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抗人N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）单克隆抗体的研制

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抗人N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）单克隆抗体的研制

作者：黄绮玲华南理工大学

学位级别：硕士

N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）是心肌细胞在合成多肽类激素B型钠尿肽（BNP）的过程中所产生无生物活性的直链多肽片段，由76个氨基酸组成，相对分子质量约为8.5KD。在健康人群的外周血中，NT-proBNP的含量是很低的，一般小于450pg/mL... 详细信息

N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）是心肌细胞在合成多肽类激素B型钠尿肽（BNP）的过程中所产生无生物活性的直链多肽片段，由76个氨基酸组成，相对分子质量约为8.5KD。在健康人群的外周血中，NT-proBNP的含量是很低的，一般小于450pg/mL。当因容量负荷引起心室压力的改变以及室壁张力的增加时，心室肌细胞就会合成和分泌BNP及NT-proBNP，因此NT-proBNP浓度的升高能很好地反映心室结构和功能的改变。目前，NT-proBNP已被公认为心功能紊乱时敏感和特异的指标，是诊断心力衰竭的一个具有划时代意义的客观标志物。本文使用带标签的重组蛋白hrNT-proBNP-DSBA作为免疫原免疫Balb/c小鼠，而不带标签的重组蛋白hrNT-proBNP则作为检测原用于筛选。将免疫后尾血清效价达到融合要求的小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，使用间接ELISA法进行筛选，经多次有限稀释法亚克隆最终获得4株能稳定分泌特异性抗人NT-proBNP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。将细胞注入小鼠腹腔制备腹水并用正辛酸-硫酸铵沉淀法进行纯化，获得4株单克隆抗体，并对抗体的亚类、纯度、效价、特异性、亲和力常数和抗体表位等基本性能进行分析鉴定。在ELISA平台上，采用双抗体夹心法进行单克隆抗体的配对，获得7组强阳性的配对组合。将这7组抗体配对应用于荧光胶乳免疫层析平台上进行再次的筛选，最终获得灵敏度和临床相符率相对最高的单克隆抗体组合1G12和H3。临床检测结果表明，在荧光胶乳定量免疫层析平台上，抗体组合1G12和H3对100人份临床血清标本检测的相关系数R2为0.9451，阴性性符合率为94.1%，阳性符合率为89.8%，阴阳总符合率为92%。本研究为临床应用型的人NT-proBNP快速定量诊断试剂的开发奠定了坚实的基础。

关键词： NT-proBNP 单克隆抗体酶联免疫吸附分析荧光胶乳免疫层析 POCT

EGFR二聚化B细胞表位抗原肽基因克隆、表达与纯化

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免疫学杂志 2011年第10期27卷 918-920页

作者：朱磊吴梅芝赵林黄绮玲梁梅李黄金广东药学院生命科学与生物制药学院生物技术系广州510006

目的利用基因工程手段建立表皮生长因子受体(EGFR)二聚化B细胞表位抗原肽MVF-ER的高效制备方法。方法采用重叠延伸PCR扩增MVF-ER后克隆于表达载体pET32a,于大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,产物采用肠激酶酶切和镍离子螯合亲和层析法纯化。... 详细信息

目的利用基因工程手段建立表皮生长因子受体(EGFR)二聚化B细胞表位抗原肽MVF-ER的高效制备方法。方法采用重叠延伸PCR扩增MVF-ER后克隆于表达载体pET32a,于大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,产物采用肠激酶酶切和镍离子螯合亲和层析法纯化。结果通过10对引物5步重叠延伸得到273 bp的扩增产物,目的基因与硫氧环蛋白(Trx)融合后可高效表达,经酶切和层析后得到纯度为95%的抗原肽。结论成功建立抗原肽"MVF-ER"的高效制备方法,为进一步研究EGFR过表达恶性肿瘤的治疗性疫苗打下了坚实基础。

关键词：表皮生长因子受体二聚化 B细胞表位抗原肽高效制备

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银桦嫩枝扦插育苗试验初报

四川林业科技 1981年第2期 39-41页

作者：黄绮玲富顺县林业局苗圃

银桦(Grevilla rabusta),常绿大乔木,生长迅速。原产于澳大利亚,在热带和亚热带地区引种栽培,生长良好,四川因受地理和环境条件的影响,现在除西昌地区外,成熟林结实量少,且种子罕见。给有性繁殖带来困难。为此,我们采用银桦嫩枝扦播试验... 详细信息

银桦(Grevilla rabusta),常绿大乔木,生长迅速。原产于澳大利亚,在热带和亚热带地区引种栽培,生长良好,四川因受地理和环境条件的影响,现在除西昌地区外,成熟林结实量少,且种子罕见。给有性繁殖带来困难。为此,我们采用银桦嫩枝扦播试验,结果如下:

关键词：嫩枝扦插母树插穗生根期

法则抽象:反复陈述之上的自然生成——以“单项式乘单项式的运算法则”教学为例

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中学数学（初中版） 2018年第2期 7-8页

作者：黄绮玲广东江门市新会东方红中学

新授课上,对新的概念或法则的归纳呈现,往往是教学的难点.为了突破这一难点,很多教师动足了脑筋,有的从生活中抽象规律,借助熟悉的语境以纯文本的形式自主归纳;有的立足数学本身,从数学的本质上找到概念或法则的本质属性,抽象出新知.这... 详细信息

新授课上,对新的概念或法则的归纳呈现,往往是教学的难点.为了突破这一难点,很多教师动足了脑筋,有的从生活中抽象规律,借助熟悉的语境以纯文本的形式自主归纳;有的立足数学本身,从数学的本质上找到概念或法则的本质属性,抽象出新知.这两种方式中,无论哪一种,都离不开对由非数学情境抽象出的法则或概念文本的反复陈述、矫正,如果缺失了这一环节,新知的生成就是不“踏实”的.在近期执教“单项式乘单项式”的法则归纳时,笔者对此有较深的感触.现呈现此次教学过程,并说三点思考,希望能给大家带来启示.

关键词：运算法则抽象规律教学过程单项式陈述反复数学的本质自然

法则抽象:反复陈述之上的自然生成——以“单项式乘单项式的运算法则”教学为例

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中学数学 2018年第4期 7-8页

作者：黄绮玲广东江门市新会东方红中学

新授课上,对新的概念或法则的归纳呈现,往往是教学的难点.为了突破这一难点,很多教师动足了脑筋,有的从生活中抽象规律,借助熟悉的语境以纯文本的形式自主归纳;有的立足数学本身,从数学的本质上找到概念或法则的本质属性,抽象出新知.这两种方式中,无论哪一种,都离不开对由非数学情境抽象出的法则或概念文本的反复陈述、矫正,如果缺失了这一环节,新知的生成就是不"踏实"的.在近期执教"单项式乘单项式"的法则归纳时,笔者对此有较深的感触.现呈现此次教学过程,并说三点思考,希望能给大家带来启示.

关键词：单项式运算过程

铜绿假单胞菌注射液对多种人恶性肿瘤细胞株的增殖抑制作用

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中国肿瘤临床 2013年第12期40卷 694-697页

作者：刘义冰胡大利周雨朦黄绮玲潘诗云河北医科大学第四医院肿瘤内科石家庄市050011 北京万特尔生物制药有限公司佛山市济慈医药科技有限公司

目的:研究铜绿假单胞菌注射液(PA-MSHA)在体外对人恶性肿瘤细胞(肝癌BEL-7402、乳腺癌MDA-MB-231、胃癌MKN-45、肺癌A549和结肠癌SW620)生长状态的影响,并进行PA-MSHA药物敏感度的比较和分析。方法:将PA-MSHA(1.8×109/mL)进行梯度稀释... 详细信息

目的:研究铜绿假单胞菌注射液(PA-MSHA)在体外对人恶性肿瘤细胞(肝癌BEL-7402、乳腺癌MDA-MB-231、胃癌MKN-45、肺癌A549和结肠癌SW620)生长状态的影响,并进行PA-MSHA药物敏感度的比较和分析。方法:将PA-MSHA(1.8×109/mL)进行梯度稀释,在体外分别与5种肿瘤细胞共同培养72 h,并在显微镜下观察细胞生长和形态变化。用MTT比色法检测细胞的增殖水平,并计算IC50值。结果:镜下观察发现,PA-MSHA对5种肿瘤细胞的生长均有显著抑制。MTT法检测显示,PA-MSHA能够有效抑制肿瘤细胞的体外增殖,并呈现出明显的药物剂量相关性。PA-MSHA对BEL-7402、MDA-MB-231、MKN-45、A549和SW620细胞的IC50值,分别为2.12×108/mL、1.95×108/mL、2.09×108/mL、1.59×108/mL和1.32×108/mL。结论:铜绿假单胞菌注射液能够直接抑制人恶性肿瘤细胞的体外增殖,并且对不同来源的肿瘤细胞具有广谱抑制作用。5种恶性肿瘤细胞对PA-MSHA的药物敏感性依次为:结肠癌SW620>肺癌A549>乳腺癌MDA-MB-231>胃癌MKN-45>肝癌BEL-7402。

关键词：铜绿假单胞菌注射液人恶性肿瘤细胞细胞增殖 IC50

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美洲黑杨引种育苗试验

四川林业科技 1985年第Z1期 80-81页

作者：黄绮玲富顺县林业局

我县于1982年引进63、69、72三个杨树品种1983年元月引进一年生种条分别进行扦插育苗试验.1、扦插方法试验地在沱江岸边,地势平坦,新冲积沙壤土,PH5.5,面积0.5亩.扦插前结合深耕每亩施6%666粉8斤杀虫.施莱枯100斤作底肥.每个试验小区面... 详细信息

我县于1982年引进63、69、72三个杨树品种1983年元月引进一年生种条分别进行扦插育苗试验.1、扦插方法试验地在沱江岸边,地势平坦,新冲积沙壤土,PH5.5,面积0.5亩.扦插前结合深耕每亩施6%666粉8斤杀虫.施莱枯100斤作底肥.每个试验小区面积16平方米.63、69,72杨三种,插穗下切口分别为平行、30度、45度、60度四个处理.以平行切口作对照,采用随机区组排列,重复三次.1983年引种的种条3月上旬扦插.扦插时,剪切种条中,下部芽饱满的部份作插穗.长18-20厘米,上端为平行切口,离第一个芽1.5厘米.各品种的每个处

关键词：美洲黑杨引种育苗地径生长量苗高生长杨树品种

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2005年番禺区0～6岁儿童体格发育调查

中国妇幼保健 2009年第4期24卷 481-486页

作者：黄绮玲陈伦能阮海燕梁金英古艳芳广东省广州市番禺区何贤纪念医院 511400

目的:了解广州市番禺区儿童体格发育和营养状况及变化趋势。方法:采取随机整群抽样方法,分男、女22个年龄组,共调查番禺区0～6岁健康汉族儿童2608例。结果:我区儿童生长发育的5项指标近20年持续增长。儿童生长发育的性别差异、城郊差异... 详细信息

目的:了解广州市番禺区儿童体格发育和营养状况及变化趋势。方法:采取随机整群抽样方法,分男、女22个年龄组,共调查番禺区0～6岁健康汉族儿童2608例。结果:我区儿童生长发育的5项指标近20年持续增长。儿童生长发育的性别差异、城郊差异和南北地区差异仍然存在,均表现为2岁前明显,3岁后逐渐减小。结论:番禺区儿童的体格发育符合自然发展规律,发育水平和营养状况较10年前又有明显提高,但2岁以前的喂养状况尚待改善,群众的营养健康教育还应加强。

关键词：儿童体格发育营养状况

抗心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体制备、鉴定和在侧向免疫层析方法中的应用

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中国生物工程杂志 2013年第1期33卷 72-78页

作者：康可人吴培钿李悦琳黄绮玲李高辉唐时幸王继华华南理工大学生物科学与工程学院广州510660 自检型快速诊断国家地方联合工程实验室广州万孚生物技术股份有限公司广州510663

目的:制备抗心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),并建立侧向免疫层析方法检测血浆中H-FABP。方法:用H-FABP蛋白免疫纯系Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术建立能稳定分泌抗人H-FABP的单克隆杂交瘤细胞株。常规制备腹水,纯化后得到特异... 详细信息

目的:制备抗心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),并建立侧向免疫层析方法检测血浆中H-FABP。方法:用H-FABP蛋白免疫纯系Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术建立能稳定分泌抗人H-FABP的单克隆杂交瘤细胞株。常规制备腹水,纯化后得到特异性抗H-FABP单克隆抗体,进行效价、特异性、亲和力的鉴定分析,并在ELISA平台进行抗体配对,用所筛选到的抗体对初步建立了检测H-FABP的侧向免疫层析方法。结果:成功获得12株稳定分泌抗体的阳性细胞株,并筛选出能相互配对,并应用于侧向免疫层析平台的抗体3D1和5F4,检测临床样品与对照试剂比较总符合率为100%。结论:筛选能稳定分泌抗体的细胞株,配对抗体应用于侧向免疫层析检测方法中,能快速、特异、灵敏的检测出临床样品中H-FABP,为临床应用快速检测H-FABP指标提供了方法和关键材料。

关键词： H-FABP 单克隆抗体 POCT 免疫层析