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Spirulina platensis aqueous extracts ameliorate colonic mucosal damage and modulate gut microbiota disorder in mice with ulcerative colitis by inhibiting inflammation and oxidative stress

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Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 2022年第6期23卷 481-501页

作者： Jian WANG Liqian SU Lun ZHANG Jiali ZENG Qingru CHEN Rui DENG Ziyan WANG Weidong KUANG xiaobao jin Shuiqing GUI Yinghua XU Xuemei LU Guangdong Provincial Key Laboratory of Pharmaceutical Bioactive Substances School of Life Science and BiopharmaceuticsGuangdong Pharmaceutical UniversityGuangzhou 510006China School of Pharmacy Guangdong Pharmaceutical UniversityGuangzhou 510006China Intensive Care Unit Shenzhen Second People’s Hospitalthe First Affiliated Hospital of Shenzhen UniversityShenzhen 518031China Key Laboratory of the Ministry of Health for Research on Quality and Standardization of Biotech Products National Institutes for Food and Drug ControlBeijing 102629China

Ulcerative colitis(UC)is a chronic and recurrent inflammatory bowel disease(IBD)that has become a major gastroenterologic problem during recent *** complicating factors are involved in UC development such as oxidative stress,inflammation,and microbiota *** factors exacerbate damage to the intestinal mucosal *** platensis is a commercial alga with various biological activity that is widely used as a functional ingredient in food and beverage ***,there have been few studies on the treatment of UC using *** aqueous extracts(SP),and the underlying mechanism of action of SP against UC has not yet been ***,we aimed to investigate the modulatory effect of SP on microbiota disorders in UC mice and clarify the underlying mechanisms by which SP alleviates damage to the intestinal mucosal *** sulfate sodium(DSS)was used to establish a normal human colonic epithelial cell(NCM460)injury model and UC animal *** mitochondrial membrane potential assay 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)and staining with Annexin V-fluorescein isothiocyanate(FITC)/propidium iodide(PI)and Hoechst 33258 were carried out to determine the effects of SP on the NCM460 cell injury ***,hematoxylin and eosin(H&E)staining,transmission electron microscopy(TEM),enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA),quantitative real-time polymerase chain reaction(qPCR),western blot,and 16S ribosomal DNA(rDNA)sequencing were used to explore the effects and underlying mechanisms of action of SP on UC in C57BL/6 *** vitro studies showed that SP alleviated DSS-induced NCM460 cell *** also significantly reduced the excessive generation of intracellular reactive oxygen species(ROS)and prevented mitochondrial membrane potential reduction after DSS *** vivo studies indicated that SP administration could alleviate the severity of DSS-induced colonic mucosal damage compared with the cont

关键词： Spirulina platensis aqueous extracts Ulcerative colitis Oxidative stress Inflammation Antioxidant Gut microbiota

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荧光定量PCR与常规PCR法检测GⅡ型札幌样病毒的比较

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中国食品卫生杂志 2012年第3期24卷 215-217页

作者：曾爱华金小宝朱家勇广东药学院药科学院广东广州510006 广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006

目的比较荧光定量PCR与常规RT-PCR法检测牡蛎中GⅡ型札幌样病毒的灵敏度与准确性,为该病毒检测提供适用的方法。方法采用荧光定量PCR和RT-PCR方法,分别检测牡蛎样品中的GⅡ型札幌样病毒。结果荧光定量PCR检测的灵敏度可达102拷贝/μl,... 详细信息

目的比较荧光定量PCR与常规RT-PCR法检测牡蛎中GⅡ型札幌样病毒的灵敏度与准确性,为该病毒检测提供适用的方法。方法采用荧光定量PCR和RT-PCR方法,分别检测牡蛎样品中的GⅡ型札幌样病毒。结果荧光定量PCR检测的灵敏度可达102拷贝/μl,札幌样病毒呈阳性的牡蛎有6例,阳性率为4.72%(6/127);RT-PCR的灵敏度为103拷贝/μl,札幌样病毒呈阳性的牡蛎有1例,阳性率为0.79%(1/127)。结论与RT-PCR方法比较,荧光定量PCR是更为敏感准确的方法,更适用于牡蛎中GⅡ型札幌样病毒的检测。

关键词：牡蛎 GⅡ型札幌样病毒荧光定量PCR 常规RT-PCR

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β防御素2在恶性黑色素瘤B16细胞中的稳定表达及其生物学效应研究

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第三军医大学学报 2011年第14期33卷 1467-1470页

作者：梅寒芳金小宝朱家勇广东药学院:广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006 基础学院生物化学与分子生物学系广州510006

目的建立稳定表达防御素mBD2的恶性黑色素瘤细胞B16-mBD2,研究mBD2对B16细胞生物学特性的影响。方法在前期构建好mBD2真核表达质粒的基础上,脂质体法转染恶性黑色素瘤B16细胞,G418筛选得到稳定表达细胞株B16-mBD2,RT-PCR和Western blot... 详细信息

目的建立稳定表达防御素mBD2的恶性黑色素瘤细胞B16-mBD2,研究mBD2对B16细胞生物学特性的影响。方法在前期构建好mBD2真核表达质粒的基础上,脂质体法转染恶性黑色素瘤B16细胞,G418筛选得到稳定表达细胞株B16-mBD2,RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白角度鉴定mBD2分子的表达;MTT法鉴定其生长曲线;流式细胞仪分析细胞周期分布、凋亡情况及细胞膜表面分子CD80、CD86、MHCⅠ(H-2Kd)、MHCⅡ(I-Ad)的表达。结果成功构建稳定表达mBD2的B16细胞,RT-PCR和Western blot分别从mRNA及蛋白水平验证了mBD2分子表达;稳定表达mBD2的细胞B16-mBD2与转染空载体的B16-p细胞及野生型B16细胞相比,细胞增殖明显减慢,从48 h开始,各时间点细胞活力显著降低(P0.05)。结论 mBD2明显抑制恶性黑色素瘤B16细胞的增殖,其机制可能与诱导细胞周期S期阻滞有关;mBD2对细胞凋亡率及细胞膜表面免疫分子的表达无影响。

关键词：防御素天然免疫恶性黑色素瘤

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诃子水提物对高尿酸肾病大鼠的保护作用及机制研究

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中药药理与临床 2024年第10期40卷 56-64页

作者：刘豪沈娟刘文彬金小宝广东药科大学基础医学院广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006

目的:探究诃子水提物改善高尿酸肾病大鼠的作用及初步机制。方法:通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)获取诃子活性成分及靶点信息,GeneCards数据库收集高尿酸肾病相关靶点。利用STRING数据库进行蛋白互作(PPI)分析;运用Metascape平台进... 详细信息

目的:探究诃子水提物改善高尿酸肾病大鼠的作用及初步机制。方法:通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)获取诃子活性成分及靶点信息,GeneCards数据库收集高尿酸肾病相关靶点。利用STRING数据库进行蛋白互作(PPI)分析;运用Metascape平台进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;通过Cytoscape 3.7软件构建“诃子-活性成分-交集靶点-疾病”网络图。利用Autodock vina软件对诃子核心成分与关键靶点进行分子对接,并通过pkCSM数据库预测核心成分的ADMET性与类药性。采用氧嗪酸钾联合10%果糖诱导构建高尿酸肾病大鼠模型,通过对血清及尿液的肾功能指标检测及肾组织HE、PAS和Masson染色,验证诃子水提物的保护作用。采用CCK8、RT-PCR及Western blot等方法验证诃子水提物及其核心成分对尿酸诱导的HK-2肾损伤细胞模型及关键靶点的作用。结果:收集获得7个诃子活性成分,成分靶点70个,高尿酸肾病相关靶点878个,药-病交集靶点22个。GO富集分析表明,诃子主要影响白细胞凋亡、对有机环状化合物的细胞反应、对肿瘤坏死因子的反应等生物过程;发挥与蛋白质特定结构域结合、参与凋亡信号通路的半胱氨酸型内肽酶活性、BH3结构域结合等分子功能;涉及膜微区、转录调节复合物、受体复合物等细胞组分,进而起到治疗高尿酸肾病的作用。KEGG富集分析表明,诃子治疗高尿酸肾病涉及的主要通路为P53信号通路、凋亡信号通路等。TP53、ESR1、CASP8、CASP9和CASP3是诃子治疗高尿酸肾病的关键靶点。分子对接结果显示诃子核心成分与关键靶点具有良好的结合能力,且ADMET性与类药性分析表明核心成分均具有良好的成药性。动物实验表明,诃子水提物显著降低高尿酸肾病大鼠血清尿酸(SUA)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白含量(P<0.05或P<0.01),并改善肾组织病理损伤。细胞实验表明,诃子水提物及其核心成分有效提高了尿酸诱导的HK-2细胞活力,改善细胞状态。在分子水平上,诃子水提物显著下调了Casp8和Casp3 mRNA的表达(P<0.01),碎叶紫堇碱显著下调Tp53 mRNA的表达(P<0.01),而硫酸奎尼丁明显下调TP53、ESR1、CASP8、CASP9和CASP3蛋白和mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。结论:诃子水提物能够改善高尿酸肾病大鼠的肾损伤,其作用机制可能是基于其核心成分硫酸奎尼丁通过抗凋亡途径实现的。

关键词：诃子水提物高尿酸肾病网络药理学分子对接凋亡硫酸奎尼丁

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基于疾病基因表达谱和药物转录组的抗高尿酸血症药物“重定位”

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实用医学杂志 2022年第22期38卷 2838-2844页

作者：逄成章刘文彬金小宝广东药科大学生命科学与生物制药学院广州510006 广东省生物活性药物研究重点实验室广州511436

目的采用疾病基因表达谱和药物转录组相结合的老药新用策略,从老药中筛选具有抗高尿酸血症的药物。方法通过高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)转录组数据库筛选HUA差异表达基因,使用DAVID数据库与STRING平台对差异基因进行筛选与分析。通过... 详细信息

目的采用疾病基因表达谱和药物转录组相结合的老药新用策略,从老药中筛选具有抗高尿酸血症的药物。方法通过高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)转录组数据库筛选HUA差异表达基因,使用DAVID数据库与STRING平台对差异基因进行筛选与分析。通过Connectivity Map数据库从候选药物中筛选预测抗HUA药物,选择富集分数较高的药物与差异表达核心靶点,利用SwissDock平台进行分子对接。CCK-8法检测候选抗HUA药物对HK-2细胞活力的影响,验证候选药物对HUA细胞模型的黄嘌呤氧化酶活性和尿酸浓度的影响。结果在HUA转录组数据库中,获得1492个差异基因,其中下调基因810个,上调基因682个,差异基因涉及HDASC deacetylate histones、IL-7、UB-specific processing proteases等通路;通过Connectivity Map数据库预测15个药物具有抗HUA潜力,分子对接表明阿维菌素与核心靶点IL-1β、TNF、CXCL2和IL-6的结合能分别为-7.68、-7.97、-6.25、-6.73 kcal/mol;细胞实验表明,12.5~100μg/mL药物浓度范围内阿维菌素具有良好的细胞安全性、抑制黄嘌呤氧化酶活性和降低尿酸作用(P<0.05)。结论通过疾病基因表达谱和药物转录组数据相结合策略发现阿维菌素具有抗高尿酸潜力。

关键词：阿维菌素疾病基因表达谱药物转录组高尿酸血症分子对接

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特定分子量明胶多肽分离分级及其过程特征分析

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中国医药工业杂志 2012年第12期43卷 983-986,1030页

作者：刘涛金小宝尹辉李明朱家勇广东药学院药用生物活性物质研究所广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006 广州大学城健康产业科技园投资管理有限公司广东广州510006 南方医科大学生物技术学院广东广州510515

特定分子量明胶多肽的制备是药用明胶和胶原蛋白高值化应用的热点,但因明胶的多分散性和不均一性,不易实现特定分子量明胶的定向分离。本研究以数均分子量Mn4.5×104的明胶为原料,以Mn2.5×104～3.5×104的明胶多肽为分离目标,利用热降... 详细信息

特定分子量明胶多肽的制备是药用明胶和胶原蛋白高值化应用的热点,但因明胶的多分散性和不均一性,不易实现特定分子量明胶的定向分离。本研究以数均分子量Mn4.5×104的明胶为原料,以Mn2.5×104～3.5×104的明胶多肽为分离目标,利用热降解、膜过滤及有机溶剂分级沉降工艺,制得Mn2.8×104且具有正态分布特征的明胶多肽;并对明胶在凝胶过滤色谱分析中的保留行为、膜分离特征及不同分级沉淀方式进行了探讨。

关键词：明胶胶原蛋白多肽分离分级特定分子量

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孕期多种低剂量化学物质暴露诱发子代炎症状态和自闭症样行为的实验研究

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浙江大学学报（医学版） 2021年第3期50卷 279-289页

作者：宋林阳温文智刘靖金小宝杨俊华广东药科大学生命科学与生物制药学院人体解剖学系广东广州510006 广东药科大学生命科学与生物制药学院生物制药系广东广州510006 广东药科大学广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006

目的:研究孕期暴露于13种混合化学物质的日常饮食对妊娠结局和母代/子代小鼠健康状态的影响。方法:C57BL/6孕鼠饮用含13种混合化学物质的饮用水,日暴露剂量分别为:西维因0.0075 mg/kg、乐果0.001 mg/kg、草甘膦0.5 mg/kg、灭多威0.0025 ... 详细信息

目的:研究孕期暴露于13种混合化学物质的日常饮食对妊娠结局和母代/子代小鼠健康状态的影响。方法:C57BL/6孕鼠饮用含13种混合化学物质的饮用水,日暴露剂量分别为:西维因0.0075 mg/kg、乐果0.001 mg/kg、草甘膦0.5 mg/kg、灭多威0.0025 mg/kg、甲基对硫磷0.003 mg/kg、三唑酮0.03 mg/kg、阿斯巴甜40 mg/kg、苯甲酸钠5 mg/kg、乙二胺四乙酸2.5 mg/kg、对羟基苯甲酸乙酯10 mg/kg、对羟基苯甲酸丁酯0.5 mg/kg、双酚A 0.004 mg/kg、阿拉伯树胶34 mg/kg。评估混合化学物质暴露后的妊娠结局、母代/子代健康状态、母代/子代循环血炎症因子水平和子代的情绪相关行为。结果:孕期混合化学物质暴露对妊娠结局和母鼠肝功能、孕晚期体重及分娩后子宫/卵巢质量无显著影响,但母体血清中γ干扰素水平升高(P<0.05)。孕期混合化学物质暴露对子鼠肝功能无显著影响,但可增加子鼠血清中γ干扰素的水平,前额皮质中γ干扰素、白介素-6和肿瘤坏死因子α的水平,以及海马中γ干扰素的水平(均P<0.01)。另外,混合化学物质暴露导致子鼠在成年期表现出显著的自闭症样情绪相关行为异常,其中雄性小鼠更为严重。结论:孕期混合化学物质暴露可诱发母鼠和子鼠炎症状态,并导致子鼠自闭症样行为。

关键词：环境毒物母婴健康发育免疫自闭症小鼠

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丙型肝炎病毒入胞抑制剂的研究进展

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病毒学报 2015年第1期31卷 97-105页

作者：曾文婷卢雪梅汪洁金小宝朱家勇南方医科大学广州510515 广东药学院基础学院药用生物活性物质研究所广州510006 广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006

丙肝感染是全球性的公共卫生问题之一,目前尚无预防丙肝病毒感染的疫苗,联合应用靶向丙肝不同复制阶段的药物,即所谓的"鸡尾酒"疗法可能会有更好的疗效。丙肝病毒进入宿主细胞的过程是药物干预的重要环节,这个过程是由丙肝病毒的包膜蛋... 详细信息

丙肝感染是全球性的公共卫生问题之一,目前尚无预防丙肝病毒感染的疫苗,联合应用靶向丙肝不同复制阶段的药物,即所谓的"鸡尾酒"疗法可能会有更好的疗效。丙肝病毒进入宿主细胞的过程是药物干预的重要环节,这个过程是由丙肝病毒的包膜蛋白与宿主因子作用介导的,其中病毒的包膜蛋白包括E1、E2,宿主因子包括硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)、膜蛋白CD81、B族I型清道夫受体(Scavenger receptor class B type I,SR-BI)、两种紧密连接蛋白Occludin(OCLD)和Claudin(CLDN)、低密度脂蛋白受体(Low densitity lipoprotein receptor,LDLR)、树突细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子(Dendritic cell-specific ICAM-3-grab-bing nonintegrin,DCSIGN)、肝/淋巴细胞特异性细胞间粘附分子-3-结合整合素分子(Liver/lymph node specific ICAM-3-grabbing integrin,L-SIGN)和转铁蛋白1受体(Transferrin receptor 1,TfR1)等。病毒的包膜蛋白和这些宿主因子都可以作为靶向丙肝入胞抑制剂的作用靶点,许多研究表明丙肝入胞抑制剂作为一种新颖和有发展前景的化合物与作用于复制阶段药物联合应用能够更有效的治疗丙肝。本文综述了自20世纪90年代以来发现的靶点和靶向丙肝病毒进入宿主细胞的化合物。

关键词：丙型肝炎病毒包膜蛋白宿主因子入胞抑制剂

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基因芯片技术筛选家蝇抗菌肽相关基因

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生物工程学报 2008年第7期24卷 1300-1305页

作者：刘雷山金小宝朱家勇肖平李沅湘龚建武长沙市第四医院检验科中心实验室长沙410006 广东药学院基础学院病原生物研究室广州510006 中南大学湘雅二医院肾病研究所长沙410011

用生物学软件对GenBank中部分昆虫抗菌肽基因编码区保守域设计探针,用直接点样法将探针点印在特制玻片上构建寡核苷酸(Oligonucleotide,oligo)探针微阵列;提取诱导后24h的家蝇三龄幼虫脂肪体总RNA,逆转录成cDNA并标记上荧光标记物Cy3,... 详细信息

用生物学软件对GenBank中部分昆虫抗菌肽基因编码区保守域设计探针,用直接点样法将探针点印在特制玻片上构建寡核苷酸(Oligonucleotide,oligo)探针微阵列;提取诱导后24h的家蝇三龄幼虫脂肪体总RNA,逆转录成cDNA并标记上荧光标记物Cy3,与构建的oligo探针微阵列杂交,经洗片、扫描处理后进行数据分析。结果在两次重复实验中均检测到有效杂交信号的基因点有15个(不包括阳性对照基因),为进一步发现其新基因提供了依据。

关键词：基因芯片家蝇抗菌肽基因昆虫抗菌肽基因筛选

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重组融合蛋白Trx-IFN-CSP的肠激酶酶切及纯化

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生物技术 2015年第5期25卷 491-494页

作者：卢雪梅黄演婷金小宝朱家勇广东药学院基础学院药用生物活性物质研究所广东广州510006 广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006

[目的]重组融合蛋白Trx-IFN-CSP的肠激酶酶切及纯化研究。[方法]选用国产肠激酶,在不同反应条件下酶切重组融合蛋白,15%的SDS-PAGE检测切割产物,并利用Ni2+亲和层析色谱联合肝素亲和层析色谱对酶切产物进行分离纯化。[结果]0.8 U的肠激... 详细信息

[目的]重组融合蛋白Trx-IFN-CSP的肠激酶酶切及纯化研究。[方法]选用国产肠激酶,在不同反应条件下酶切重组融合蛋白,15%的SDS-PAGE检测切割产物,并利用Ni2+亲和层析色谱联合肝素亲和层析色谱对酶切产物进行分离纯化。[结果]0.8 U的肠激酶在温度为10℃下酶切72 h能够完全裂解50μg融合蛋白。酶切产物经亲和层析色谱纯化,可获得电泳纯达99%的目的蛋白。[结论]重组融合蛋白Trx-IFN-CSP经肠激酶酶切及纯化后,可获得纯度达99%的肝靶向干扰素IFN-CSP单体,为进一步研究肝靶向干扰素的生物学活性及产业化开发奠定了基础,也为融合蛋白后处理工艺提供了技术借鉴。

关键词：肝靶向干扰素融合蛋白肠激酶酶切条件亲和纯化

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