检索结果-南通市图书馆

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

MLK3基因敲除抑制骨骼肌损伤后再生

中国病理生理杂志 2022年第12期38卷 2191-2196页

作者：高诗娟张燕红方光明杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所北京100029

目的:探讨混合谱系激酶3(MLK3)在骨骼肌损伤后再生中的作用及其机制。方法:小鼠胫骨前肌注射心脏毒素制备骨骼肌损伤模型;RT-qPCR及Western blot检测损伤后0、1、3、5 d胫骨前肌中MLK3的表达变化;损伤7 d的骨骼肌进行麦胚凝集素染色和Ma... 详细信息

目的:探讨混合谱系激酶3(MLK3)在骨骼肌损伤后再生中的作用及其机制。方法:小鼠胫骨前肌注射心脏毒素制备骨骼肌损伤模型;RT-qPCR及Western blot检测损伤后0、1、3、5 d胫骨前肌中MLK3的表达变化;损伤7 d的骨骼肌进行麦胚凝集素染色和Masson染色,观察损伤后骨骼肌再生和纤维化程度;损伤3 d的骨骼肌进行免疫荧光染色观察肌卫星细胞标志物配对盒蛋白7(PAX7)的表达;RT-qPCR检测肌卫星细胞分化相关基因Myod和Myog表达;Western blot检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶和p38的磷酸化水平。结果:损伤后3 d,骨骼肌中MLK3表达显著升高。损伤后7 d,MLK3基因敲除小鼠的新生肌纤维面积显著减小,间质纤维化面积增加。损伤后3 d,MLK3基因敲除小鼠骨骼肌中PAX7阳性肌卫星细胞比例、Myod和Myog表达水平及ERK1/2磷酸化水平均显著低于野生型小鼠。结论:MLK3通过调控ERK1/2信号通路在骨骼肌再生过程中发挥重要作用。

关键词：骨骼肌再生混合谱系激酶3 肌卫星细胞细胞外信号调节激酶1/2

利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠Mlk3基因探讨其对血压的影响

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2023年第4期39卷 1644-1654页

作者：高诗娟方光明张燕红杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所北京100029

为探讨混合谱系激酶3(mixed lineage kinase 3,Mlk3)基因敲除(knockout,KO)对小鼠血压的影响,采用CRISPR/Cas9系统构建Mlk3基因敲除(Mlk3 knockout,Mlk3KO)小鼠模型。T7核酸内切酶I(T7 endonuclease I,T7E1)酶切法验证向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的活性。体外转录CRISPR/Cas9 mRNA及sgRNA,显微注射至受精卵并移植入假孕母鼠。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)及DNA测序检测基因型。实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)检测Mlk3 mRNA表达,Western blotting及免疫荧光检测Mlk3蛋白表达。尾套法监测小鼠血压。免疫组化及Western blotting检测小鼠主动脉肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化水平。PCR基因型鉴定及DNA测序显示Mlk3敲除成功,且Mlk3敲除小鼠未检测到Mlk3蛋白表达,证实CRISPR/Cas9系统成功构建了Mlk3敲除小鼠。Mlk3敲除小鼠在基础状态下血压显著高于同笼对照,且Mlk3敲除小鼠主动脉平滑肌层MLC的磷酸化高于对照组,说明Mlk3具有抗高血压的内源性保护作用。本研究为探讨蛋白激酶Mlk3抗高血压及抗高血压诱导心血管不良重塑的作用机制提供了理想的动物模型。

关键词：基因敲除小鼠 CRISPR/Cas9 混合谱系激酶3 血压肌球蛋白轻链

KLF15基因敲除加重急性心肌梗死小鼠心肌损伤

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病理生理杂志 2022年第11期38卷 1921-1928页

作者：高诗娟黄山方光明张燕红杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所北京100029

目的:探讨Kruppel样因子15(Kruppel-likefactor 15,KLF15)基因在小鼠心肌梗死后对心肌损伤的作用。方法:冠状动脉左前降支结扎术建立小鼠心肌梗死模型。RT-qPCR检测心肌梗死术后0、1、3和7 d心脏组织中KLF15的mRNA表达变化。野生及KLF1... 详细信息

目的:探讨Kruppel样因子15(Kruppel-likefactor 15,KLF15)基因在小鼠心肌梗死后对心肌损伤的作用。方法:冠状动脉左前降支结扎术建立小鼠心肌梗死模型。RT-qPCR检测心肌梗死术后0、1、3和7 d心脏组织中KLF15的mRNA表达变化。野生及KLF15基因敲除小鼠心肌梗死术后28 d,使用小动物心脏超声仪测定心功能变化,Masson染色比较梗死纤维瘢痕,麦胚凝集素(wheatgermagglutinin,WGA)染色评价心肌细胞肥大情况。分离心肌梗死术后3 d的心脏组织,使用RT-qPCR检测凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)及促炎因子(IL-6和IL-1β)的mRNA表达变化,TUNEL染色评价细胞凋亡情况,Westernblot检测磷酸化p65水平。萤光素酶报告基因实验检测缺氧处理的H9C2心肌细胞中KLF15对核因子κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)转录活性的调控。结果:心肌梗死术后1 d小鼠心脏组织中KLF15表达下降。术后28 d,与野生小鼠相比,KLF15基因敲除小鼠心功能显著下降,梗死纤维瘢痕面积增大,非梗死区心肌细胞代偿性肥大。术后3 d,KLF15基因敲除小鼠心脏组织中促凋亡蛋白Bax表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,TUNEL阳性细胞核比例增多,促炎因子IL-6和IL-1β的mRNA水平升高,磷酸化p65水平升高。在H9C2细胞中过表达KLF15基因可抑制缺氧诱导的NF-κB转录活性。结论:KLF15通过抑制NF-κB活化介导的细胞凋亡及炎症在心肌梗死中发挥保护心肌的作用。

关键词：心肌梗死 Kruppel样因子15 细胞凋亡炎症核因子κB

维普期刊数据库博看期刊

平滑肌细胞特异性MLK3基因敲除小鼠模型的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病理生理杂志 2022年第1期38卷 186-192页

作者：张燕红黄山高诗娟李玉琳杜杰山西医科大学生物化学与分子生物学教研室山西太原030001 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所血管生物研究室北京100029

目的:构建平滑肌细胞特异性混合谱系激酶3(MLK3)基因敲除小鼠模型。方法:利用胚胎干细胞基因打靶技术在MLK3基因第4~8外显子两端插入loxP位点以制备MLK3-loxP小鼠,该小鼠与平滑肌细胞特异性启动子Tagln介导表达Cre重组酶的小鼠杂交,以... 详细信息

目的:构建平滑肌细胞特异性混合谱系激酶3(MLK3)基因敲除小鼠模型。方法:利用胚胎干细胞基因打靶技术在MLK3基因第4~8外显子两端插入loxP位点以制备MLK3-loxP小鼠,该小鼠与平滑肌细胞特异性启动子Tagln介导表达Cre重组酶的小鼠杂交,以获得平滑肌细胞特异性MLK3基因敲除小鼠;提取鼠尾基因组DNA,PCR鉴定基因型;收取主动脉组织进行免疫荧光染色,检测平滑肌细胞MLK3的表达;收取主动脉组织进行免疫组化染色,分析平滑肌细胞收缩标志物肌球蛋白重链11(Myh11)的表达;尾套法测定小鼠血压;全自动生化仪测定葡萄糖、甘油三脂、总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白等生化指标。结果:PCR鉴定基因型确认Cre基因型为阳性,MLK3-loxP基因型为纯合阳性;免疫荧光共定位染色显示野生型小鼠主动脉平滑肌细胞有MLK3蛋白表达,而特异性敲除小鼠平滑肌细胞的MLK3蛋白表达缺失;免疫组化显示平滑肌细胞特异性MLK3基因敲除小鼠主动脉平滑肌细胞收缩表型标志物Myh11蛋白表达减少;特异性敲除小鼠基础状态下的血压、血糖和血脂与野生小鼠相比均无显著差异。结论:平滑肌细胞特异性MLK3基因敲除小鼠构建成功,为进一步实验奠定基础。

关键词：平滑肌细胞混合谱系激酶3 条件性敲除小鼠

维普期刊数据库博看期刊

异种HSP70及异种HSP70-肿瘤抗原复合物对γδT细胞的活化作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

异种HSP70及异种HSP70-肿瘤抗原复合物对γδT细胞的活化作用

作者：高诗娟大连医科大学

学位级别：硕士

γδT细胞是一种主要组织相容性复合体(Maior histocompatibility complex，MHC)非限制性杀瘤细胞，在肿瘤继承性细胞免疫治疗中有应用前景。热休克蛋白(Heat shock proteins，HSP)是一种进化上高度保守的蛋白质，是γδT细胞的超... 详细信息

γδT细胞是一种主要组织相容性复合体(Maior histocompatibility complex，MHC)非限制性杀瘤细胞，在肿瘤继承性细胞免疫治疗中有应用前景。热休克蛋白(Heat shock proteins，HSP)是一种进化上高度保守的蛋白质，是γδT细胞的超抗原，不仅能提高细胞对有害刺激的抵抗能力，而且在免疫应答的诱导调节过程中也发挥重要作用。从肿瘤组织中提取的HSP-肽复合物具有免疫原性，可以产生针对该肿瘤的特异性免疫，诱导杀伤性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes,CTL)免疫应答，特异杀伤肿瘤细胞。临床实验表明，将从肿瘤患者手术切除的肿瘤组织中提取的HSP-肽复合物回输给患者本人，其残余肿瘤的大小及肿瘤复发时间均得到控制，且存活时间得到延长。但患者体内肿瘤组织中HSP-肿瘤肽复合物的量比较少，难以达到有效量。本实验用异种HSP及异种HSP-肿瘤抗原复合物体外扩增人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)，以期寻找一种新的有效的扩增γδT细胞的方法，并检测了所扩增的γδT细胞的亚型及细胞毒活性;用ADP化学连接法体外构建了HSP-Daudi肿瘤肽复合物并检测其活化的γδT细胞的增殖、细胞毒活性及分泌的细胞因子的水平，主要结果如下：一：异种HSP对γδT细胞的活化扩增作用：以抗TCRγδ抗体为阳性对照，分别用HSP及从榄香烯处理的小鼠Hca-F肝癌细胞复合瘤苗中提取的HSP-肽复合物来刺激人PBMCs的γδT细胞，以期建立一种新的扩增体系，并探索异种HSP对人γδT细胞的活化作用。 1、细胞的扩增及γδT细胞受体表达：细胞培养14天后，固相抗体法可使培养的细胞总数增加30-40倍，γδT细胞的平均纯度为86.7％±5.7％;HSP可使培养的细胞总数增加7-8倍，γδT细胞的平均纯度为71.23％±2.7％;HSP-肽复合物可使培养的细胞总数增加5-6倍，γδT细胞的平均纯度为27.26％±4.24％;1640对照组培养体系，7天左右细胞开始出现死亡，14天时以死细胞居多，活细胞总数未见增长，γδT细胞的平均纯度为7％±2％。倾T细胞平均纯度各组间均存在显著性差异(pH SP70BcG>HsP70一肤复合物习640。流式细胞仪及RT一PCR结果表明:抗体及 Hsp、c。活化的下6T细胞以表达VYg/V62亚型为主，且Vsl、V62、V63三种亚型均得到表达。 2、异种HsP70扩增的协T细胞对Daudi的杀伤作用: 细胞毒实验结果表明:在效靶比为ro:1时，各培养体系所扩增的倾T细胞对 Daudi的杀伤活性依次为:抗体组98.8%士0.02叹户HSP二G71 .1%士2.04%>HSP、肚复合物52.名3%士n.67%>对照组45.57%士9.94%，各组间存在显著性差异(PHSP7oBc。组 50.27%士7.33%>HSP7。一肤复合物组39.49%士2.49%及对照组34.98%士6.3%，后两组之间无显著性差异(P>0 .05);在效靶比为2.5:1及1:1时，仅抗体组强于其他组(P HSp71.44%士13.7%、Daudi混合肤69.61%士11.530，0>对照组50.47%士8.76%(P0.05)。 2、增殖实验:24小时及48小时的增殖结果各组间无差别。而未静息化处理的Y6T细胞的24小时及48小时的增殖均大于上述各组(P<0.05)。 3、细胞因子:未检测出上述各刺激组的上清中TNF一a生物学活性有何差别。实验结果表明异种HSP7。对人外周血单个核细胞中的必T细胞具有活化作用，与

关键词： γδT细胞,HSP70BCG,HSP70-肽复合物,HSP70BCG-Daudi肿瘤肽复合物

验证性筛选PDZ结构域结合配体文库快速研究HtrA2/Omi PDZ结构域的结合特性

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国科学（C辑） 2007年第1期37卷 107-116页

作者：马素参宋婀莉高诗娟田瑞高友鹤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室蛋白质组学研究中心病理生理学系北京100005

HtrA2/Omi是一种线粒体丝氨酸蛋白酶,在哺乳动物细胞中具有双重功能,即诱导细胞凋亡和参与维持线粒体活性的动态平衡.PDZ结构域是最重要的蛋白质相互作用结构域之一,参与多种生物学过程,如细胞信号转导、蛋白质降解、细胞骨架组织等.最... 详细信息

HtrA2/Omi是一种线粒体丝氨酸蛋白酶,在哺乳动物细胞中具有双重功能,即诱导细胞凋亡和参与维持线粒体活性的动态平衡.PDZ结构域是最重要的蛋白质相互作用结构域之一,参与多种生物学过程,如细胞信号转导、蛋白质降解、细胞骨架组织等.最近研究发现,HtrA2/Omi蛋白的PDZ结构域与配体的相互作用,可以调节HtrA2/Omi蛋白自身的水解酶活性.以HtrA2/Omi PDZ结构域为研究对象,用酵母双杂交系统验证性筛选PDZ结构域结合配体文库,快速研究该结构域的结合特性,并在人类全蛋白质组范围内预测并发现该结构域新的相互作用蛋白,最后分析这些新的相互作用所能够形成的最小相互作用网络来评估其可信度.研究结果揭示了HtrA2/Omi PDZ结构域新的结合特性,即:不仅能够结合已报道的II类PDZ配体而且还可以结合I类和III类PDZ配体,并且配体-3位氨基酸具有一定范围内的可变性.而且,发现了7个新的HtrA2/Omi PDZ结构域相互作用蛋白,为进一步阐明HtrA2/Omi蛋白的生物学功能提供了重要线索.同时证明了验证性筛选目的结构域结合配体文库,这一结构域结合特性研究新策略的实用性和高效性.

关键词： HtrA2/Omi PDZ结构域结构域结合特性验证性筛选蛋白质相互作用生物信息学

异种HSP_(70)及固相抗体法体外扩增人γδT细胞的比较

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国免疫学杂志 2003年第12期19卷 845-849页

作者：高诗娟施广霞张素梅钱振超何维大连医科大学病理生理学教研室大连116027 中国医学科学院基础医学研究所免疫室北京100005

目的 :比较异种HSP70 及固相抗体法体外扩增人γδT细胞。方法 :分别用固相抗体法、HSP70BCG 及小鼠榄香烯复合瘤苗热休克蛋白 70 肽复合物 (HSP70m 肽复合物 )体外扩增人PBMCs的γδT细胞 ,流式细胞仪检测细胞表型及亚型分布 ,RT PCR... 详细信息

目的 :比较异种HSP70 及固相抗体法体外扩增人γδT细胞。方法 :分别用固相抗体法、HSP70BCG 及小鼠榄香烯复合瘤苗热休克蛋白 70 肽复合物 (HSP70m 肽复合物 )体外扩增人PBMCs的γδT细胞 ,流式细胞仪检测细胞表型及亚型分布 ,RT PCR检测各亚型基因的取用。MTT检测γδT细胞的细胞毒作用。结果 :培养 14天后 ,抗体法扩增的PMBCs总数增加 30～ 4 0倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 86 .7% ;HSP70BCG 组PBMCs总数增加 7～ 8倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 71.32 % ;HSP70m 肽复合物组PBMCs总数增加 4～ 5倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 2 7.2 6 %。抗体及HSP70BCG 扩增的γδT细胞以表达Vγ9 Vδ2亚型为主 ,且Vδ1、Vδ2、Vδ3三种基因均得到取用 ,对Daudi具较高的杀伤活性。结论 :抗体及HSP70BCG 均能扩增出高纯度的γδT细胞 ,且具有完整的受体库 ,扩增的γδT细胞具细胞毒活性。

关键词： γδT细胞固相抗体法 HSP70BCG HSP70m-肽复合物

聚乙烯亚胺包裹小环DNA形成的纳米颗粒传输外源基因的性质表征

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2010年第6期26卷 772-779页

作者：张超刘鹤高诗娟黄文林王宗烨中国科学院微生物研究所中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 中山大学附属肿瘤医院广州510060 解放军第306医院放疗中心北京100101

聚乙烯亚胺(PEI)是一种具有良好生物安全性和生物相容性的非病毒载体,能高效转染肿瘤细胞。小环DNA是一种去除质粒细菌骨架,只含有目的基因表达框的环状DNA分子。与普通质粒相比,小环DNA具有表达效率高、持续时间长的优势。使用PEI包裹... 详细信息

聚乙烯亚胺(PEI)是一种具有良好生物安全性和生物相容性的非病毒载体,能高效转染肿瘤细胞。小环DNA是一种去除质粒细菌骨架,只含有目的基因表达框的环状DNA分子。与普通质粒相比,小环DNA具有表达效率高、持续时间长的优势。使用PEI包裹携带报告基因gfp和抑癌基因pten小环DNA载体,并利用各种技术手段分析了该传输系统的理化性质和生物学效应。凝胶阻滞实验、电镜实验及MTT实验分析结果表明利用PEI包裹小环DNA和质粒DNA体系性质无显著的差别,并且2种复合物对细胞毒性亦无明显差别;但是动态光散射实验结果显示由于PEI可以包裹更多数量的小环DNA,所以PEI包裹小环DNA形成的复合物粒径要略大于包裹质粒DNA形成的复合物粒径。荧光显微镜实验、real-time PCR分析和Western blotting分析结果表明,PEI包裹小环DNA形成的复合物对细胞的转染效率要远远高于PEI包裹质粒DNA所形成的复合物,并且小环所携带的外源基因的表达效率要远远高于质粒DNA所携带的外源基因的表达效率。实验结果表明,PEI包裹小环DNA形成的纳米颗粒在细胞转染过程中具有很高的表达效率,这一研究结果为PEI包裹小环DNA的非病毒载体系统在传输外源基因过程中的应用提供理论基础和技术支持。

关键词：聚乙烯亚胺小环DNA gfp基因 pten基因纳米颗粒基因传输

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

埃博拉,领跑有大威胁的小病毒们

健康与营养 2014年第9期 46-48页

作者：高诗娟中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫研究室

病毒很渺小,小到需要把10万个左右的病毒粒子排列起来才可能用肉眼勉强看到;病毒很聪明,聪明到仅仅依靠其自身的几个基因及蛋白就可以擒获宿主细胞使其为之服务;病毒很威武,曾几何时,所过之处,哀鸿遍野,而环境中人躲闪不急。近日在非洲... 详细信息

病毒很渺小,小到需要把10万个左右的病毒粒子排列起来才可能用肉眼勉强看到;病毒很聪明,聪明到仅仅依靠其自身的几个基因及蛋白就可以擒获宿主细胞使其为之服务;病毒很威武,曾几何时,所过之处,哀鸿遍野,而环境中人躲闪不急。近日在非洲爆发的埃博拉疫情便是典型的例子。一起来看看各种对生命有很大小威胁的病毒吧。

关键词：宿主细胞生物安全等级实验室工作人员刺突蛋白抗病毒药物高致病性禽流感致死率传播速度个人卫生习惯系统综合征