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Cas12a-based on-site, rapid detection of genetically modified crops

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Journal of Integrative Plant Biology 2022年第10期64卷 1856-1859页

作者： Zhiqiang Duan Xiaoliang Yang Xingkun Ji Ying Chen Xiaomu Niu anping guo Jian‐Kang Zhu Feng Li Zhaobo Lang Hui Zhao Hainan Key Laboratory for Biosafety Monitoring and Molecular Breeding in Off‐Season Reproduction Regions Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology&San Ya Research InstituteChinese Academy of Tropical Agricultural SciencesHaikou 571101China Bellagen Biotechnology Co.Ltd. Jinan 250000China College of Life Sciences Shandong Normal UniversityJinan 250014China Institute of Advanced Biotechnology and School of Life Sciences Southern University of Science and TechnologyShenzhen 518055China Center for Advanced Bioindustry Technologies Chinese Academy of Agricultural SciencesBeijing 100081China Hainan Yazhou Bay Seed Lab SanyaHainan 572024China Shanghai Center for Plant Stress Biology CAS Center for Excellence in Molecular Plant SciencesChinese Academy of SciencesShanghai 201602China

Genetically modified(GM)crops that impart herbicide resistance,improved tolerance to biotic and abiotic stresses,and enhanced yield or nutritional quality have been developed and grown worldwide(ISAAA Brief 55-2019:International Servicefor theAcquisition ofAgri-biotech Applications(ISAAA),2019).In response topublic concern on genetically modified organisms(GMOs),DNA-based and protein-based methods have been developed to detect GMOs infood/feed samples(Fraitureetal.,2015).These methods,however,require expensive equipment and technical expertise and are unsuitable for field diagnosis(DNA-based methods)or cannot detect non-coding sequences such as promoters or terminators(protein-based methods).

关键词： crops modified diagnosis

数字PCR和荧光定量PCR检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数方法的建立及其应用

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热带作物学报 2024年第4期45卷 663-673页

作者：谢秀菊夏启玉刘帅麦贤俊贾瑞宗郭安平徐志胜李峰孔祥义赵辉中国热带农业科学院三亚研究院/中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南省南繁生物安全与分子育种重点实验室海南三亚572024 南京农业大学江苏南京210095 三亚市热带农业科学院海南三亚572022 山东舜丰生物科技有限公司山东济南250300

传统的检测转基因植物中外源基因拷贝数的方法是Southern杂交,该方法成本高、周期长,难以满足高通量检测外源基因拷贝数的育种需求,因此,本研究旨在建立快速且高通量检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。本研究从番木瓜基因组中筛... 详细信息

传统的检测转基因植物中外源基因拷贝数的方法是Southern杂交,该方法成本高、周期长,难以满足高通量检测外源基因拷贝数的育种需求,因此,本研究旨在建立快速且高通量检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。本研究从番木瓜基因组中筛选出2个单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770,以已知外源基因为单拷贝整合的转基因番木瓜为参照,利用数字PCR鉴定其拷贝数,进一步以其为内参基因,以番木瓜转基因育种常用的筛选标记基因NPTⅡ为外源目的基因,建立利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。结果表明:Cpa03g018830和Cpa03g018770均为单拷贝基因;建立的数字PCR方法对转基因番木瓜中的外源基因拷贝数的检测准确可靠,而荧光定量PCR对转基因番木瓜中外源基因单低拷贝整合的检测准确度较高,对外源基因多拷贝整合的检测准确度则较低,因此,荧光定量PCR适合用来在大量转基因植株中初筛出单低拷贝整合的植株。本研究鉴定的单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770可作为转基因番木瓜中外源基因拷贝数检测的内参基因,且建立的利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法,操作简单,速度快,适合批量检测,可为番木瓜转基因抗病育种中单低拷贝株系的选育提供新的方法。

关键词：转基因番木瓜拷贝数内参基因数字PCR 荧光定量PCR

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我院门诊药房事前审方系统的建立与应用

中国药房 2016年第34期27卷 4823-4825页

作者：郭安平方明安徽医科大学附属省立医院药剂科合肥230001

目的:探讨我院事前审方系统的建立及开展对门诊合理用药的影响。方法:根据门诊药房实际需求,对原有的医院信息系统(HIS)相应模块进行修改后建立药房事前审方系统,将该系统用于缴费前审核门诊处方并实施相应的配套管理措施。比较事前审... 详细信息

目的:探讨我院事前审方系统的建立及开展对门诊合理用药的影响。方法:根据门诊药房实际需求,对原有的医院信息系统(HIS)相应模块进行修改后建立药房事前审方系统,将该系统用于缴费前审核门诊处方并实施相应的配套管理措施。比较事前审方系统运行前(2014年4-9月)、后(2015年4-9月)各相关评价指标的变化。结果:通过在HIS中按相关标准建立审核处方模板、制订审方系统工作流程及进行处方干预管理,我院实现了门诊处方在缴费前的处方合理性审核。与运行前比较,运行后口服类抗菌药物使用率、注射类抗菌药物使用率、不合理处方率分别由25.7%、31.5%、5.10%下降至16.5%、19.8%、1.98%;不合理处方干预成功率由24.3%上升至85.5%;错误处方不良反应发生率、医保费用超标率和门诊患者投诉率均显著降低(P<0.000 1)。结论:事前审方系统的建立可促进医院合理用药及服务水平的提升。

关键词：事前审方系统门诊处方处方干预合理用药

激励方式调节下团队学习对创新绩效的影响研究

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科技管理研究 2018年第12期38卷 224-231页

作者：郭安苹叶春明上海理工大学管理学院上海200093

企业的发展离不开创新,而创新的形成少不了知识的积累。从团队学习视角,通过问卷的形式,利用分层回归方法实证研究团队学习与创新绩效的关系,以及激励方式对两者的调节作用。研究结果表明:团队学习对创新绩效具有显著的正向影响;激励机... 详细信息

企业的发展离不开创新,而创新的形成少不了知识的积累。从团队学习视角,通过问卷的形式,利用分层回归方法实证研究团队学习与创新绩效的关系,以及激励方式对两者的调节作用。研究结果表明:团队学习对创新绩效具有显著的正向影响;激励机制能够有效强化团队学习和创新绩效的关系,其中金钱等物质激励以及鼓励表彰、评优晋升等非物质激励方式均具有显著的调节作用。为企业以及管理者利用有效的手段激发员工学习、提高整体创新能力提供新的视角和借鉴。

关键词：团队学习创新绩效激励

Allele-defined genome reveals biallelic differentiation during cassava evolution

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Molecular Plant 2021年第6期14卷 851-854页

作者： Wei Hu Changmian Ji Haitao shi Zhe Liang Zehong Ding Jianqiu Ye Wenjun Ou Gang Zhou Weiwei Tie Yan Yan Jinghao Yang Xiaoying Yang Yunxie Wei Zhiqiang Jin Jianghui Xie Ming Peng Wenquan Wang anping guo Biyu Xu Jianchun guo Songbi Chen Liming Ma Mingcheng Wang Yang Zhou Xiaolong Li Ruoxi Li Siyi guo Xinhui Xiao Zhongqing Wan Feifei An Jie Zhang Qingyun Leng Yin Li Ray Ming Kaimian Li Sanya Research Institute of Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences SanyaHainanChina Hainan Key Laboratory for Biosafety Monitoring and Molecular Breeding in Off-Season Reproduction Regions Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Tropical CropsInstitute of Tropical Bioscience and BiotechnologyChinese Academy of Tropical Agricultural SciencesHaikouHainanChina Hainan Key Laboratory for Protection and Utilization of Tropical Bioresources Hainan Institute for Tropical Agricultural ResourcesChinese Academy of Tropical Agricultural SciencesHaikouHainanChina Biomarker Technologies Corporation BeijingChina Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresources College of Tropical CropsHainan UniversityHaikouHainanChina Biotechnology Research Institute Chinese Academy of Agricultural SciencesBeijingChina Tropical Crops Genetic Resources Institute Chinese Academy of Tropical Agricultural SciencesHaikouHainanChina College of Food Science and Technology Qilu University of Technology(Shandong Academy of Sciences)JinanChina Fu Foundation School of Engineering and Applied Science Columbia UniversityNew YorkUSA State Key Laboratory of Crop Stress Adaptation and Improvement School of Life SciencesHenan UniversityKaifengChina The Genetic Engineering International Cooperation Base of Chinese Ministry of Science and Technology the Key Laboratory of Molecular Biophysics of Chinese Ministry of EducationCollege of Life Science and TechnologyHuazhong University of Science&TechnologyWuhanChina FAFU and UIUC-SIB Joint Center for Genomics and Biotechnology Fujian Provincial Key Laboratory of Haixia Applied Plant Systems BiologyKey Laboratory of GeneticsBreeding and Multiple Utilization of CropsMinistry of EducationFujian Agriculture and Forestry UniversityFuzhouChina Department of Plant Biology University of Illinois at Urbana-ChampaignUrbanaILUSA

Dear Editor,Generation of heterozygous genomes by hybridization between or within species can help maintain plant diversity and serve as a potential source of new species(Baek et al.,2018).Moreover,genomic heterozygosity is associated with genomic coadaptation,developmental stability,and *** definition of alleles in haplotypes is necessary to precisely characterize allelic variation controlling agriculturally important traits(Shi et al.,2019).Currently,most released genomes have mosaic assembly of haplotypes due to random selection or collapse of alleles during genome assembly(Shi et al.,2019),which masked allelic variation and functional differentiation of divergent alleles in heterozygous species.

关键词： maintain evolution assembly

金刚砂辅助农杆菌转化狗尾草种子高效遗传转化体系的建立

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分子植物育种 2017年第12期15卷 4955-4960页

作者：赵辉郭静远孔华郭安平中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101

狗尾草(Setaria viridis)是研究C4植物光合作用的优秀模型,同时也是研究非生物胁迫耐受性和生物能源原料的模型。经济、简单、灵活、快速、高效的转基因技术是模式植物应用发展的基础,本研究直接以狗尾草成熟种子为外植体,经过种子活化... 详细信息

狗尾草(Setaria viridis)是研究C4植物光合作用的优秀模型,同时也是研究非生物胁迫耐受性和生物能源原料的模型。经济、简单、灵活、快速、高效的转基因技术是模式植物应用发展的基础,本研究直接以狗尾草成熟种子为外植体,经过种子活化、金刚砂辅助农杆菌转化、抗性愈伤或丛生芽诱导、成苗、生根等基本过程,建立了一套新的狗尾草组织培养农杆菌转化技术,是国内外直接利用狗尾草活化种子进行农杆菌转化的初次报道。新的转化技术转化周期缩短为9~10周,转化效率A10达19.2%,ME34达22.2%,该方法对狗尾草品系的依赖性小,更适于难以利用已有方法建立转化体系的品系或野生种的转化。

关键词：狗尾草遗传转化金刚砂农杆菌介导法

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抑制剂NAPG在文23储气库的应用研究

精细石油化工进展 2018年第2期19卷 16-18页

作者：国安平中国石化中原石油工程有限公司钻井工程技术研究院河南濮阳457001

室内试验考察了聚醚胺基烷基糖苷(NAPG)与微泡钻井液的配伍性,考察了NAPG加量对微泡钻井液的稳定性、流变性能、膨润土含量及抑制防塌性能的影响。结果表明:NAPG与微泡钻井液配伍性良好,加入NAPG后能显著提高体系的抑制防塌性能;NAPG加... 详细信息

室内试验考察了聚醚胺基烷基糖苷(NAPG)与微泡钻井液的配伍性,考察了NAPG加量对微泡钻井液的稳定性、流变性能、膨润土含量及抑制防塌性能的影响。结果表明:NAPG与微泡钻井液配伍性良好,加入NAPG后能显著提高体系的抑制防塌性能;NAPG加量为钻井液体积分数1.0%时,微泡钻井液现场钻屑一次滚动回收率由75%提高至97%。加量0.5%~1.0%NAPG的微泡钻井液在文23区块14口井三开现场应用结果表明,体系的抑制防塌能力好,井径平均扩大率小于5%。

关键词：聚醚胺基烷基糖苷微泡钻井液抑制剂回收率

番木瓜干旱胁迫相关CpDHN基因的克隆与原核表达

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热带作物学报 2020年第12期41卷 2406-2412页

作者：郭静远邹智孔华郭运玲郭安平海南大学生命科学与药学院海南海口570228 海南省南繁生物安全与分子育种重点实验室/中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101

本研究基于转录组获得的CpDHN转录本序列,以番木瓜‘台农二号’组培苗叶片为材料,采用RT-PCR技术克隆了该基因包含完整ORF在内的425 bp cDNA序列。序列分析表明,CpDHN预测编码93个氨基酸,其理论分子量为10.50 kDa、等电点为6.62、总平... 详细信息

本研究基于转录组获得的CpDHN转录本序列,以番木瓜‘台农二号’组培苗叶片为材料,采用RT-PCR技术克隆了该基因包含完整ORF在内的425 bp cDNA序列。序列分析表明,CpDHN预测编码93个氨基酸,其理论分子量为10.50 kDa、等电点为6.62、总平均疏水指数为-1.984、核定位。除保守的K片段外,蛋白还含有1个S片段,可归为KS型脱水素。在拟南芥中的10个脱水素中,CpDHN与AtLEA8的亲缘关系最近,相似性为53.3%。值得注意的是,虽然CpDHN的编码区不存在内含子,但其3’UTR含有1个与AtLEA8类似的内含子。表达谱分析显示,该基因在根和叶片中均受干旱胁迫诱导。此外,还构建了CpDHN的原核表达载体,SDS-PAGE分析显示,该蛋白在大肠杆菌中可高效表达。这些结果为下一步的功能鉴定奠定了坚实的基础。

关键词：番木瓜脱水素基因克隆表达分析原核表达

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狗尾草胚性愈伤高效农杆菌转化体系的建立

热带作物学报 2017年第6期38卷 1106-1112页

作者：赵辉郭静远孔华郭安平中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101

狗尾草是研究C4光合作用的优秀模型,具有热带植物的典型特征,也可作为研究热带作物的重要模型,高效的转基因技术是模式植物广泛服务于科研的基础,目前狗尾草作为模式植物的研究在国外越来越热门,但在国内还没有被关注。但作为模式植物... 详细信息

狗尾草是研究C4光合作用的优秀模型,具有热带植物的典型特征,也可作为研究热带作物的重要模型,高效的转基因技术是模式植物广泛服务于科研的基础,目前狗尾草作为模式植物的研究在国外越来越热门,但在国内还没有被关注。但作为模式植物狗尾草现有的转化技术还不完善,转化周期有待缩短,转化效率需要进一步提高。本研究以狗尾草ME34品系不同阶段胚性愈伤为外植体进行农杆菌转化体系研究,通过实验大大提高了狗尾草的转化效率,缩短了转化周期,为狗尾草转基因研究提供了新的技术方法,新方法主要包括以下技术环节:高效胚性愈伤诱导技术,受体胚性愈伤的选择,适宜转化的农杆菌株系及培养条件,浸染和共培养条件与方法,抗性愈伤筛选条件,抗性愈伤成苗条件等。

关键词：狗尾草遗传转化农杆菌介导法