半滑舌鳎TLR5S三种剪切型基因的克隆与表达分析

作     者：张文婷 向晋松 李海龙 张宁 董忠典 高峰涛 陈松林 ZHANG Wenting;XIANG Jinsong;LI Hailong;ZHANG Ning;DONG Zhongdian;GAO Fengtao;CHEN Songlin

作者机构：大连海洋大学水产与生命学院 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源重点实验室 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 上海海洋大学水产与生命学院 

出 版 物：《中国水产科学》 (Journal of Fishery Sciences of China)

年 卷 期：2016年第23卷第1期

页      面：10-20页

核心收录：

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

基　　金：国家自然科学基金重点项目(31530078) 山东省泰山学者攀登计划专项 

主　　题：半滑舌鳎 TLR5S 鳗弧菌 基因克隆 表达 

摘      要：Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)是TLRs家族成员之一,可分为跨膜型TLR5M和鱼类特有的可溶型TLR5S,它们可以识别致病菌表面的鞭毛蛋白并协同作用激活免疫反应。为了研究半滑舌鳎受到病原感染后TLR5S参与免疫反应的作用,本研究使用RACE技术获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)TLR5S全长c DNA序列。TLR5S c DNA有3种剪切型:***5S x1,***5S x2和***5S x3。这3种剪切型的相同区域为308 bp 5′非编码区(5′UTR)和1701 bp开放阅读框(ORF),不同的3′UTR分别为138 bp、364 bp和637 bp。***5S共编码567个氨基酸,预测编码蛋白质分子量为64.03 k D,等电点为8.49。氨基酸多重序列比对结果显示,***5S氨基酸序列与其他脊椎动物TLR5S氨基酸序列具有较高的相似性,其中与牙鲆相似度高达61%,表明***5S在进化上的具有一定的保守性。Real-time PCR结果表明该基因在半滑舌鳎的不同组织均有表达,其中在肝的表达量最高,在脾的表达量最低。此外,检测***5S 3′端的不同剪切型在肝、脾、头肾、小肠中的表达,结果显示***5S x3只在肝中高表达,而***5S x1则在肝和小肠中都有中等程度表达。鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染半滑舌鳎实验表明,注射菌液6 h后,***5S基因在肾、小肠、肝和脾4个组织中的表达量都有显著上升;注射鳗弧菌48 h后,以上4种组织中表达量均呈现降低的变化。上述实验结果说明,***5S基因可能参与了半滑舌鳎抗弧菌感染的免疫反应。