。

关键词：烧伤创面感染病原菌耐药性 T淋巴细胞亚群黑皮质素-1受体基因多态性

制霉素片联合康复新液预防阻生智齿拔除术后口腔感染的临床效果及对Th17/Treg细胞免疫的影响

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中华医院感染学杂志 2024年第13期34卷 2022-2026页

作者：闫娜张玲玲胡志伟王彭议张中月衡水市人民医院口腔科河北衡水053000

目的探讨制霉素片联合康复新液预防阻生智齿拔除术后口腔感染的临床效果及对辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)细胞免疫的影响。方法去选取2022年8月-2023年8月衡水市人民医院收治的200例阻生智齿患者为研究对象,根据随机数表法分... 详细信息

目的探讨制霉素片联合康复新液预防阻生智齿拔除术后口腔感染的临床效果及对辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)细胞免疫的影响。方法去选取2022年8月-2023年8月衡水市人民医院收治的200例阻生智齿患者为研究对象,根据随机数表法分为研究组100例和对照组100例。比较两组基本资料、口腔感染发生率、口腔菌群变化、Th17/Treg及叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体yt(RORyt)、白细胞介素-17(IL-17)、转化生长因子β(TGF-β)水平。结果研究组感染发生率为1.63%,低于对照组的9.09%(P研究组革兰阴性菌、螺旋体数量低于对照组,革兰阳性菌数量高于对照组(P研究组Th17、Th17/Treg、RORt、IL-17、TGF-β水平低于对照组,Treg、Foxp3水平高于对照组(P<0.05)。结论制霉素片联合康复新液可以减少阻生智齿拔除术后患者口腔感染发生率,维持口腔菌群稳态,调节Th17/Treg细胞免疫平衡,提高患者抗菌抗感染能力。

关键词：制霉素片康复新液阻生智齿口腔感染辅助性T细胞17/调节性T细胞口腔菌群

用HPLC-MS/MS法测定儿童微量血浆中地高辛浓度

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中国临床药理学杂志 2024年第9期40卷 1331-1335页

作者：杨志梅冯章英秦亚彬河北医科大学第四医院急诊科河北石家庄050011 河北医科大学第四医院临床药理研究部河北石家庄050011 河北省儿童医院药学部河北石家庄050031

目的建立液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法检测血浆中地高辛含量,并用于患儿治疗药物监测(TDM)。方法取血浆样本10μL经乙腈沉淀蛋白,用Phenomenex Kinetex EVO C18(30.0 mm×2.1 mm,2.6μm)色谱柱分离,流动相为水(含0.05%甲酸和2 mmol... 详细信息

目的建立液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法检测血浆中地高辛含量,并用于患儿治疗药物监测(TDM)。方法取血浆样本10μL经乙腈沉淀蛋白,用Phenomenex Kinetex EVO C18(30.0 mm×2.1 mm,2.6μm)色谱柱分离,流动相为水(含0.05%甲酸和2 mmol·L^(-1)乙酸铵)和甲醇,梯度洗脱,流速:0.55 mL·min^(-1),进样体积:30μL,柱温:45℃。电喷雾离子源正离子模式,动态多反应监测(dMRM)扫描分析,离子通道分别选择为m/z 798.3→651.3(地高辛)和m/z 801.3→654.3(地高辛-d3)。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、准确度和精密度、提取回收率、基质效应以及稳定性。结果地高辛及内标的保留时间均为1.39 min,地高辛在0.25~8.00 ng·mL^(-1)线性良好,代表性的标准曲线方程为y=18.08×10^(-2)x+29.71×10^(-4)(r^(2)=0.99577),批内和批间精密度相对标准偏差均小于15%,提取回收率为91.00%~99.50%,稳定性良好,基质效应符合规定。本方法成功用于65例患儿的地高辛血药浓度测定。结论本方法操作简便、快速、准确、专属性强,可用于患儿临床治疗药物监测。

关键词：地高辛液相色谱-串联质谱法儿童治疗药物监测蛋白沉淀

加减补阳还五汤通过激活自噬促进Nrf2核转移改善糖尿病肾病足细胞损伤

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中药药理与临床 2024年

作者：杨帆张晓云娄菲菲马赟黄家安刘利飞赵炳武王月华河北中医药大学河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室河北省人民医院河北省中医院

目的：探讨加减补阳还五汤是否通过激活自噬促进核因子E2相关因子2（Nrf2）核转移改善糖尿病肾病（DKD）小鼠足细胞损伤。方法：选取11-12周龄的db/db小鼠24只，经适应性喂养1周并检测尿蛋白均阳性后，随机分为模型对照组、加减补阳还五... 详细信息

目的：探讨加减补阳还五汤是否通过激活自噬促进核因子E2相关因子2（Nrf2）核转移改善糖尿病肾病（DKD）小鼠足细胞损伤。方法：选取11-12周龄的db/db小鼠24只，经适应性喂养1周并检测尿蛋白均阳性后，随机分为模型对照组、加减补阳还五汤16 g/kg组、雷帕霉素-海藻糖组，同时设立db/m组小鼠作为正常对照组，每组8只，连续给药8周。检测小鼠血糖（FBG）、总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、肾损伤分子-1（KIM-1）、尿微量白蛋白（mALB）含量；HE染色观察肾脏的病理形态学；qRT-PCR法检测Wilms肿瘤基因（Wt1）、nephrin、podocin的mRNA表达；Western blot法检测小鼠肾组织P62/SQSTM1抗体、beclin1抗体、微管相关蛋白1轻链3-II抗体（LC3-II）、溶酶体相关膜蛋白1抗体（LAMP1）、Nrf2、Kelch样ECH关联蛋白1（Keap1）、醌氧化还原酶1（NQO-1）、血红素加氧酶-1（HO-1）的表达；免疫荧光观察Nrf2核转移变化。结果：与正常对照组比较，模型对照组小鼠肾组织出现病理损伤，血清FBG、TC、TG、MDA、BUN、Scr、KIM-1及mALB含量显著升高，SOD、GSH-PX活力显著降低（P＜0.01），肾组织P62表达升高，LC3-II、beclin1、LAMP1表达降低（P＜0.01），Wt1、nephrin、podocin的mRNA表达降低（P＜0.01），肾组织Nrf2-Keap1通路活化（P＜0.01）；与模型对照组比较，经加减补阳还五汤干预后，DKD小鼠肾脏病理损伤改善（P＜0.01），血清TC、TG、MDA、BUN、Scr、KIM-1及mALB含量显著降低，SOD、GSH-PX活力升高（P＜0.01），肾组织P62表达降低，LC3-II、beclin1、LAMP1表达升高（P＜0.01），Wt1、nephrin、podocin的mRNA表达恢复（P＜0.01），肾组织Nrf2-Keap1通路被活化（P＜0.01）。结论：加减补阳还五汤可能通过激活DKD小鼠肾脏细胞自噬，疏通自噬通路，促进Nrf2核转移，抑制氧化应激，保护足细胞，降低尿蛋白排泄，改善DKD肾脏损伤。

关键词：加减补阳还五汤糖尿病肾脏疾病自噬-溶酶体通路核因子E2相关因子2-Kelch样ECH关联蛋白1通路足细胞

老年脑出血患者术后颅内感染病原菌分布及外周血Th17/Treg和脑脊液单核细胞TLR4/MyD88 mRNA水平变化

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中国老年学杂志 2024年第14期 3338-3342页

作者：曹英肖侯乾辛玉玲河北医科大学附属邢台市人民医院神经外科

目的探讨老年脑出血患者术后颅内感染病原菌分布及外周血辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)和脑脊液单核细胞Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88 mRNA水平变化。方法选取老年脑出血患者297例，根据术后1 w内颅内感染发生情况分... 详细信息

目的探讨老年脑出血患者术后颅内感染病原菌分布及外周血辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)和脑脊液单核细胞Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88 mRNA水平变化。方法选取老年脑出血患者297例，根据术后1 w内颅内感染发生情况分为感染组51例，未感染组246例。流式细胞术检测外周血Th17、Treg细胞水平；酶联免疫吸附试验测定血清白细胞介素(IL)-6、IL-17、转化生长因子(TGF)-β1水平；RT-PCR检测脑脊液单核细胞TLR4 mRNA、MyD88 mRNA表达水平；记录脑脊液细菌学培养阳性患者分离出病原菌类型。根据病情严重程度将术后颅内感染患者分为轻度组[(NIHSS)20分)。结果术后颅内感染患者共分离出病原菌42株，其中革兰阳性菌24株(57.14%),革兰阴性菌18株(42.86%)。感染组Th17、Th17/Treg、IL-6、IL-17、TGF-β1水平明显高于未感染组，Treg水平明显低于未感染组(P<0.05)。Th17、Treg、Th17/Treg、IL-6、IL-17、TGF-β1水平在不同病情严重程度的术后颅内感染患者间比较差异有统计学意义(P<0.05)。感染组TLR4 mRNA、MyD88 mRNA表达水平明显高于未感染组(P<0.05)。随着病情严重程度的增加TLR4 mRNA、MyD88 mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。老年脑出血术后颅内感染患者TLR4 mRNA、MyD88 mRNA表达与Th17、Th17/Treg、IL-6、IL-17、TGF-β1水平呈正相关，与Treg水平呈负相关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示，Th17/Treg、IL-6、IL-17、TGF-β1、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA对老年脑出血术后颅内感染患者病情严重程度具有较高的评估价值(P<0.05),联用的评估价值最高。结论老年脑出血患者术后颅内感染病原菌以革兰阳性菌为主，Th17/Treg平衡失调及相关炎症因子水平异常升高，脑脊液单核细胞TLR4 mRNA、MyD88 mRNA高表达与病情严重程度密切相关，联合检测可用于患者病情严重程度的评估。

关键词：脑出血颅内感染辅助性T细胞17 调节性T细胞 Toll样受体4 髓样分化因子88