检索结果-南通市图书馆

作者：隋英英山东大学

学位级别：硕士

行政鉴定意见在刑事诉讼中能否使用以及如何使用是行刑证据衔接的重要研究内容。行政鉴定意见是“行政鉴定”与“意见”的组合,而非“行政”与“鉴定意见”组合。本文的研究对象是行政鉴定行为的结果,即行政鉴定行为产生的专业性意见证... 详细信息

行政鉴定意见在刑事诉讼中能否使用以及如何使用是行刑证据衔接的重要研究内容。行政鉴定意见是“行政鉴定”与“意见”的组合,而非“行政”与“鉴定意见”组合。本文的研究对象是行政鉴定行为的结果,即行政鉴定行为产生的专业性意见证据。“鉴定”的根本在于有专门性问题的存在,其含义就是“鉴别、确定”。广义的行政鉴定意见就是行政机关依职权进行行政鉴定行为而取得的专业意见,具体包含三类:行政执法过程中行政主体委托鉴定机构和鉴定人制作的鉴定意见、行政机关依职权出具的检验报告和认定意见。本文共分为五章:第一章探讨了行政鉴定意见的理论定位、内涵特点、证据属性等基本问题,在此基础上,逐一比较行政鉴定意见与鉴定意见、检验报告、认定意见等相似证据形式的区别和联系。第二章通过检索我国2019年度涉行政鉴定意见之刑事案例,阅读和分析其刑事判决书,发现司法实践中行政鉴定意见的审查和采纳存在的问题。第三章进行域外考察,域外的犯罪界定、法律体系和司法程序基本分为两种,一种是如德国、意大利等国家的行政违法与刑事犯罪二分,另一种是如美国、英国等国家的违法犯罪一体化。在前者的法律运行体系中基本不存在行刑衔接问题;在后者的法律运行体系中,又因为行政机关被赋予刑事协助的调查权和证据规则统一等而基本不存在证据衔接的困境。但是域外制度也有值得借鉴之处,如权利保障和非法证据排除规则对行政鉴定意见采纳的制约和限制。第四章分析了行政鉴定意见的证据能力和证明力。通过对行政不法与刑事犯罪、行政证据与刑事证据的区分比较,如事实认定、证据形式要件、取证程序、证明标准的比较,研究了行政鉴定意见在刑事诉讼中使用的影响因素和理论缺口。基于前述对比,分析行政鉴定意见的证据能力学说即“授权委托转化说”、“可重复收集说”、“否定说”、“合法性审查说”四种观点,行政不法与刑事犯罪导致的体系差异不足以构成阻碍行政鉴定意见进入刑事诉讼的内在依据,但是却能成为前置形式审查的正当理由。第五章希望结合当前我国司法实务,在充分发挥我国现有司法制度的作用基础上,在挖掘此次新《刑诉法解释》修改之导向的前提下,提出具有可操作性的理性化路径,主要是从诉讼阶段和审查主体、审查方式和审查内容、审查程序三个角度加以设计。

关键词：行政鉴定意见证据能力证明力理性化路径

成人骨性反（牙合）畸形正畸-正颌联合治疗前后颌骨骨代谢变化的临床研究

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成人骨性反（牙合）畸形正畸-正颌联合治疗前后颌骨骨代谢变化的...

作者：马英英新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:通过测量正颌手术前后下颌骨感兴趣区Tc-亚甲基二磷酸盐(Tc-MDP)吸收比值,了解成人骨性反(牙合)畸形患者正颌术后下颌骨的代谢、更新及改建情况。方法:收集新医大一附院(附属口腔医院)2019年至2021年诊断为骨性III类错(牙合)畸形... 详细信息

目的:通过测量正颌手术前后下颌骨感兴趣区Tc-亚甲基二磷酸盐(Tc-MDP)吸收比值,了解成人骨性反(牙合)畸形患者正颌术后下颌骨的代谢、更新及改建情况。方法:收集新医大一附院(附属口腔医院)2019年至2021年诊断为骨性III类错(牙合)畸形的患者15例,观察对象平均年龄为24.07±4.45岁,且分布在18-32岁。其中男性6例(40%),女性9例(60%)。术式均为双侧下颌升支矢状骨劈开后退术+上颌Lefort-I型截骨前移术,分别于正颌手术前、术后3个月及术后6个月收集全身和局部(头颈部)骨显像资料,通过Syngo图像处理系统重建图像,并同期获取观察对象的X线头颅定位侧位片,测量分析颌骨及牙齿的变化,对所有数据进行统计学分析。结果:15例成人骨性反(牙合)畸形患者正中联合、双侧髁突及双侧颏孔区Tc-MDP的吸收比值在不同时间点变化趋势具有统计学意义(P<0.05),不同部位以髁突骨代谢最为显著,且术后3个月骨活跃度最强。侧位片术后3个月分析结果得出:SNA角增大2.56°,SNB角减小2.99°,ANB角增大5.52°;术后6个月得出:U1-NA角、U1-NA距均较前增大,Pcd-S距离较术前减小,髁突相对于关节窝位置靠前。结论:骨性III类错(牙合)畸形患者正颌手术前后下颌骨骨代谢存在差异,不同部位以髁突最为明显,且术后3个月代谢情况尤为活跃。

关键词：骨性Ⅲ类错(牙合) 正颌手术骨代谢

基于UbD模式的高中数学单元教学实践研究 ——以“圆锥曲线”单元为例

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基于UbD模式的高中数学单元教学实践研究 ...

作者：海英英宁夏大学

学位级别：硕士

新课程标准中明确提出了单元教学的理念,强调从总体上掌握课堂教学内容是培养学生核心素养发展的主要手段。单元教学不仅反映了数学知识的完整性、也是落实学生数学核心素养、推动学校数学课堂教学过程变革的重要手段。UbD理论倡导在课... 详细信息

新课程标准中明确提出了单元教学的理念,强调从总体上掌握课堂教学内容是培养学生核心素养发展的主要手段。单元教学不仅反映了数学知识的完整性、也是落实学生数学核心素养、推动学校数学课堂教学过程变革的重要手段。UbD理论倡导在课堂教学中将单元视为教学单位、以追求学生理解为目标的逆向教学法,UbD理论为单元教学理念提供了理论基础和实践支持。基于UbD模式,本文以圆锥曲线单元为例研究了高中数学单元教学设计程序和策略,具体研究内容如下:（1）采用UbD模式的单元教学设计程序;（2）基于UbD模式的圆锥曲线单元教学设计和圆锥曲线单元中《椭圆及其标准方程》课时进行教学设计并实践;（3）基于UbD模式的教学实践策略。本文采用文献研究、问卷、访谈和案例分析的研究方法。首先探讨了在UbD模式下的教学具体步骤与单元教学,设计了基于UbD模式的单元教学模板和框架;其次本文对圆锥曲线单元内容进行分析,选取了圆锥曲线单元中《椭圆及其标准方程》课例进行教学设计并实践,对教学实践过程进行反思评价后给出典型案例;最后总结了基于UbD模式的教学实践策略。

关键词： UbD模式单元教学圆锥曲线单元教学设计

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基于信道可靠性的极化码速率匹配算法研究

基于信道可靠性的极化码速率匹配算法研究

作者：杨英英江西财经大学

学位级别：硕士

极化码(Polar Code)是Arikan教授基于信道极化(Channel Polarization)现象提出的一种可达到香农(Shannon)极限的新型信道编码。它具有明确的构造方法和编译码结构,编译码算法复杂度低,所以它有望在通信领域得到应用,并具有很高的研究价... 详细信息

极化码(Polar Code)是Arikan教授基于信道极化(Channel Polarization)现象提出的一种可达到香农(Shannon)极限的新型信道编码。它具有明确的构造方法和编译码结构,编译码算法复杂度低,所以它有望在通信领域得到应用,并具有很高的研究价值。但是,通常情况下用于构建极化码的核矩阵大小为2×2,导致它的编码长度会限制在2的n次方,这阻碍了极化编码适应灵活的信道条件。为了解决实际应用中极化码长度可变的问题,本文对速率匹配极化码展开了系列的研究,研究工作和创新点在以下几个方面:第一,极化码的编码构造与译码性能之间密切相关,所以选择极化信道里可靠性高的子信道是关键点。于是本文就从极化码编码构造上出发,对现有的高斯近似(Gaussian Approximation,GA)构造进行优化。将GA构造的函数看成是一个正切函数和高斯函数的乘积,通过分段方法弱化复合函数中的正切函数,得到一个不依赖积分形式的三段式的近似替代。经过优化的GA构造算法使得计算出来的子信道容量更加精确,和标准的GA构造方法对比,在短码长极化不充分的情况下能有0.1d B的性能增益,且同一码长下,优化的构造在码率增加的时候表现也不错。第二,现有改变极化码码长的方式,是在原有码长下进行凿孔或缩短的,而极化码最初是基于均匀信道构建的。在凿孔极化码的情况下,凿孔的比特不会通过信道传输,而是把它们看作是以另一种方式传输的,即通过一个零容量的通道。因此,凿孔极化码可被视为一种特殊情况,它们是在非均匀信道的基础上构建的,即原始的基础信道和零容量信道。其中凿孔比特的位置进行构造时直接将其位置上对数似然值(Log-Likelihood Ratio,LLR)赋值为0,对剩余的子信道进行非均匀极化操作,从中挑选可靠性高的信道用来传输信息比特。文中对非均匀极化理论的可行性进行了验证,和现有的经典凿孔方案进行了对比,本文所提出的优化GA构造下的速率匹配极化码,例如在码长为512,码率为2/3,信噪比大于2.5d B时,有约0.2d B性能的增益。第三,针对凿孔导致的极化子信道退化程度影响极化子信道的可靠性问题,本文考虑了信道构造过程中因为凿孔导致的信道退化问题。在基于均匀信道构建的极化码上,采用信道可靠性参数辅助选择一些受信道降级影响较小的通道来凿孔,使所需的通道更加稳定和可靠。考虑到打孔之后信道初始值的差异,采用了非均匀极化重构操作来挑选信息位,从而对速率匹配极化码的性能进行了提升。实验表明,在相同译码条件下的改进型的凿孔极化码性能优于经典凿孔极化码。码率越大,这种信道可靠性筛选凿孔位的极化码,其译码性能的提升体现的更明显,例如在码长为512,码率为2/3,BER为10时,SC译码情况下约有1d B的性能增益,CA-SCL译码时约有1.2d B的性能增益。

关键词：极化码速率匹配准均匀凿孔高斯近似信道映射

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图像复原中的非凸TGV正则化方法研究

图像复原中的非凸TGV正则化方法研究

作者：李英英湖南科技大学

学位级别：硕士

由于成像设备、外界因素等影响,获取的图像往往不可避免地会受到各种噪声或模糊的污染,这对后续的处理分析造成了不利影响,因此利用图像复原技术从退化图像中复原出清晰的图像就显得至关重要了。传统的全广义变差(total generalized var... 详细信息

由于成像设备、外界因素等影响,获取的图像往往不可避免地会受到各种噪声或模糊的污染,这对后续的处理分析造成了不利影响,因此利用图像复原技术从退化图像中复原出清晰的图像就显得至关重要了。传统的全广义变差(total generalized variation,TGV)模型在图像重建时虽然能有效地抑制阶梯效应,但复原后的图像往往会出现边缘模糊现象。为了能更好地保持图像的边缘细节,本论文在TGV模型的基础上,结合非凸势函数的优点,研究了非凸TGV正则化的泊松噪声和脉冲噪声去除问题。本论文主要内容安排如下:在第一章中,我们首先简要介绍了图像复原问题的研究背景及国内外研究现状。接下来,对全文的研究内容及工作安排进行了概述。在第二章中,我们首先简单回顾了TGV函数的基本概念和相关性质。然后,介绍了图像复原中几种常用的数值算法,并简单回顾了几种常用的图像质量评价准则。在第三章中,为了去除泊松噪声,本章将非凸势函数引入TGV正则项中,构建了一个改进的非凸变分模型。在数值算法上,我们结合迭代重加权L1算法和一阶原始-对偶算法提出了一种高效的交替方向乘子法用于求解目标问题。最后,通过一系列数值实验验证了新模型在克服阶梯效应和保持图像边缘方面的性能。在第四章中,为了去除脉冲噪声,本章以非凸TGV为正则项,并结合非凸数据保真项,建立了一个新的非凸变分模型。在数值算法上,结合迭代重加权L1算法和变量分裂法构建了一个改进的交替方向乘子法来求解新模型。最后,与其他方法相比,提供的数值实验表明,构建的新模型在去除脉冲噪声的同时,不仅能更好地保持图像的边缘细节,还能有效地克服阶梯效应等缺陷。第五章对全文的研究内容及研究成果进行了总结。另外,针对论文中还可以改进的地方,我们提出了一些展望和后续工作。

关键词：图像复原全广义变差非凸函数迭代重加权L1算法原始-对偶算法交替方向乘子法

MHR、ApoB/ApoAI、GGT与OSA相关性的临床研究

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MHR、ApoB/ApoAI、GGT与OSA相关性的临床研究

作者：李英英山西医科大学

学位级别：硕士

目的:本文将探究阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)相关血清学标志物—单核细胞与高密度脂蛋白胆固醇比值(MHR)、载脂蛋白B与载脂蛋白A1比值(ApoB/ApoAI)、血清γ-谷氨酰转移酶(GGT)与OSA病情严重程度之间的相关性,我们将这些指标进行联合检测以... 详细信息

目的:本文将探究阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)相关血清学标志物—单核细胞与高密度脂蛋白胆固醇比值(MHR)、载脂蛋白B与载脂蛋白A1比值(ApoB/ApoAI)、血清γ-谷氨酰转移酶(GGT)与OSA病情严重程度之间的相关性,我们将这些指标进行联合检测以期获得更好的诊断效果。方法:本文为回顾性的临床研究。选取我院2019年12月至2021年12月的住院部患者,共纳入211例研究对象,其中女性61例,男性150例,年龄在18-80岁之间,平均年龄为55.48岁。按照呼吸暂停低通气指数(AHI)结果将211例研究对象分成正常组(AHI0.05,差异无统计学意义;MO、TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB、Apo E、GGT、MHR、ApoB/ApoA1,P<0.05,差异具有统计学意义。其中,ApoA1随病情加重而减低;ApoB随病情加重而增加。GGT、MHR、ApoB/ApoA1随病情严重程度呈递增效应,P<0.05,差异具有统计学意义。4、相关性分析表明,GGT与AHI、最长暂停时间呈正相关,相关系数分别为0.290、0.170;与平均Sp O2、最低Sp O2呈负相关,相关系数分别为-0.142、-0.175。MHR与AHI、最长暂停时间呈正相关,相关系数分别为0.315、0.218;与平均Sp O2、最低Sp O2呈负相关,相关系数分别为-0.251、-0.218。ApoB/ApoA1与AHI、最长暂停时间呈正相关,相关系数分别为0.507、0.443;与平均Sp O2、最低Sp O2呈负相关,相关系数分别为-0.397、-0.385。5、根据ROC曲线以评估单一指标、两指标联合、三指标联合的诊断价值(以AUC表示)。GGT的AUC值为0.663,灵敏度与特异度分别为74.7%、56.1%;MHR的AUC值为0.693,灵敏度和特异度分别为90.0%、53.7%;ApoB/ApoA1的AUC值为0.800,灵敏度和特异度分别为83.5%、65.9%。GGT-MHR的AUC值为0.715,灵敏度和特异度分别为88.8%、51.2%;GGT-ApoB/ApoA1的AUC值为0.803,灵敏度和特异度分别为88.2%、58.5%;MHR-ApoB/ApoA1的AUC值为0.816,灵敏度和特异度分别为86.5%、70.7%。GGT-MHR-ApoB/ApoA1的AUC值为0.813,灵敏度和特异度分别为81.2%、73.2%。结论:1、MHR、ApoB/ApoA1、GGT随病情严重程度呈递增效应,可作为OSA病情程度的临床预测指标。2、MHR、ApoB/ApoA1、GGT与OSA患者AHI、最长暂停时间呈正相关,与平均Sp O2和最低Sp O2呈负相关。3、MHR、ApoB/ApoA1、GGT联合检测较单一检测对OSA诊断价值更高。在单一指标中,ApoB/ApoA1的诊断价值最高、特异度最好,MHR的灵敏度最高。在联合指标中,MHR-ApoB/ApoA1的诊断价值最高,GGT-MHR的灵敏度最高,GGT-MHR-ApoB/ApoA1的特异度最好。

关键词：阻塞性睡眠呼吸暂停单核细胞/高密度脂蛋白胆固醇载脂蛋白B/载脂蛋白A1 血清γ-谷氨酰转移酶

超高压联合热加工对大豆球蛋白抗原性的影响及A2破坏表位的定位

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超高压联合热加工对大豆球蛋白抗原性的影响及A2破坏表位的定位

作者：李英英河南工业大学

学位级别：硕士

大豆植物蛋白具有很高的营养价值,已被广泛用于食品工业中,例如制作面食、烘焙食品、儿童食品、保健食品等。然而,大豆也被列为联合国粮农组织认可的十四种主要食物过敏原之一,大量研究证明,加工可以显著降低大豆中过敏原蛋白的抗原性,... 详细信息

大豆植物蛋白具有很高的营养价值,已被广泛用于食品工业中,例如制作面食、烘焙食品、儿童食品、保健食品等。然而,大豆也被列为联合国粮农组织认可的十四种主要食物过敏原之一,大量研究证明,加工可以显著降低大豆中过敏原蛋白的抗原性,精确定位到加工破坏的抗原表位,对大豆过敏人群具有重大意义。本文选用碱溶酸沉的方法从脱脂豆粉中提取大豆球蛋白,将提取的大豆球蛋白经过超高压联合热加工处理,研究加工对大豆球蛋白抗原性和结构性的影响。采用SDS-PAGE、外源荧光、游离巯基和傅立叶红外等方法检测加工对大豆球蛋白结构的影响,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫印迹检测加工对大豆球蛋白抗原性的影响,用体外模拟消化实验评估加工后大豆球蛋白的消化稳定性。结果显示,与未加工的样品相比,加工后的大豆球蛋白二硫键断裂,分子量发生变化,随着温度的逐渐升高,酸性肽链条带逐渐变浅直至消失;蛋白样品中的疏水基团、游离巯基、α-螺旋、β-转角和无规卷曲的含量增加,β-折叠含量减少。当温度到达130°C时,蛋白质抗原的抑制率达到37%,比未处理的蛋白质抗原降低50%,抗原抑制率达到最低。经过体外模拟消化评估,加工可以显著降低大豆球蛋白的抗原性。通过NCBI数据库检索A2肽链的氨基酸序列,结合生物信息学对其重叠分段,将A2肽链相邻片段重叠约135个碱基,将其分为A2-1,A2-2,A2-3三个片段,使用pr imer 5软件设计引物,将A2全长及其重叠分段PCR扩增后的基因胶回收,与T载体相连构建克隆载体转化到大肠杆菌,将转化成功的阳性菌扩大培养提取质粒,酶切后与T7噬菌体载体臂相连,体外包装后侵染大肠杆菌,得到阳性重组噬菌体,扩大培养后得到A2肽链及其重叠分段基因的噬菌体蛋白。在破坏抗原最强的加工条件下,将过量的热加工和联合处理的大豆球蛋白与多抗血清充分混合吸收,得到两种加工破坏抗原表位的特异性抗体。将加工破坏的多抗血清与噬菌体蛋白反应,初步定位加工破坏表位的优势抗原区域为A2-3片段,该片段的氨基酸序列为SGFAPEFLKEAFGVNM QIVRNLQGENEEEDSGAIVTVKGGLRVTAPAMRKPQQEEDDDDEEEQPQCVETDKG CQRQSK。将A2-3片段重叠15个碱基将其分为A2-3-A、A2-3-B、A2-3-C三个片段,再次筛选加工破坏的抗原优势区域,最终精确定位到加工破坏的抗原优势区域为A2-3-B片段,该片段的氨基酸序列为AIVTVKGGLRVTAPAMRKPQQEEDDDDEE EQPQCVE。通过在线分析软件预测A2-3-B片段的二级结构,该片段中含有11.11%的α-螺旋、25%的β-折叠和63.89%的无规卷曲,将A2-3-B相互重叠约18个碱基分为3个肽段,由Dot-Blot和ELISA检测结果可知,多抗血清和肽3反应但和肽1、肽2不反应,说明在肽1和肽2中不含与大豆球蛋白多抗血清结合的线性抗原位点,肽3中含有抗原线性表位,两种加工破坏的抗体与3条肽都不反应,说明加工并未破坏与三条肽结合的线性表位,通过噬菌体表达出A2-3-B片段能与加工破坏的特异性抗体反应,说明在该片段中含有加工破坏的构象表位,而对应的线性抗原表位未被破坏。与过敏患者血清反应,发现肽3具有致敏性,肽3片段的氨基酸序列为QEEDDDDEEEQPQCVE,采取丙氨酸替代技术对肽3定点突变,经过Dot-Blot和ELISA检测显示,当第2(D),3(E),4(E),6(Q),9(C)位的氨基酸突变后,突变后的肽段不与大豆球蛋白多抗血清发生特异性结合,D,E,E,Q和C可能是显著影响肽3抗原性的关键氨基酸。

关键词：超高压联合热加工抗原性重叠分段噬菌体展示重叠多肽

楸树DnaJ基因家族分析以及CbuDnaJ49在叶色调控中的功能研究

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楸树DnaJ基因家族分析以及CbuDnaJ49在叶色调控中的功能研究

作者：杨英英三峡大学

学位级别：硕士

‘麦缘锦楸’是紫葳科梓树属楸树组的一种落叶乔木,为灰楸的天然变异种,该品种因叶片边缘白化而得名,是研究珍贵树种叶色变异的理想材料。本研究以课题组前期测得的楸树全基因组和转录组序列信息为基础,对楸树CbuDnaJ家族基因进行了鉴... 详细信息

‘麦缘锦楸’是紫葳科梓树属楸树组的一种落叶乔木,为灰楸的天然变异种,该品种因叶片边缘白化而得名,是研究珍贵树种叶色变异的理想材料。本研究以课题组前期测得的楸树全基因组和转录组序列信息为基础,对楸树CbuDnaJ家族基因进行了鉴定和分析,并利用生物信息学、分子生物学的手段系统研究了CbuDnaJ49的功能,解析CbuDnaJ49基因参与调控‘麦缘锦楸’叶色形成的分子机制,以期为园林观赏新品种培育提供理论参考。主要研究结果如下:(1)利用生物信息学方法鉴定出88个楸树DnaJ家族成员。按照保守结构域分为A、B、C、D四类,按序列同源性可分为七个亚家族。对楸树CbuDnaJ家族成员的motif及内含子外显子进行可视化,发现同源性较高的同一亚族具有相似的motif及内含子-外显子结构。从前期转录组数据中提取DnaJ家族成员基因,并对其在不同叶色部位的表达量绘制热图,发现CbuDnaJ49在不同叶色部位差异表达,推测该基因可能在叶色调控中发挥重要作用。进一步对CbuDnaJ49蛋白基本特性分析,结果表明:CbuDnaJ49蛋白为不稳定的疏水蛋白,并且该蛋白无跨膜螺旋区及信号肽分布。(2)以课题组前期常用的Cbu Actin为内参,分析CbuDnaJ49在灰楸及‘麦缘锦楸’根茎叶中的表达情况,发现该基因在两种材料的不同器官均有表达,但在‘麦缘锦楸’的叶片部位显著高表达。为了验证结果的可靠性,利用q RT-PCR技术对‘麦缘锦楸’叶色表型内参基因进行筛选,并以筛选出的Cbu MADH、Cbu EF-1基因为内参,检测CbuDnaJ49在不同叶色部位的基因表达差异,发现CbuDnaJ49在‘麦缘锦楸’黄色部分的表达显著高于绿色部分,认为该基因在‘麦缘锦楸’叶色调控中可能起着关键的作用。(3)从‘麦缘锦楸’叶片中成功克隆了CbuDnaJ49基因,并构建了亚细胞定位载体p BI121-CbuDnaJ49-GFP,经农杆菌转化后发现CbuDnaJ49在烟草的细胞核、质膜及叶绿体中均有表达;构建CbuDnaJ49基因的过表达及抑制表达载体,并分别稳定转化到烟草及楸树的愈伤组织中,发现转p ROKII-CbuDnaJ49的植株在烟草叶片及花萼上部呈现白色表型。测定转基因及野生型烟草叶片的叶绿素含量发现,p ROKII-CbuDnaJ49烟草叶片中的叶绿素和类胡萝卜素含量显著降低,且叶绿素含量降低可能是导致叶片白化的主要因素。

关键词： ‘麦缘锦楸’ 叶色基因家族 CbuDnaJ49 功能研究

灰树花UDP葡萄糖基转移酶GFUGT88A1的克隆表达与功能研究

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灰树花UDP葡萄糖基转移酶GFUGT88A1的克隆表达与功能研究

作者：梁英英江苏大学

学位级别：硕士

UDP-糖基转移酶(Uridine Diphosphate-Glycosyltransferases,UGTs)普遍存在于动物、植物、真菌和细菌中。迄今为止,源自植物、细菌和动物的UGTs已在天然产物糖基化、抗生素合成、细菌糖基转移酶抑制剂的开发、动物炎症和神经系统等方面... 详细信息

UDP-糖基转移酶(Uridine Diphosphate-Glycosyltransferases,UGTs)普遍存在于动物、植物、真菌和细菌中。迄今为止,源自植物、细菌和动物的UGTs已在天然产物糖基化、抗生素合成、细菌糖基转移酶抑制剂的开发、动物炎症和神经系统等方面研究广泛,其功能和催化机制也得到较为深入的探索。尽管真菌作为多种化合物糖基化的全细胞催化剂具有巨大的潜力,但目前仅有少数几种真菌UGTs得到分离和表征。因此,为系统研究真菌UGTs的编码基因、酶学性质、底物特异性、区域选择性、催化效率以及催化机理,尤其对于食药用真菌来源的UGTs的研究,本论文首次以食用真菌灰树花为研究对象,挖掘、克隆得到灰树花UDP-葡萄糖基转移酶基因gfugt88a1,对其进行全面的生物信息学分析;其次,通过构建异源表达质粒,诱导表达和分离纯化得到了来自灰树花的重组UDP-葡萄糖基转移酶GFUGT88A1,系统地研究了该重组酶的体外催化活性以及酶学性质分析;最后,对催化反应产物进行分析,并基于同源建模和分子对接等技术手段,探究了可能影响GFUGT88A1催化功能和活性的关键氨基酸位点,初步阐明UDP-葡萄糖基转移酶GFUGT88A1延伸糖链的催化机理。所得的主要结论如下:(1)灰树花UDP-葡萄糖基转移酶基因gfugt88a1基因的克隆测序及生物信息学分析。其g DNA序列全长1951 bp,c DNA序列全长1389 bp,该基因共编码462个氨基酸,理论相对分子质量为50.96 k Da,该酶表现为亲水性,不存在信号肽及跨膜区。氨基酸序列中含有4个典型的保守结构域及6个TDP-binding位点,其属于GT1家族,表现为GT-B折叠。结合系统发育树及多序列比对信息,可知灰树花UDP-葡萄糖基转移酶GFUGT88A1与白腐菌Obba rivulosa的7个UGTs形成一个分支,并且来自于不同担子菌的相似序列之间同源性较低(～50%),但其C端保守结构域保持高度相似性,包含着一个典型的高度保守的特征性序列。(2)灰树花UDP-葡萄糖基转移酶GFUGT88A1的表达纯化、活性分析及酶学性质研究。构建了UDP-葡萄糖基转移酶基因gfugt88a1的原核表达载体p ET-30a-gfugt88a1,IPTG低温诱导表达得到目的产物,通过超声破碎菌体,变性处理,亲和层析,透析,超滤浓缩得到单一的重组GFUGT88A1,蛋白回收率为16.05%,酶的比活力达到53.02 U·μg;通过LC-MS/MS证实GFUGT88A1的相对分子质量为51.758 KDa,等电点为5.92;重组UDP-葡萄糖基转移酶GFUGT88A1的体外酶活分析表明GFUGT88A1对不同类型的小分子化合物及单/寡糖作为底物受体均表现出一定的催化活性,具有显著的底物宽泛性及较高的催化效率,对GFUGT88A1以寡糖作为受体底物进行的酶动力学分析表明,GFUGT88A1对昆布九糖(LAM-9)的亲和力最大,催化效率最高,推断LAM-9为GFUGT88A1的优选受体底物;酶学特性的研究表明,GFUGT88A1的最适反应p H和温度分别为7.0和37°C,并表现出良好的热稳定性和良好的p H稳定性,金属离子Fe、Fe 、Cu、Zn能够将GFUGT88A1的相对活性降为40%,有着强烈的抑制作用,而Na对酶的催化活性有明显的促进作用,GFUGT88A1的相对酶活提升至120%。(3)初步探究了灰树花UDP-葡萄糖基转移酶GFUGT88A1以寡糖作为受体底物的催化机制。重组酶GFUGT88A1对LAM-2,LAM-6和LAM-9都有一定的催化活性。HPLC-ELSD测定结果表明,以LAM-2作为受体底物时,36 h和48 h反应条件下,观察到DP值为4的新合成的低聚糖;当以LAM-6作为受体底物时,出现了DP值为8的新产物峰;以LAM-9作为受体底物时,合成的寡糖的保留时间为10.99 min,DP值为15;基于同源建模和分子对接等技术手段,证实GFUGT88A1包含两个独立的灵活连接的Rossmann结构域(β/α/β)组成的三维结构;通过SAVES和Pro SA进行构象合理性及残基间能量的评估,表明其为高质量模型;进而探究了可能影响GFUGT88A1催化功能和活性的关键氨基酸位点,在对GFUGT88A1与受体、供体分子相互作用分析中发现,Trp323对于识别和结合UDP-Glc作为供体具有重要作用;Glu349对受体底物的糖部分的识别以及将糖定位在糖基化反应的最适方向上十分重要。

关键词：灰树花 UDP-葡萄糖基转移酶异源表达糖链延伸分子对接

疫情时期高校体育专业在线教学现状及优化策略研究

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疫情时期高校体育专业在线教学现状及优化策略研究

作者：曹英英西南医科大学

学位级别：硕士

互联网的快速发展影响着人们的生活方式，同时为在线教育提供了技术支持，加强信息技术与在线教育融合发展是新时代教育改革的重要任务。2019年末新型冠状病毒肺炎疫情（简称“疫情”）的爆发，使教师和学生无法按时返校进行教学和学习... 详细信息

互联网的快速发展影响着人们的生活方式，同时为在线教育提供了技术支持，加强信息技术与在线教育融合发展是新时代教育改革的重要任务。2019年末新型冠状病毒肺炎疫情（简称“疫情”）的爆发，使教师和学生无法按时返校进行教学和学习，对我国学校教学活动的顺利实施带来了巨大挑战。为保证教学的顺利实施，教育部颁发系列文件并发出“停课不停学、不停教”的号召，全国高校师生纷纷响应，积极开展在线教学。我国高校体育指导委员会也相应发出了“不停学、不停教、不停练、不停训和不停赛”的要求，全国高校也开始陆续实施体育在线教学。疫情时期体育在线教学开展的如何，存在哪些问题及如何针对性地解决成为学界和社会关注的热点。　　本文运用文献资料法、问卷调查法、数理统计法、案例分析法等研究方法，以高校体育专业在线教学为研究对象，以高校体育专业教师和学生为调查对象，从教师教学和学生学习两个方面分析疫情时期高校体育专业在线教学的现状，并以中国大学慕课为案例，对体育在线课程开设现状进行统计分析，针对现状归纳疫情时期高校体育专业在线教学存在的问题，提出其优化策略，主要研究结论如下：　　1．通过对疫情时期高校体育专业在线教学现状调查分析发现，疫情时期高校体育专业教师主要选用“钉钉”进行线上教学，教学内容多为体能类练习，教师普遍认为线下体育教学效果好;高校体育专业学生线上学习方式主要为教师直播教学，学习时间一般在91-120分钟，主要通过语音连麦及开启弹幕或对话框等方式与教师进行互动交流;截止2021年10月，中国大学慕课平台中共有171门体育在线课程，参与课程学习人数较少，教师职称主要以教授和副教授为主，学习者对体育在线课程的综合评分较好。　　2．基于调查现状，发现疫情时期高校体育专业在线教学存在部分教师线上教学经历欠缺，教师不能完全掌握学生线上学习状态，缺乏有效的监督管理、师生互动及教学反馈;学生在线学习自我约束力差、线上学习状态不佳、学习效率较低;大学慕课中体育在线课程选课学习人数和课程评价人数较少，部分课程重复率相对较高，体育专业类院校开设课程数量有待增加。　　3．基于实施现状和存在问题，从三个层面提出优化策略。在高校建设层面，应加强家校沟通与合作和教师线上教学技能培训，鼓励教师建设特色体育在线课程，避免重复建设体育在线课程。在教师教学层面，应增加线上互动形式，强化线上教学管理，提供优质教学资源及作业反馈，强化课后答疑。在学生学习层面，应注重时间管理，设计合理学习目标，提高自我监控能力，主动参与在线教学互动以提高线上学习效率。

关键词：高等院校体育专业在线教学学习效率