抗人N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）单克隆抗体的研制

作     者：黄绮玲 

作者单位：华南理工大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周世水;王继华

授予年度：2013年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题：NT-proBNP 单克隆抗体 酶联免疫吸附分析 荧光胶乳 免疫层析 POCT 

摘      要：N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）是心肌细胞在合成多肽类激素B型钠尿肽（BNP）的过程中所产生无生物活性的直链多肽片段，由76个氨基酸组成，相对分子质量约为8.5KD。在健康人群的外周血中，NT-proBNP的含量是很低的，一般小于450pg/mL。当因容量负荷引起心室压力的改变以及室壁张力的增加时，心室肌细胞就会合成和分泌BNP及NT-proBNP，因此NT-proBNP浓度的升高能很好地反映心室结构和功能的改变。目前，NT-proBNP已被公认为心功能紊乱时敏感和特异的指标，是诊断心力衰竭的一个具有划时代意义的客观标志物。 本文使用带标签的重组蛋白hrNT-proBNP-DSBA作为免疫原免疫Balb/c小鼠，而不带标签的重组蛋白hrNT-proBNP则作为检测原用于筛选。将免疫后尾血清效价达到融合要求的小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，使用间接ELISA法进行筛选，经多次有限稀释法亚克隆最终获得4株能稳定分泌特异性抗人NT-proBNP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。将细胞注入小鼠腹腔制备腹水并用正辛酸-硫酸铵沉淀法进行纯化，获得4株单克隆抗体，并对抗体的亚类、纯度、效价、特异性、亲和力常数和抗体表位等基本性能进行分析鉴定。在ELISA平台上，采用双抗体夹心法进行单克隆抗体的配对，获得7组强阳性的配对组合。将这7组抗体配对应用于荧光胶乳免疫层析平台上进行再次的筛选，最终获得灵敏度和临床相符率相对最高的单克隆抗体组合1G12和H3。临床检测结果表明，在荧光胶乳定量免疫层析平台上，抗体组合1G12和H3对100人份临床血清标本检测的相关系数R2为0.9451，阴性性符合率为94.1%，阳性符合率为89.8%，阴阳总符合率为92%。本研究为临床应用型的人NT-proBNP快速定量诊断试剂的开发奠定了坚实的基础。