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黄连素通过诱导线粒体自噬干预呼吸道合胞病毒感染HEp-2细胞的作用机制

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中国药理学通报 2024年第2期40卷 308-316页

作者：崔玉娟赵辉苏东霞胡丹东西北师范大学生命科学学院甘肃兰州730070 北京市延庆区疾病预防控制中心北京102100 北京市延庆区市场监管检验检测监控中心北京102100

目的探讨黄连素(berberine,BE)对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染HEp-2细胞的影响及相关机制。方法将HEp-2细胞感染RSV,并用BE处理。CCK-8实验检测HEp-2细胞存活率;Western blot检测HEp-2细胞NLRP3、ASC、caspase-1、PINK1、Parkin、Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、BNIP3蛋白表达;ELISA检测HEp-2细胞IL-1β分泌水平;流式细胞术检测HEp-2细胞的凋亡率和线粒体膜电位;MitoSOX染色检测HEp-2细胞线粒体ros(mtros);免疫荧光染色检测HEp-2细胞线粒体-自噬小体共定位;环孢素A进行验证实验。结果BE能提高RSV感染HEp-2细胞的活性、降低凋亡率(Pros改善线粒体功能;同时,BE促进RSV感染细胞中线粒体-自噬小体共定位,诱导PINK1/Parkin和BNIP3介导线粒体自噬;环孢素A加重了RSV的感染。结论BE对RSV感染的HEp-2细胞具有保护作用,其机制可能与BE通过诱导PINK1/Parkin和BNIP3介导的线粒体自噬,进而抑制mtros产生改善线粒体功能,并抑制NLRP3炎性小体活化有关。

关键词：黄连素线粒体自噬 RSV NLRP3炎性小体线粒体膜电位 ros 线粒体-自噬小体共定位

反应氧族促进神经保护的量效关系及其机制研究

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Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences 2024年第1期33卷 46-56页

作者：黄荣胡小娇张润芳李晓晖岑娟河南大学第一附属医院神经内科河南开封475000 河南大学药学院天然药物与免疫工程重点实验室河南开封475004

反应氧族(ros)的大量产生是缺血性中风损伤的关键因素。尽管大量研究表明抗氧化剂具有神经保护作用,然而其长期临床疗效始终差强人意。事实上,ros在特定浓度下具有促进细胞增殖、促进保护性自噬、激活自身抗氧化能力等积极的生理作用,... 详细信息

反应氧族(ros)的大量产生是缺血性中风损伤的关键因素。尽管大量研究表明抗氧化剂具有神经保护作用,然而其长期临床疗效始终差强人意。事实上,ros在特定浓度下具有促进细胞增殖、促进保护性自噬、激活自身抗氧化能力等积极的生理作用,在抗氧化干预时尽量保留ros的优势作用或是解决问题的关键。本研究探索了不同剂量下H2O2对PC12和SH-SY5Y神经细胞增殖、自噬、凋亡等生理病理功能的影响,检测了相应细胞内及线粒体内ros的变化规律,绘制了ros发挥优势活性的剂量区间。进一步使用自噬抑制剂及信号通路抑制剂等进行研究,结果表明100μM的H2O2可通过AKT/m-TOR介导的HIF-1α和TFEB信号激活保护性自噬,从而实现神经细胞的保护作用。本研究揭示了ros发挥优势作用的浓度范围,并阐明了其神经保护机制,为全面优化脑缺血后抗氧化剂的使用提供了重要参考。

关键词：反应氧族脑缺血保护性自噬 HIF-1α TFEB

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没食子酸与氯硝柳胺联合灭螺作用研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第2期42卷 251-258页

作者：郑涛刘佳豪李彬李佳珊聂娟熊涛湖南中医药大学医学院病原生物学教研室长沙410006

目的本研究旨在探讨具有交替氧化酶(AOX)抑制活性的中药单体分子没食子酸和氯硝柳胺的联合灭螺效果及其灭螺机制。方法阴性钉螺采自湖北省公安县,随机分为7组,空白对照组(H_(2)O),实验组分别为氯硝柳胺(N1组:0.06 mg/L,N2组:0.1 mg/L)... 详细信息

目的本研究旨在探讨具有交替氧化酶(AOX)抑制活性的中药单体分子没食子酸和氯硝柳胺的联合灭螺效果及其灭螺机制。方法阴性钉螺采自湖北省公安县,随机分为7组,空白对照组(H_(2)O),实验组分别为氯硝柳胺(N1组:0.06 mg/L,N2组:0.1 mg/L)和没食子酸(G1组:0.8 g/L,G2组:1.6 g/L)单独使用,及联合使用(M1组:0.06 mg/L氯硝柳胺+0.8 g/L没食子酸,M2组:0.06 mg/L氯硝柳胺+1.6 g/L没食子酸)。检测各组钉螺经药物浸杀12、24和48 h后的存活率,液氮包埋后切片并染色,光学显微镜下观察并定量分析,检测钉螺软体切片中细胞色素C氧化酶(CCO)和乳酸脱氢酶(LDH)的相对酶活力值,以平均光密度值表示。钉螺匀浆后离心、取上清,DCFH-DA探针共孵育,用BCA蛋白定量试剂盒测定总蛋白含量,多功能酶标仪检测荧光强度,ros值以样品测得的荧光强度(FI)除以蛋白质浓度(μg)的值表示,用总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒测定SOD水平。钉螺死亡率的差异分析采用卡方检验;CCO活性和氧化应激水平的数据用Levene’s Test确定方差齐性后,用Tukey HSD的多重比较方法进行不同组间的两两比较。结果G1和G2组浸杀后未表现出显著的灭螺效应。M1组和M2组在浸杀48 h后的钉螺死亡率分别达到70.0%(56/80)和84.2%(101/120),均高于N1组(44.4%,32/72)(χ2=9.13、32.52,均P0.05)。N1和N2组钉螺的LDH活性呈下降趋势;M1组和M2组钉螺体内CCO和LDH活性均降低(均Pros水平分别为(1619.00±168.25)FI/μg和(1866.65±211.79)FI/μg,M2组在48 h后的ros水平达到(2451.29±195.91)FI/μg,均高于空白对照组在相应时间点的(802.37±114.69)、(1393.81±86.12)FI/μg(均P<0.05)。结论没食子酸显著增强了低浓度氯硝柳胺的灭螺效果,其灭螺机制为通过阻断AOX的代偿上调,进一步加重了钉螺能量代谢失衡和氧化应激压力。

关键词：湖北钉螺没食子酸氯硝柳胺灭螺效果葡萄糖代谢酶活性氧化应激水平

黄连素下调NRAV和PI3K/AKT通路减轻RSV感染致HEp-2细胞的损伤

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中国药理学通报 2024年第4期40卷 747-755页

作者：崔玉娟赵辉苏东霞张莹胡丹东西北师范大学生命科学学院甘肃兰州730070 北京市延庆区疾病预防控制中心北京102100 北京市延庆区市场监管检验检测监控中心北京102100

目的探讨长链非编码RNA NRAV(LncRNA NRAV)和PI3K/AKT通路在黄连素(berberine,BE)减轻RSV感染致HEp-2细胞损伤中的机制。方法将HEp-2细胞感染RSV,并用BE、PI3K激活剂740Y-P处理或过表达NRAV。qRT-PCR检测NRAV、RSV-F、NS2表达水平;CCK-8实验检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞的凋亡率和线粒体膜电位;ATP检测试剂盒检测ATP水平;Western blot检测细胞PI3K、AKT、PINK1、Parkin、Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、BNIP3、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达;MitoSOX染色检测细胞线粒体ros(mtros);ELISA检测细胞IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平。结果过表达NARV细胞凋亡率、RSV活性增加,敲低后结果相反;BE能显著抑制NRAV和PI3K/AKT通路(P<0.05),改善线粒体功能、诱导线粒体自噬,提高细胞的活性、降低凋亡率(P<0.05),并降低NLRP3炎性小体活化水平和IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平(P<0.05)。过表达NRAV或740Y-P处理可逆转BE对RSV感染HEp-2细胞的改善作用。结论BE能够减轻RSV感染所致HEp-2细胞损伤,其机制可能与BE下调NRAV和PI3K/AKT通路,诱导线粒体自噬,进而减轻线粒体损伤和炎症反应有关。

关键词：黄连素 RSV LncRNA NRAV PI3K/AKT通路线粒体损伤 HEp-2细胞损伤

腹腔镜手术联合辛伐他汀及戈舍瑞林治疗子宫内膜异位症对卵巢储备功能的影响

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医药论坛杂志 2024年第17期45卷 1877-1880页

作者：黄娟王静李伦平顶山市第一人民医院妇产科河南平顶山467000 平顶山市第一人民医院检验科河南平顶山467000

目的探讨辛伐他汀联合戈舍瑞林及腹腔镜治疗子宫内膜异位症(endometriosis, EMs)对卵巢储备功能及血清抗子宫内膜抗体(endometrial antibody, EMAb)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)、单核细胞趋化... 详细信息

目的探讨辛伐他汀联合戈舍瑞林及腹腔镜治疗子宫内膜异位症(endometriosis, EMs)对卵巢储备功能及血清抗子宫内膜抗体(endometrial antibody, EMAb)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)的影响。方法选取2020年4月至2022年5月平顶山市第一人民医院诊治的82例EMs患者作为研究对象,分为两组,每组各41例。结果观察组治疗后总有效率、VE、SOD、1年妊娠率高于对照组,而E_(2)、FSH、LH、EMAb、PAI-1、MCP-1、ros和复发率低于对照组(P<0.05)。结论辛伐他汀联合戈舍瑞林及腹腔镜治疗EMs具有较为理想效果,有利于改善卵巢功能和降低EMAb、PAI-1、MCP-1表达。

关键词：辛伐他汀戈舍瑞林腹腔镜手术子宫内膜异位症卵巢储备功能抗子宫内膜抗体纤溶酶原激活物抑制剂-1 单核细胞趋化蛋白-1

甘草甜素调节HMGB1/RAGE信号通路对高糖诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响

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中西医结合心脑血管病杂志 2024年第11期22卷 1961-1966页

作者：潘娟王琪田艳妮咸阳市中心医院陕西咸阳712000 西安交通大学第一附属医院西安710089

目的:甘草甜素(Gly)调节高迁移率族蛋白(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路对高糖诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,将其分为7组:对照组、高糖组、高糖+Gly组、高糖+pcDNA3.1空载体组、高糖+pcD... 详细信息

目的:甘草甜素(Gly)调节高迁移率族蛋白(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路对高糖诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,将其分为7组:对照组、高糖组、高糖+Gly组、高糖+pcDNA3.1空载体组、高糖+pcDNA3.1-HMGB1组、高糖+Gly+pcDNA3.1空载体组、高糖+Gly+pcDNA3.1-HMGB1组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力;V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)法检测细胞凋亡率;透射电镜观察细胞自噬;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病基因-2相关X蛋白基因(Bax)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Beclin-1凋亡、自噬相关蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测活性氧(ros)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测HMGB1、RAGE mRNA表达水平。结果:与对照组比较,高糖组H9c2细胞活力下降,细胞凋亡率、自噬小体数量及Bax、LC3、Beclin-1蛋白表达增加,IL-1β、TNF-α、ros水平及HMGB1、RAGE mRNA表达增加,差异均有统计学意义(Pros水平及HMGB1、RAGE mRNA表达减少,差异均有统计学意义(Pros水平及HMGB1、RAGE mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Gly能够减轻高糖诱导的H9c2细胞炎症和氧化应激反应,抑制其凋亡和自噬,可能与抑制HMGB1/RAGE信号通路有关。

关键词：甘草甜素高迁移率族蛋白晚期糖基化终产物受体高糖心肌细胞细胞凋亡细胞自噬实验研究

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卵巢型子宫内膜异位症患者外周血ros、PON-1水平和miR-20a表达水平及与病情的关系

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临床和实验医学杂志 2024年第4期23卷 409-413页

作者：周经纬赵玥汤娟娟卫红陆静江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院)计划生育科江苏南京210029

目的探究卵巢型子宫内膜异位症(EMs)患者外周血氧自由基(ros)、氧磷酶-1(PON-1)水平和miR-20a表达水平及与病情的关系。方法回顾性选取2020年3月至2023年3月在江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院)进行治疗的113例卵巢型EMs患者纳... 详细信息

目的探究卵巢型子宫内膜异位症(EMs)患者外周血氧自由基(ros)、氧磷酶-1(PON-1)水平和miR-20a表达水平及与病情的关系。方法回顾性选取2020年3月至2023年3月在江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院)进行治疗的113例卵巢型EMs患者纳入研究组,并根据美国生育协会分期标准对其进行分组:62例Ⅰ~Ⅱ期患者纳入轻度组,51例Ⅲ~Ⅳ期患者纳入重度组。另选30例在本院进行治疗的盆腔炎且子宫内膜正常患者纳入对照组。比较研究组与对照组患者、轻度组与重度组患者的ros、PON-1水平和miR-20a相对表达水平,比较轻度组与重度组的血清炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,并探究其与患者病情严重程度的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ros、PON-1水平和miR-20a表达水平对重度卵巢型EMs的诊断价值。结果研究组患者的ros水平和miR-20a相对表达水平分别为(485.55±32.12)pg/mL、2.48±0.33,均高于对照组患者[(326.26±28.12)pg/mL、1.03±0.24],PON-1水平为(152.23±8.78)pg/mL,低于对照组患者[(212.26±8.23)pg/mL],差异均有统计学意义(Pros水平和miR-20a相对表达水平分别为(498.22±18.45)pg/mL、2.64±0.37,均高于轻度组患者[(433.28±23.16)pg/mL、1.97±0.21],PON-1水平为(142.04±5.99)pg/mL,低于轻度组患者[(164.56±5.48)pg/mL],差异均有统计学意义(Pros水平,miR-20a相对表达水平,IL-6、IL-8、MCP-1、TNF-α水平与患者的临床分期呈正相关(r=0.847、0.751、0.862、0.685、0.830、0.859,Pros、PON-1水平,miR-20a相对表达水平诊断重度卵巢型子宫内膜异位的ROC曲线的曲线下面积(AUC)分别为0.991、0.997、0.936,具有较好诊断价值(Pros水平、miR-20a相对表达水平在卵巢型EMs患者中升高,PON-1水平表达下调,且对其病情严重程度具有一定诊断价值,可用于临床辅助诊断。

关键词：子宫内膜异位症微小RNA 氧化应激因子氧自由基氧磷酶-1 miR-20a

基于JNK信号通路和线粒体氧化应激研究儿茶素拮抗对乙酰氨基酚诱导肝损伤的作用机制

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中草药 2024年第8期55卷 2589-2600页

作者：孙武燕张娟张炫王春宝彭秋玲白庆云宜春学院化学与生物工程学院江西宜春336000

目的基于c-jun N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路探讨儿茶素对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导肝损伤的作用及机制。方法ICR小鼠随机分为对照组、模型组以及儿茶素(50、100 mg/kg)组,小鼠连续3 d ig儿茶素,末次给... 详细信息

目的基于c-jun N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路探讨儿茶素对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导肝损伤的作用及机制。方法ICR小鼠随机分为对照组、模型组以及儿茶素(50、100 mg/kg)组,小鼠连续3 d ig儿茶素,末次给予儿茶素1 h后ip APAP(400 mg/kg),6 h后采用苏木素-伊红(HE)染色评估小鼠肝脏组织病变,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性及肝脏中谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;考察儿茶素对细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)代谢酶活性的影响。人正常肝细胞L02给予40、80μmol/L儿茶素,15 min后给予15 mmol/L APAP孵育6 h,检测活性氧(reactive oxygen species,ros)水平、线粒体膜电位变化、线粒体呼吸链复合物I活性、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量、胞质B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2 associated X protein,Bax)、第2个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂(second mitochondria-derived activator of caspases,Smac)、凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)蛋白表达以及线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2,Mfn2)、Bax蛋白表达和p-JNK、JNK蛋白表达。给予JNK激活剂后,考察儿茶素对APAP诱导的肝细胞损伤作用。结果儿茶素显著降低APAP诱导的肝损伤小鼠血清中ALT、AST活性(Pros水平(P<0.05),显著下调线粒体中Drp1、Bax和胞质中Smac、AIF蛋白表达(P<0.05),显著上调线粒体中Mfn2和胞质Bax的蛋白表达(P<0.05),并抑制JNK的磷酸化水平(P<0.05)。给予JNK激活剂后,儿茶素的抗氧化作用和对肝脏的保护作用明显减弱(P<0.05、0.01)。结论儿茶素通过抑制JNK信号通路减轻线粒体氧化应激,进而拮抗APAP诱导的肝损伤。

关键词：儿茶素对乙酰氨基酚肝损伤线粒体氧化应激 JNK信号通路

贝那鲁肽预处理对高糖诱导人视网膜色素上皮细胞损伤的影响

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哈尔滨医科大学学报 2024年第1期58卷 5-9页

作者：矫梦瑶刘娟哈尔滨医科大学附属第一医院五官科手术室黑龙江哈尔滨150001

目的探讨贝那鲁肽对高糖诱导人视网膜色素上皮(adult retinal pigment epithelial-19,ARPE-19)细胞损伤的影响及可能机制。方法 ARPE-19细胞分为4组,对照组细胞于正常葡萄糖(5 mmol/L)中培养,高糖组ARPE-19细胞于30 mmol/L葡萄糖中培养... 详细信息

目的探讨贝那鲁肽对高糖诱导人视网膜色素上皮(adult retinal pigment epithelial-19,ARPE-19)细胞损伤的影响及可能机制。方法 ARPE-19细胞分为4组,对照组细胞于正常葡萄糖(5 mmol/L)中培养,高糖组ARPE-19细胞于30 mmol/L葡萄糖中培养,贝那鲁肽低、高浓度组:用贝那鲁肽(50 nmol/L、100 nmol/L)培养。MTT法观察细胞增殖率,流式细胞计数检测凋亡率,Hoechst33258染色观察细胞凋亡,DCFH-DA染色检测细胞氧化应激水平,Western blot检测人磷酸化磷酸肌醇3激酶(phosphorylation phosphotylinosital 3 kinase, p-PI3K)以及磷酸化苏氨酸蛋白激酶(phosphorylated serine-threonine protein kinase, p-AKT)的表达。结果 MTT结果显示,贝那鲁肽处理后ARPE-19细胞增殖率升高,与高糖组比较差异具有统计学意义(Pros)的升高;Western blot印迹法结果显示,贝那鲁肽干预后p-PI3K及p-AKT蛋白表达上调,与高糖组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论贝那鲁肽通过调节氧化应激和细胞凋亡来减轻高糖引起的ARPE-19细胞损伤。

关键词：贝那鲁肽高糖视网膜色素上皮细胞氧化应激凋亡