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人参皂苷Rb1对C2C12骨骼肌细胞葡萄糖利用及AMPK信号通路相关基因表达的影响

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世界中医药 2019年第1期14卷 54-58,63页

作者：赵丹丹吴瑞白颖莫芳芳马如风柳辰玥朱如愿左加成姜广建张东伟高思华北京中医药大学中医学院北京100029 中国中医科学院广安门医院南区内分泌科北京1026183

目的:观察人参皂苷Rb1对胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖利用的影响,并基于AMPK信号通路探讨其可能的作用机制。方法:将C2C12细胞分为正常组、模型组、人参皂苷Rb1组,模型组以0. 25 mmol/L棕榈酸,1%小牛血清白蛋白培养16 h诱导IR... 详细信息

目的:观察人参皂苷Rb1对胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖利用的影响,并基于AMPK信号通路探讨其可能的作用机制。方法:将C2C12细胞分为正常组、模型组、人参皂苷Rb1组,模型组以0. 25 mmol/L棕榈酸,1%小牛血清白蛋白培养16 h诱导IR,人参皂苷Rb1组在模型组的基础上以1、3、10、30、100μmol/L浓度的人参皂苷Rb1分别干预24 h和48 h,通过检测培养液中的葡萄糖含量反映葡萄糖消耗量,并应用CCK8试剂盒及光镜观察不同浓度人参皂苷Rb1对C2C12细胞活性及形态的影响,实时荧光定量PCR扩增分析人参皂苷Rb1对C2C12细胞AMPKα、SIRT-1、PGC-1α基因表达的影响。并应用shRNA沉默AMPKα的表达,构建AMPKα低表达的骨骼肌细胞模型,以1、3、10、30、100μmol/L浓度的人参皂苷Rb1分别干预24 h和48 h,与不含人参皂苷Rb1的培养液比较,再次验证人参皂苷Rb1对C2C12细胞葡萄糖利用的影响及其与AMPK信号通路的关系。结果:1、3、10、30μmol/L人参皂苷Rb1对C2C12细胞形态及活性无显著影响,而100μmol/L人参皂苷Rb1造成C2C12细胞活性降低及部分细胞死亡。10,30μmol/L人参皂苷Rb1能够促进IR的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗量,与模型组比较,差异有统计学意义(P <0. 05),且人参皂苷Rb1能够上调C2C12细胞AMPKα、SIRT-1、PGC-1α的基因表达(P <0. 05)。10、30μmol/L人参皂苷Rb1亦能增加AMPKα低表达的骨骼肌细胞的葡萄糖消耗量(P <0. 05),而该作用程度低于其对棕榈酸诱导的C2C12细胞IR的影响,且RT-PCR结果显示人参皂苷Rb1能上调AMPKα低表达的C2C12细胞SIRT-1、PGC-1α的基因表达。结论:人参皂苷Rb1能够有效促进IR的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗,该作用与调节AMPK信号通路有关,但除AMPK信号通路亦有其他作用途径。

关键词：人参皂苷Rb1 C2C12骨骼肌细胞胰岛素抵抗基因沉默葡萄糖消耗 AMPK信号通路

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奶牛副结核病流行牛场的处置方案分析

中国奶牛 2020年第1期 28-32页

作者：吴建勇杨学云李建军古努尔·吐尔逊孟肖潇洪都孜·波拉提金映红王登峰新疆畜牧科学院兽医研究所

为协助新疆某副结核病严重流行的奶牛场抑制该病的流行,2014-2015年间采用副结核分枝杆菌(MAP)间接ELISA抗体检测试剂盒对该牛场的965头牛进行了4次血清抗体检测,并通过淘汰部分阳性牛控制该病的流行。结果显示,在两年内累计检测出297... 详细信息

为协助新疆某副结核病严重流行的奶牛场抑制该病的流行,2014-2015年间采用副结核分枝杆菌(MAP)间接ELISA抗体检测试剂盒对该牛场的965头牛进行了4次血清抗体检测,并通过淘汰部分阳性牛控制该病的流行。结果显示,在两年内累计检测出297头阳性牛,检出率为30.78%(297/965)。首次检测发现104头阳性牛,检出率为13.51%(104/770)。淘汰处理后,间隔3个月再次检出2.91%(19/652)的阳性牛,再次淘汰阳性牛后进行了两次监测,其中间隔11个月时检测阳性率为7.55%(41/543),间隔17个月时检出率为33.33%(171/513)。同时,检测结果显示:抗体阳性牛的检出率随年龄的增加而呈现上升趋势,在4~5岁检出率最高,而0.5~1和7~8岁牛中检出率较低。统计分析发现,在副结核病严重流行的奶牛场开展该病的控制或净化时,检测和主动淘汰的间隔期设置为3个月时的控制效果优于11个月和17个月(P<0.001)。虽本次处置未达到预期目标,但根据检测数据和处置措施效果,结合现有的研究数据,初步制订了牛群副结核病流行程度的划分标准和防控、净化方案。本研究将为牛副结核病的防控提供案例借鉴和防控方案。

关键词：牛副结核病副结核分枝杆菌血清学检测检验淘汰处置方案

乏氧组织显像剂99Tcm-HL91冻干药盒的研制

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同位素 2003年第3期16卷 171-174页

作者：国毓智张志勇朱霖张剑英汪建军李淑艳北京欣科思达医药科技有限公司北京102600 北京师范大学化学系北京100875

以酒石酸亚锡为还原剂,制备了无菌无热原的HL91药盒,并对药盒进行了99Tcm标记.条件实验结果显示:pH和酒石酸亚锡的量对99Tcm-HL91标记率的影响较大,pH为7～9时,标记率＞90%,pH过高,HL91配体出现沉淀;酒石酸亚锡含量在5～30 μg时,标记率... 详细信息

以酒石酸亚锡为还原剂,制备了无菌无热原的HL91药盒,并对药盒进行了99Tcm标记.条件实验结果显示:pH和酒石酸亚锡的量对99Tcm-HL91标记率的影响较大,pH为7～9时,标记率＞90%,pH过高,HL91配体出现沉淀;酒石酸亚锡含量在5～30 μg时,标记率＞90%;HL91含量为1 mg.由此确定每支冻干品药盒中含有1 mg HL91、20 μg酒石酸亚锡、pH 8～8.5.按照国家药典规定对药盒进行急性毒性实验、无菌和无热原检验合格;标记后的注射液室温5 h内稳定;冻干药盒室温保存1个月、冷冻保存3到6个月,标记后放化纯度仍大于90%.

关键词：乏氧组织显像剂 99Tcm-HL91 冻干品药盒

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淋巴瘤来源外泌体的提取方法比较与鉴定

浙江医学 2020年第13期42卷 1372-1376,1380页

作者：陈珍珍谢亚萍施鹏飞高大泉谭俊峰陈况刘利蓉黄细莲徐颖钱申贤浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院血液科 310006

目的比较淋巴瘤来源外泌体的3种提取方法[聚乙二醇(PEG)沉淀法、exoEasy试剂盒、超速离心法],并鉴定其形态及生物学特征。方法采用PEG沉淀法、exoEasy试剂盒、超速离心法提取外泌体,在透射电子显微镜下观察外泌体形态,利用Western blot... 详细信息

目的比较淋巴瘤来源外泌体的3种提取方法[聚乙二醇(PEG)沉淀法、exoEasy试剂盒、超速离心法],并鉴定其形态及生物学特征。方法采用PEG沉淀法、exoEasy试剂盒、超速离心法提取外泌体,在透射电子显微镜下观察外泌体形态,利用Western blot法检测3种方法提取的外泌体蛋白表达特点。结果PEG沉淀法、超速离心法提取的外泌体能表达特征蛋白CD63、CD81,具备外泌体的基本形态特征,其中超速离心法提取的外泌体特征更清晰;而exoEasy试剂盒提取的外泌体特征不明显。结论PEG沉淀法适合对外泌体产量需求大的实验,超速离心法适合外泌体的功能实验,exoEasy试剂盒适合外泌体前期预实验的探索使用。可根据不同研究目的选择不同的提取方法。

关键词：外泌体沉淀法超速离心法试剂盒蛋白

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RPL11基因稳定敲低细胞系的构建及验证

中国细胞生物学学报 2021年第6期43卷 1241-1248页

作者：刘伟郭佩东贾楠楠孙英杰谭磊刘炜玮仇旭升廖瑛宋翠萍丁铲孟春春福建农林大学动物科学学院(蜂学学院) 福州350002 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

针对RPL11基因设计三条不同的shRNA,并分别克隆至带绿色荧光标签的pRNAT-U6.1载体,以用于构建RPL11稳定敲减的细胞系。将重组质粒转染至HeLa细胞中并加入G418进行筛选,随后通过有限稀释法将阳性细胞亚克隆纯化。将扩大培养的亚克隆细胞... 详细信息

针对RPL11基因设计三条不同的shRNA,并分别克隆至带绿色荧光标签的pRNAT-U6.1载体,以用于构建RPL11稳定敲减的细胞系。将重组质粒转染至HeLa细胞中并加入G418进行筛选,随后通过有限稀释法将阳性细胞亚克隆纯化。将扩大培养的亚克隆细胞进行Western blot和qPCR实验验证获得RPL11基因稳定敲低的细胞株。利用CCK-8细胞活力检测试剂盒和Puromycin标记法测定RPL11基因稳定敲低细胞系的生长活力和新生蛋白合成能力,结果表明,RPL11基因稳定敲低后并不影响细胞的活力和新生蛋白合成能力,该细胞系为后续研究RPL11的非核糖体功能奠定了基础。

关键词： RPL11 稳定敲低细胞系新合成蛋白细胞活力

应用MALDI-TOFMS检测5种白血病细胞株DCK和CDA基因部分单核苷酸多态性

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癌变．畸变．突变 2013年第2期25卷 115-119页

作者：张孝平菅子莹陈宝安许佩佩彭苗新夏国华程璐陆祖宏东南大学医学院附属中大医院血液科江苏南京210009 东南大学生物科学与医学工程学院生物电子学国家重点实验室江苏南京210096

目的:检测5种白血病细胞株中脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,DCK)和胞苷脱氨酶(cytidine deaminase,CDA)基因的单核苷酸多态性。方法:培养人红白血病细胞株K562,人慢性粒细胞白血病细胞株Ka,人急性髓系白血病细胞株HL-60、U937,人Bu... 详细信息

目的:检测5种白血病细胞株中脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,DCK)和胞苷脱氨酶(cytidine deaminase,CDA)基因的单核苷酸多态性。方法:培养人红白血病细胞株K562,人慢性粒细胞白血病细胞株Ka,人急性髓系白血病细胞株HL-60、U937,人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji。采用QIAamp DNA Blood Mini kit提取基因组DNA,设计引物,PCR扩增相应目的片段,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOFMS)检测DCK基因A674G(rs111454937)、C1644T(rs72552079),CDA基因A79C(rs2072671)、G208A(rs60369023)的单核苷酸多态性。结果:5种细胞株DCK基因A674G(rs111454937)均为A/A纯合子型,C1644T(rs72552079)均为C/C纯合子型。HL-60、U937、Raji细胞株CDA基因A79C(rs2072671)为A/A纯合子,K562、Ka细胞株为C/A杂合子;5种细胞株CDA基因G208A(rs60369023)均为G/G纯合子型。结论:CDA基因的A79C(rs2072671)SNPs位点基因型在5株血液系统肿瘤细胞株中不尽相同,余所测3个SNPs位点基因型在各细胞株中均相同。

关键词： DCK基因 CDA基因单核苷酸多态性白血病

免疫酶法与ELISA法检测EB病毒VCA-IgA的比较

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标记免疫分析与临床 2009年第2期16卷 93-95页

作者：阳茂春陆爱英李山李若林徐明辉李泰阶劳小霞秦雪广西医科大学第一附属医院临床医学实验部广西南宁530021

为探讨免疫酶法与ELISA在鼻咽癌诊断中的临床价值,检测鼻咽癌组患者与健康对照组血清EB病毒壳抗原抗体,并对两种检测方法的结果进行分析。结果表明:177例鼻咽癌患者中,免疫酶法检测EB-VCA-IgA阳性率高92.1%(163/177),而国产试剂和进口试... 详细信息

为探讨免疫酶法与ELISA在鼻咽癌诊断中的临床价值,检测鼻咽癌组患者与健康对照组血清EB病毒壳抗原抗体,并对两种检测方法的结果进行分析。结果表明:177例鼻咽癌患者中,免疫酶法检测EB-VCA-IgA阳性率高92.1%(163/177),而国产试剂和进口试剂ELISA法检测结果阳性率都较低,分别为65.0%(115/177)和67.2%(119/177),有显著性差异(P0.05)。为此免疫酶法检测EB-VCA-IgA的灵敏度较高,更适合用于鼻咽癌的普查、协助诊断等,具有实际临床意义。

关键词：鼻咽癌 EB病毒壳抗原抗体免疫酶法酶联免疫吸附法

猪丁型冠状病毒N基因原核表达及多克隆抗体制备

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畜牧与兽医 2023年第2期55卷 67-72页

作者：刘磊何颖陈忠伟赵武段群棚赵硕梁家幸周英宁全琛宇许心婷陈婷婷许艺兰李斌蒋冬福卢敬专秦毅斌卢冰霞广西兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001 广西农业职业技术大学广西南宁530007

旨在研究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒的研发提供依据。试验通过RT-PCR的方法扩增PDCoV CH/GX/1468B/2017株完整的N基因并构建原核表达质粒pET32a-N,将pET32a-N转化至大肠杆菌BL21... 详细信息

旨在研究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒的研发提供依据。试验通过RT-PCR的方法扩增PDCoV CH/GX/1468B/2017株完整的N基因并构建原核表达质粒pET32a-N,将pET32a-N转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经诱导表达获得重组N蛋白,纯化后经Western blot方法检测其反应原性,免疫昆明小鼠制备重组N蛋白多克隆抗体并进行效价测定(间接ELISA法)和特异性验证(间接免疫荧光法)。结果显示:重组N蛋白在IPTG终浓度为1.0 mmol/L,37℃诱导表达6 h的条件下可获得最高表达量,该重组蛋白主要以可溶性蛋白的形式表达;Western blot结果显示,纯化后的重组N蛋白可以和PDCoV阳性猪血清发生特异性结合,具有良好的反应原性。制备的多克隆抗体的效价可达1∶64000,间接免疫荧光法结果表明其能特异性识别和结合PDCoV,说明重组N蛋白具有较好免疫原性。提示:PDCoV N蛋白抗原性好,可作为诊断试剂盒的候选抗原。

关键词：猪丁型冠状病毒 N基因原核表达多克隆抗体抗原性分析

维普期刊数据库博看期刊

多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立

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动物医学进展 2021年第8期42卷 1-6页

作者：吴小霞赵莉王冰洁班万里穆尼拉·特列吾汗马长丽乌云花布于其其格陈云英段兰利岳城徐晶艾沙江张壮志新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830000 新疆畜牧科学院兽医研究所/新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心新疆乌鲁木齐830011 新疆塔城地区动物疫病预防控制中心新疆塔城834300 新疆博尔塔拉蒙古自治州博乐市畜牧兽医站新疆博乐833400 新疆博尔塔拉蒙古自治州温泉县畜牧兽医站新疆博州833000

建立多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法,为犬感染多房棘球绦虫的早期诊断提供技术支撑。以5E10H5杂交瘤细胞株腹腔接种Balb/c鼠制备的腹水作为包被抗体,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体血清作为... 详细信息

建立多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法,为犬感染多房棘球绦虫的早期诊断提供技术支撑。以5E10H5杂交瘤细胞株腹腔接种Balb/c鼠制备的腹水作为包被抗体,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体血清作为检测抗体,HRP标记的驴抗兔IgG作为二抗,建立双抗体夹心ELISA方法,检测试验犬(感染多房棘球绦虫)和阴性对照犬犬粪。结果显示,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原具有良好的抗原性并能产生高效价抗体;对该方法的灵敏度进行检测,阳性粪样稀释至1:10000时仍显示为阳性;在感染动态分析中,该方法最早可在犬感染72 h后,最迟6 d后检测到多房棘球绦虫粪抗原。表明建立的方法可用于诊断犬多房棘球绦虫感染,为后期研制犬多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测试剂盒奠定了基础。

关键词：多房棘球绦虫双抗体夹心ELISA 粪抗原