RPL11基因稳定敲低细胞系的构建及验证

作     者：刘伟 郭佩东 贾楠楠 孙英杰 谭磊 刘炜玮 仇旭升 廖瑛 宋翠萍 丁铲 孟春春 LIU Wei;GUO Peidong;JIA Nannan;SUN Yingjie;TAN Lei;LIU Weiwei;QIU Xusheng;LIAO Ying;SONG Cuiping;DING Chan;MENG Chunchun

作者机构：福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)福州350002 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 

出 版 物：《中国细胞生物学学报》 (Chinese Journal of Cell Biology)

年 卷 期：2021年第43卷第6期

页      面：1241-1248页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：上海市兽医生物技术重点实验室开放基金(批准号:Klab201702)资助的课题 

主　　题：RPL11 稳定敲低细胞系 新合成蛋白 细胞活力 

摘      要：针对RPL11基因设计三条不同的shRNA,并分别克隆至带绿色荧光标签的pRNAT-U6.1载体,以用于构建RPL11稳定敲减的细胞系。将重组质粒转染至HeLa细胞中并加入G418进行筛选,随后通过有限稀释法将阳性细胞亚克隆纯化。将扩大培养的亚克隆细胞进行Western blot和qPCR实验验证获得RPL11基因稳定敲低的细胞株。利用CCK-8细胞活力检测试剂盒和Puromycin标记法测定RPL11基因稳定敲低细胞系的生长活力和新生蛋白合成能力,结果表明,RPL11基因稳定敲低后并不影响细胞的活力和新生蛋白合成能力,该细胞系为后续研究RPL11的非核糖体功能奠定了基础。