重组融合蛋白Trx-IFN-CSP的肠激酶酶切及纯化

作     者：卢雪梅 黄演婷 金小宝 朱家勇 Xuemei Lu;Yanting Huang;Xiaobao Jin;Jiayong Zhu

作者机构：广东药学院基础学院药用生物活性物质研究所广东广州510006 广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2015年第25卷第5期

页      面：491-494页

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家科技部新药创制重大专项项目("CSP I-plus修饰的肝靶向IFN抗HBV的成药性研究" No.2013ZX09103003-003)资助 

主　　题：肝靶向干扰素 融合蛋白 肠激酶 酶切条件 亲和纯化 

摘      要：[目的]重组融合蛋白Trx-IFN-CSP的肠激酶酶切及纯化研究。[方法]选用国产肠激酶,在不同反应条件下酶切重组融合蛋白,15%的SDS-PAGE检测切割产物,并利用Ni2+亲和层析色谱联合肝素亲和层析色谱对酶切产物进行分离纯化。[结果]0.8 U的肠激酶在温度为10℃下酶切72 h能够完全裂解50μg融合蛋白。酶切产物经亲和层析色谱纯化,可获得电泳纯达99%的目的蛋白。[结论]重组融合蛋白Trx-IFN-CSP经肠激酶酶切及纯化后,可获得纯度达99%的肝靶向干扰素IFN-CSP单体,为进一步研究肝靶向干扰素的生物学活性及产业化开发奠定了基础,也为融合蛋白后处理工艺提供了技术借鉴。