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Acta Oceanologica Sinica 2016年第6期35卷 19-28页

作者： dong zhongdian QI Qian ZHANG Ning SHAO Changwei ZHANG Liyan WEN Haishen CHEN Songlin Fisheries College Ocean University of China Yellow Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy of Fishery Sciences Function Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes National Laboratory for Marine Science and Technology

The signaling molecule hedgehog（Hh） is essential for cellular signaling required for body pattern formation in embryonic and individual development in vertebrate and *** 1（Ptc1）,a receptor of Hh,mediates the activity of Hh by binging the Hh *** this study,the Ptc1 of half-smooth tongue sole Cynoglossus semilaevis（CsPtc1） was cloned and *** full-length of CsPtc1 cDNA is 5 212 nucleotides（nt）,and encodes a protein with 1 543 amino acid ***1 shared many features with Ptc1 of other telesot ***-time quantitative PCR revealed CsPtc1 mRNA expressed in brain,liver,heart,gill,intestines,spleen,gonad and kidney,with expression level in testis significantly higher than in *** testis,hybridization signals were mainly detected in primary spermatocytes,secondary spermatocytes,and sertoli cells,while weak signals were found in ***,the degree of methylation is higher in female than in male and *** indicate that CsPtc1 may be involved in Desert Hedgehog（DHH） maintenance of the male and pseudo-male germ line and spermatogenesis.

关键词： half-smooth tongue sole male and female Patched 1 RACE qRT-PCR methylation

Cloning,Sequencing of the HSC70 Gene in Ctenopharyngodon idella

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Wuhan University Journal of Natural Sciences 2014年第3期19卷 235-244页

作者： FU Yong LI Chunge LIU Feng dong zhongdian JI Xiangshan CHEN Hongju College of Animal Science Shandong Agricultural University Shanghai Fisheries Research Institute

A cDNA encoding heat shock cognate protein 70（HSC70）was cloned from liver of grass carp（Ctenopharyngodon idella）（GenBank JF436930）.This cDNA was found out to contain2 346 bp in length,including 1 950 bp of complete coding sequence encoding 649 amino acids（aa）,plus 89 bp of 5′-UTR and 307 bp of3′-*** of its genomic structure revealed that its corresponding gene contained seven exons and six *** analysis indicated that it shared 99%of identity with HSC70 of breams and 86%of identity with HSP70 of *** RT-PCR analysis revealed that at 28℃,this gene was expressed in abdominal fat,muscle,intestines,brain,middle kidney,head kidney,gonads,swim bladder,liver,heart,spleen,gills,and fins with expression level in liver being the highest（p〈0.05）,followed by that in the gonads;at 36℃,its mRNA expression level was increased at first but then decreased thereafter under heat shock stress,indicating that its expression can be regulated by heat *** conclusion,cloning and expression analysis identified a cDNA encoding a constitutive HSP70 gene that is expressed in many tissues of Ctenopharyngodon idella and its expression was down-regulated by heat shock.

关键词： Ctenopharyngodon idella HSC70 heat shock mRNA expression

iTRAQ-based analysis of 17β-estradiol induced proteome in Chinese tongue sole Cynoglossus semilaevis

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Journal of Oceanology and Limnology 2019年第5期37卷 1659-1668页

作者： ZHU Ying LI Yangzhen LI Hailong WANG Lei ZHANG Ning LIU Yang MENG Liang XU Xiwen dong zhongdian WEI Min GUO Hua CUI Zhongkai LI Xihong SHAO Changwei XU Wenteng Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries Ministry of AgricultureYellow Sea Fisheries Research InstituteChinese Academy of Fishery SciencesQingdao 266071China Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes Qingdao National Laboratory for Marine Science and TechnologyQingdao 266237China Research Institute of Metabolic Disease Qingdao UniversityQingdao 266003China

The phenomenon of sex dimorphism prevails among many fi sh species. It has attracted the general research interest due to its close relationship to fi sh growth and thus aquaculture productivity. In Chinese tongue sole ( Cynoglossus semilaevis ), 17β-estradiol (E2) can be used reportedly to induce the feminization of fi sh, although the detailed regulatory network remained elusive. We treated the tongue sole fry before sex diff erentiation with E2 (10 and 30 μg/L) to identify potential targets of E2 in Chinese tongue sole. The E2 treatment indeed induced genetic male fi sh sex-reversal to phenotypic female. Using an iTRAQ-based comparative proteomic analysis, 409 proteins that diff erentially expressed after E2 induction were identifi ed, including 259 up-regulated and 150 down-regulated proteins. Furthermore, 19 diff erentially expressed proteins identifi ed in the comparative proteomic analysis were selected to assess their transcription and eight of them exhibited the same tendency. Functions of the eight proteins included mainly nucleotide and protein binding. Interestingly, a far upstream element-binding protein 3-like isoform exhibited the signifi cant upregulation both at transcription and translation levels after E2 treatment. This work identifi ed a set of candidate proteins for E2 response and deepened our understanding of E2 regulatory mechanism.

关键词： Cynoglossus semilaevis 17β-estradiol sex reversal proteome iTRAQ analysis

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重金属铜、铅、锌对尾草履虫的联合毒性

基因组学与应用生物学 2021年第9期40卷 3073-3078页

作者：黄皓林晓雨张宁董忠典广东海洋大学水产学院南海水产经济动物增养殖重点实验室湛江524088

为了解重金属混合物对尾草履虫(Paramecium caudatum)的联合毒性,本研究采用急性静水式生物测试法,以12 h的半致死浓度(lethal concentration 50,LC_(50))作为毒性评价标准,运用水生毒理联合效应相加指数法对重金属的联合毒性进行评价,... 详细信息

为了解重金属混合物对尾草履虫(Paramecium caudatum)的联合毒性,本研究采用急性静水式生物测试法,以12 h的半致死浓度(lethal concentration 50,LC_(50))作为毒性评价标准,运用水生毒理联合效应相加指数法对重金属的联合毒性进行评价,测试了铜离子(Cu^(2+))、铅离子(Pb^(2+))与锌离子(Zn^(2+))对尾草履虫的联合毒性。结果表明:Cu^(2+)、Pb^(2+)与Zn^(2+)对尾草履虫单一毒性的12 h-LC_(50)分别为0.45μmol/L(0.0288 mg/L)、1.46μmol/L(0.3025 mg/L)、3.06μmol/L(0.2001 mg/L),单一毒性作用强弱关系为:Cu^(2+)>ZnCu^(2+)>Pb^(2+);Cu^(2+)/Pb^(2+)、Cu^(2+)/Zn^(2+)、Pb^(2+)/Zn^(2+)二元联合对尾草履虫的联合毒性均表现为拮抗作用。研究结果为重金属对水生物的联合毒性提供数据,也为制定水体重金属安全浓度提供参考。

关键词：尾草履虫重金属联合毒性

炔诺酮短期暴露下海洋青鳉(Oryzias melastigma)仔鱼转录组学分析

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基因组学与应用生物学 2023年第9期42卷 952-961页

作者：宦章黎学友梁燕秋董忠典广东海洋大学水产学院南海水产经济动物增养殖重点实验室湛江524088 广东海洋大学化学与环境学院湛江524088 广东海洋大学水产学院广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室湛江524088

为揭示炔诺酮(norethisterone)对水生生物的影响,本研究利用质量浓度为1000 ng/L的炔诺酮处理海洋青鳉(Oryziasmelastigma)仔鱼24 h,分析炔诺酮对海洋青鳉仔鱼转录水平的影响。结果表明,炔诺酮处理导致海洋青鳉1848个基因转录模式发生... 详细信息

为揭示炔诺酮(norethisterone)对水生生物的影响,本研究利用质量浓度为1000 ng/L的炔诺酮处理海洋青鳉(Oryziasmelastigma)仔鱼24 h,分析炔诺酮对海洋青鳉仔鱼转录水平的影响。结果表明,炔诺酮处理导致海洋青鳉1848个基因转录模式发生显著改变,其中,728个基因上调,1120个基因下调。GO富集结果显示,差异表达基因在“肽酶活性,作用于L-氨基酸肽”和“辅因子结合”等途径显著富集。KEGG富集显示,差异表达基因在铁死亡、DNA复制和脂肪酸代谢通路显著富集。其中,在铁死亡通路中,acsl4、acsl3和gass下调。在DNA复制和脂肪酸代谢通路中,所有差异表达基因全部下调。结果表明,炔诺酮暴露可影响海洋青鳉仔鱼的生长和发育有关基因的转录水平,对海洋青鳉的早期发育和生长产生不利影响。

关键词：炔诺酮海洋青鳉(Oryzias melastigma) 转录组仔鱼早期发育

弓背青鳉早期胚胎色素细胞发生及相关基因表达规律分析

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水产学报 2021年第12期45卷 1965-1972页

作者：黄嘉慧郭昱嵩杜娟董忠典王中铎广东海洋大学水产学院南海水产经济动物增养殖重点实验室湖南师范大学生命科学学院省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室

为了检验"依照自然选择理论,不同群体的体色形成过程可能受到光照等环境因素的选择作用而发生遗传分化"这一假说,实验以相同条件下人工繁育的不同纬度的弓背青鳉群体(饶平、高桥、三亚)后代(F)为材料,使用体式荧光显微镜对早期胚胎的黑... 详细信息

为了检验"依照自然选择理论,不同群体的体色形成过程可能受到光照等环境因素的选择作用而发生遗传分化"这一假说,实验以相同条件下人工繁育的不同纬度的弓背青鳉群体(饶平、高桥、三亚)后代(F)为材料,使用体式荧光显微镜对早期胚胎的黑色素细胞和虹彩色素细胞进行观察统计,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析4种色素细胞发生关键基因(黑色素形成的限速酶基因tyr、虹彩色素细胞相关基因alk、sox10和pax3)在高桥群体后代早期发育(6～10、12和14肌节期)过程中的表达加以验证。结果表明,高纬度饶平群体早期胚胎的黑色素细胞和虹彩色素细胞分别集中出现于8肌节期和10肌节期,占比为81.9%和52.1%;高桥群体早期胚胎的黑色素细胞和虹彩色素细胞分别集中出现于7和11肌节期,占比47.7%和42.1%;而三亚群体早期胚胎的黑色素细胞和虹彩色素细胞分别集中出现于8和12肌节期,占比44.0%和62.2%。对高桥F6胚胎样本的色素细胞发生相关基因经qRT-PCR检测结果发现,tyr表达水平在7～9肌节期呈现明显上调,随后趋缓;而抑制黑色素形成通路并启动虹彩细胞分化通路的sox10和pax3与下游的虹彩色素细胞相关基因alk在10～14肌节期均呈现一致的单峰表达模式。综上,本研究中弓背青鳉早期发育阶段的黑色素细胞和虹彩色素发生模式与鱼类经典理论相符,受tyr、alk、sox10和pax3等基因的有序表达的调控,证实了发生阶段存在由遗传因素决定的群体分化,低纬度群体的虹彩细胞发生更晚,其具体机制仍待进一步研究。

关键词：弓背青鳉色素细胞发生早期胚胎群体分化

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Nramp基因克隆与表达分析及SNP筛选

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渔业科学进展 2016年第4期37卷 116-127页

作者：邢贺飞高峰涛张永珍董忠典陈松林农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266071 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 中国海洋大学海洋生命学院青岛266003

天然抗性相关巨噬细胞蛋白(Natural resistance-associated macrophage protein,Nramp)属于膜整合转运蛋白,具有抑制胞内寄生菌侵染、调节巨噬细胞的抗菌活性等作用。本研究对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Nramp基因进行了克隆和表... 详细信息

天然抗性相关巨噬细胞蛋白(Natural resistance-associated macrophage protein,Nramp)属于膜整合转运蛋白,具有抑制胞内寄生菌侵染、调节巨噬细胞的抗菌活性等作用。本研究对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Nramp基因进行了克隆和表达分析,并对其与抗鳗弧菌感染相关的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位点进行了筛选。该基因c DNA序列全长3717 bp,其中开放阅读框(Open reading frame,ORF)1677 bp,所编码蛋白含有558个氨基酸,该蛋白具有Nramp家族的典型特征,包括10个跨膜区(Transmembrane,TM)、1个由20个氨基酸残基组成的胞质内转运蛋白特征结构域(Consensus Transport Motif,CTM)。半滑舌鳎Nramp的ORF末端有1个类似于脊椎动物Nramp2中的铁反应控制蛋白结合位点(Iron-responsive regulatory protein-binding site,IRE)。半滑舌鳎Nramp与其他14个物种的Nramp氨基酸序列同源性在63%-91%之间,系统进化分析表明,半滑舌鳎Nramp和所有鱼类Nramp聚集为一簇,与其他物种Nramp2的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR分析显示,Nramp基因在半滑舌鳎脾脏和肾脏中的表达量最高,而在肌肉和性腺中的表达量最低;在哈维氏弧菌感染的半滑舌鳎肾脏、脾脏和肝脏中表达量呈升高趋势,而在鳃中则表现为下调趋势。利用直接测序法检测感染鳗弧菌后同一家系的233个个体(抗病个体165个,感病个体68个),共检测到15个SNP位点,对其中3个SNP位点即SNP-g.3113(T→C)、SNP-g.3125(A→G)和SNP-g.3164(A→T)进行测序分型后发现,SNPg.3125(A→G)的等位基因(G)频率和基因型(GG)频率与半滑舌鳎抗鳗弧菌疾病呈极显著相关(P<0.01)。研究结果表明,Nramp基因不同基因型对半滑舌鳎的抗病能力有着极其重要的影响,SNP-g.3125(A→G)可作为潜在的抗性遗传标记位点。本研究将为半滑舌鳎抗性品系培育提供技术支持。

关键词：半滑舌鳎天然抗性相关巨噬细胞蛋白(Nramp) 基因克隆 RT-PCR 单核苷酸多态性(SNP)

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湖栖鳍虾虎鱼皮肤和眼睛转录组比较

水产学报 2021年第8期45卷 1317-1326页

作者：黎学友谢明花黄承勤汪淳王中铎郭昱嵩董忠典广东海洋大学水产学院南海水产经济动物增养殖重点实验室

为了对湖栖鳍虾虎鱼的皮肤和眼睛进行转录组比较分析,实验通过测序原始数据,经denovo拼接、组装共获得103686个单基因(unigene), N50和平均长度分别为1 456和2 490 bp。在Nr、Nt、KO、SwissProt、PFAM、GO及KOG数据库中对上述unigenes... 详细信息

为了对湖栖鳍虾虎鱼的皮肤和眼睛进行转录组比较分析,实验通过测序原始数据,经denovo拼接、组装共获得103686个单基因(unigene), N50和平均长度分别为1 456和2 490 bp。在Nr、Nt、KO、SwissProt、PFAM、GO及KOG数据库中对上述unigenes进行注释,分别有57 380、 37 343、 31 700、 51 277、 47 020、 47 555和25 604个unigenes获得注释。对差异基因进行KEGG富集发现,在黑色素生成途径中,tyr、tyrp1和tyrp2等基因在皮肤中明显下调。基因表达差异分析显示,在湖栖鳍虾虎鱼皮肤和眼睛中共有8 113个差异表达基因(DEGs),其中3 174个DEGs在皮肤中上调,4 939个DEGs在眼睛中上调。通过实时荧光定量PCR(qPCR)对10个DEGs的验证,确定了RNA-Seq分析正确。本研究丰富了湖栖鳍虾虎鱼的体色研究,为湖栖鳍虾虎鱼遗传资源的利用提供了数据,也为进一步研究鱼类绚丽的体色形成机制提供了参考。

关键词：湖栖鳍虾虎鱼皮肤眼睛 RNA-Seq 色素形成体色

尼罗罗非鱼致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

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东北农业大学学报 2012年第6期43卷 110-115页

作者：董忠典周芬娜袁颜颜冯艳艳王慧山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

从自然患病的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肝脏组织分离出2株细菌,命名为M-O1和M-02。用M-O1和M-02分别在实验室人工感染健康的尼罗罗非鱼,被感染鱼3周内全部死亡,且患病症状与自然发病症状一致。从被感染的鱼体中分离得到2株类... 详细信息

从自然患病的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肝脏组织分离出2株细菌,命名为M-O1和M-02。用M-O1和M-02分别在实验室人工感染健康的尼罗罗非鱼,被感染鱼3周内全部死亡,且患病症状与自然发病症状一致。从被感染的鱼体中分离得到2株类似细菌(分别命名为W-01、W-02),说明分离的菌株为本次尼罗罗非鱼出血性败血症的病原菌。通过生理生化方法进行种属鉴定,确认以上分离到的4株细菌均为嗜水气单胞菌(Aeromonaz hydrophila),分别命名为M-O1、M-02、W-01、W-02。用19种常见药物对上述菌株进行药敏试验,4菌株对丁胺卡那、氟哌酸、庆大霉素、链霉素、恩诺沙星、新霉素、氟罗沙星和复方新诺明极为敏感;对氧哌嗪青霉素、利福平、麦迪霉素、红霉素、罗红霉素和阿奇霉素敏感,对羧苄青霉素、头孢噻吩、先锋霉素、氨苄青霉素和林可霉素为不敏感。

关键词：尼罗罗非鱼败血症嗜水气单胞菌药敏试验

半滑舌鳎TLR5S三种剪切型基因的克隆与表达分析

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中国水产科学 2016年第1期23卷 10-20页

作者：张文婷向晋松李海龙张宁董忠典高峰涛陈松林大连海洋大学水产与生命学院中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源重点实验室青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室上海海洋大学水产与生命学院

Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)是TLRs家族成员之一,可分为跨膜型TLR5M和鱼类特有的可溶型TLR5S,它们可以识别致病菌表面的鞭毛蛋白并协同作用激活免疫反应。为了研究半滑舌鳎受到病原感染后TLR5S参与免疫反应的作用,本研究使... 详细信息

Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)是TLRs家族成员之一,可分为跨膜型TLR5M和鱼类特有的可溶型TLR5S,它们可以识别致病菌表面的鞭毛蛋白并协同作用激活免疫反应。为了研究半滑舌鳎受到病原感染后TLR5S参与免疫反应的作用,本研究使用RACE技术获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)TLR5S全长c DNA序列。TLR5S c DNA有3种剪切型:***5S x1,***5S x2和***5S x3。这3种剪切型的相同区域为308 bp 5′非编码区(5′UTR)和1701 bp开放阅读框(ORF),不同的3′UTR分别为138 bp、364 bp和637 bp。***5S共编码567个氨基酸,预测编码蛋白质分子量为64.03 k D,等电点为8.49。氨基酸多重序列比对结果显示,***5S氨基酸序列与其他脊椎动物TLR5S氨基酸序列具有较高的相似性,其中与牙鲆相似度高达61%,表明***5S在进化上的具有一定的保守性。Real-time PCR结果表明该基因在半滑舌鳎的不同组织均有表达,其中在肝的表达量最高,在脾的表达量最低。此外,检测***5S 3′端的不同剪切型在肝、脾、头肾、小肠中的表达,结果显示***5S x3只在肝中高表达,而***5S x1则在肝和小肠中都有中等程度表达。鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染半滑舌鳎实验表明,注射菌液6 h后,***5S基因在肾、小肠、肝和脾4个组织中的表达量都有显著上升;注射鳗弧菌48 h后,以上4种组织中表达量均呈现降低的变化。上述实验结果说明,***5S基因可能参与了半滑舌鳎抗弧菌感染的免疫反应。

关键词：半滑舌鳎 TLR5S 鳗弧菌基因克隆表达