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人核心聚糖蛋白真核表达系统构建及其活性评价

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人核心聚糖蛋白真核表达系统构建及其活性评价

作者：马炳南辽宁大学

学位级别：硕士

核心聚糖蛋白(Decorin)存在于细胞外基质中,含有大量亮氨酸,1978年由美国国立卫生研究院骨科研究所的Fisher教授首次分离,其分子量为39KD,具有多种重要的生物活性。核心聚糖蛋白通过与细胞外基质蛋白、细胞因子、细胞表面受体相互作用,... 详细信息

核心聚糖蛋白(Decorin)存在于细胞外基质中,含有大量亮氨酸,1978年由美国国立卫生研究院骨科研究所的Fisher教授首次分离,其分子量为39KD,具有多种重要的生物活性。核心聚糖蛋白通过与细胞外基质蛋白、细胞因子、细胞表面受体相互作用,可以抑制肿瘤细胞的发生、发展和生长。早期研究发现,Decorin的缺失会促进肿瘤的发生。研究发现,DCN能与TGF-β结合,DCN竞争性地和TGF-β结合,使TGF-β的生物活性受到抑制,并且能够影响TGF-β结构的稳定性。核心聚糖蛋白还能和EGFR结合,可使EGFR/ErbB的受体酪氨酸激酶表达受到抑制,这种抑制是由于EGFR酪氨酸激酶的持续丧失活性造成的,这种抑制还会导致细胞内钙离子增加,p21,p27(细胞周期调节蛋白依赖性激酶抑制剂)基因被诱导开放,p21,p27蛋白上调,最终引起肿瘤生长抑制。也有研究发现,DCN是Met受体的一个竞争型配体,它可以跟Met受体结合,诱导其表达从而引发其泛素化进而被降解,同时引起其下游效应分子之一的p-catenin的显著降解下调。最新研究发现Decorin可能通过诱导不同的EGFR反应,有选择性的激活受体自身磷酸化区域的磷酸酪氨酸来产生与EGF不同的信号连锁反应,并通过自身降解来抑制ErbB2和ErbB4受体的活性,最终达到抑制肿瘤细胞增殖的目的;Decorin也会通过诱导内皮细胞形成及激活细胞内途径来影响肿瘤血管生成;同时,Decorin在体外、体内和异种移植模型条件下均参与同E-cadherin结合的因子p-catenin的下调活动,所以有理由认为Decorin在肿瘤转移过程中发挥着重要作用。在前期研究基础上,本研究利用基因工程技术,制备Decorin的真核细胞(毕赤酵母)蛋白表达系统。经G-75分子筛纯化蛋白,利用划痕愈合实验和MTT法确定其抑制肿瘤细胞生长及迁移的活性,以Western Blot研究Decorin蛋白抑制肿瘤细胞生长的分子机制,研究结果如下:1)表达载体构建:通过PCR得到Decorin基因,将其与pPICZαA酵母表达质粒连接构建真核表达载体pPICZαA-decorin,将得到的载体转化大肠杆菌DH5α,经酶切和测序确认得到表达载体pPICZαA-decorin。将pPICZαA-decorin线性化后电转化进入毕赤酵母X-33中与酵母基因整合,完成Decorin酵母表达载体的构建。2)重组蛋白诱导表达和纯化:将重组质粒大量提取后线性化,通过电转化方法使其与毕赤酵母基因整合,将转化后的酵母接种到含博来霉素(Zeocin)和山梨醇的YPD固体培养基上30℃培养3～5天,当长出菌落时,将每个菌落接种到含高浓度博来霉素(Zeocin)的YPD固体培养基上30℃培养3～5天,直到长出单菌落。挑选生长良好的单菌落接种到20ml YPD液体培养基中37℃摇床过夜培养,第二天按3%接种于100ml YPD液体培养基中37℃摇床培养,直到OD600≈ 1.0时加入0.5%甲醇诱导重组蛋白表达,每隔24小时补加一次甲醇,4天后收集培养基1O000rpm离心15min收集上清液,过G-75分子筛,经洗脱、浓缩除盐和冷冻干燥,得到重组蛋白。3)生物学活性分析:以细胞划痕愈合实验和MTT法分析重组蛋白在体外抑制肿瘤细胞生长与迁移的活性。结果表明,所得到重组蛋白具有抑制结肠癌细胞生长于迁移的活性。4)分子机制研究:以Westem Blot检测蛋白表达量变化,通过实验结果发现真核表达的重组Decorin蛋白下调了CDK4、Cyclin D1和β-catenin表达水平,上调了 E-cadherin表达水平。综上所述,本研究所构建重组蛋白具有抑制结肠癌肿瘤细胞生长及迁移的作用,并且通过毕赤酵母表达重组蛋白能对Decorin基因的表达产物进行正确的折叠和翻译后加工修饰,使表达产物更接近于目的蛋白的天然结构,有效保持了其生物学活性。同时,本研究将为研制新型结肠癌治疗药物奠定良好的基础。

关键词：核心聚糖蛋白(DCN) 真核表达蛋白分离纯化 MTT 结肠癌肿瘤细胞

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菌血症的病理生理学

国外医学(内科学分册) 1984年第11期 555-557页

作者：马炳南

按传统的看法,菌血症是细菌从炎症局部向淋巴管或血管直接扩散的结果。近数10年来,由于血管内器械的使用增加,细菌可直接从皮肤进入血流,并已成为目前菌血症最主要的原因。绝大多数菌血症主要由几种细菌引起。在美国,50年代前是肺炎球... 详细信息

按传统的看法,菌血症是细菌从炎症局部向淋巴管或血管直接扩散的结果。近数10年来,由于血管内器械的使用增加,细菌可直接从皮肤进入血流,并已成为目前菌血症最主要的原因。绝大多数菌血症主要由几种细菌引起。在美国,50年代前是肺炎球菌、A族链球菌、嗜血流感杆菌、脑膜炎球菌、沙门氏菌属及金黄色葡萄球菌;50年代以来,革兰氏阴性杆菌菌血症发展到目前令人担心的程度。过去20年中,新生儿的B族链球菌菌血症和成人播散性淋球菌感染也有显著上升。菌血症是一个急性过程,但亦有无症状者。其发

关键词：菌血症革兰氏阴性杆菌病理生理学金黄色葡萄球菌嗜血流感杆菌脑膜炎球菌肺炎球菌细菌数沙门氏菌属致病菌种类

苏拉明对于表现为Kaposi内瘤或AIDS相关症候群的HTLV-Ⅲ感染的作用:临床药理学和体内的病毒复制抑制

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国外医学(内科学分册) 1986年第11期 516-517页

作者：马炳南

苏拉明(suramin)可在体外削弱人类嗜 T 淋巴细胞病毒Ⅲ(HTLV-Ⅲ)或淋巴结病相关病毒(LAV)的传染性,以及抑制其对细胞的致病作用,

关键词：苏拉明 Kaposi HTLV 病毒复制 AIDS 症候群

伤寒-宋内志贺氏菌疫苗(5076-1C株)的安全性及抗原性

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国际内科学杂志 1984年第11期 570-571页

作者：马炳南

把编码宋内志贺氏菌Ⅰ型抗原的质粒转移到半乳异构酶阴性、Vi抗原阴性、耐链霉素突变型的、无毒的伤寒杆菌Ty 21a株上,就组成了5076—1C株。这种菌株考虑可能发展成为一种既能抗伤寒又能抗宋内志贺氏菌痢疾的口服疫苗。作者经过豚鼠的... 详细信息

把编码宋内志贺氏菌Ⅰ型抗原的质粒转移到半乳异构酶阴性、Vi抗原阴性、耐链霉素突变型的、无毒的伤寒杆菌Ty 21a株上,就组成了5076—1C株。这种菌株考虑可能发展成为一种既能抗伤寒又能抗宋内志贺氏菌痢疾的口服疫苗。作者经过豚鼠的安全性试验后,对19名志愿者进行了此疫苗的安全性和抗原性试验。菌数分别为1×10;、5×10;、1×10;的

关键词：抗原性疫苗菌苗志贺氏菌伤寒沙门氏杆菌病

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肿瘤病人的机会性真菌感染及其化学预防

国外医学(内科学分册) 1986年第2期 59-60页

作者：马炳南姚集鲁中山医科大学第三附属医院

机会性真菌感染已渐成为肿瘤病人患病和死亡的重要原因.本病诊断困难。本文介绍念球菌病、曲霉菌病及隐球菌病较新的诊断技术。由于采用抗真菌药物治疗患者的预后差,因而强调大剂量药物预防。本文介绍采用制霉素、二性霉素 B、酮康唑或... 详细信息

机会性真菌感染已渐成为肿瘤病人患病和死亡的重要原因.本病诊断困难。本文介绍念球菌病、曲霉菌病及隐球菌病较新的诊断技术。由于采用抗真菌药物治疗患者的预后差,因而强调大剂量药物预防。本文介绍采用制霉素、二性霉素 B、酮康唑或双氯苯咪唑等药,对受隔离保护的病人,可用含有数种抗生素及抗真菌药的软膏。

关键词：二性霉素制霉素曲霉菌病真菌感染真菌病肿瘤病人念珠菌病机会性化学预防药物预防

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检测血清HBcAg的意义

国际内科学杂志 1986年第8期 347-349页

作者：马炳南彭文伟中山医科大学传染病学教研室

血清 HBcAg 在 HBV 感染中占有重要位置,血清中的 HBcAg 能反映血中 Dane 颗粒的存在及肝内 HBV 的复制情况,并可与其他的 HBV 标记起互相配合和互相补充的作用。

关键词： CAH,chronic active hepatitis慢性活动性肝炎 CPH,chronic persistent hepatitis慢性持续性肝炎 HBcAg,hepatitis B core antigen乙型肝炎核心抗原 HBeAg,hepatitis B e antigen乙型肝炎 e 抗原 HBsAg,hepatitis B surface antigenantigen 乙型肝炎表面抗原 HBV,hepatitis B virus乙型肝炎病毒

血清乙型肝炎核心抗原的检测及其在乙型肝炎病毒感染防治上的应用价值

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中华医学杂志 1986年第5期66卷 275-278+318页

作者：马炳南彭文伟中山医科大学传染病学教研室

作者把免疫复合物沉淀法和清洁离心管的方法结合起来,既提高血清乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的检出率,又减少了离心次数。检测结果表明,血清HBcAg与HBeAg、HBV-DNA及HBsAg滴度有显著的相关性,可考虑作为抗乙型肝炎治疗的疗效判断指标及乙... 详细信息

作者把免疫复合物沉淀法和清洁离心管的方法结合起来,既提高血清乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的检出率,又减少了离心次数。检测结果表明,血清HBcAg与HBeAg、HBV-DNA及HBsAg滴度有显著的相关性,可考虑作为抗乙型肝炎治疗的疗效判断指标及乙型肝炎母婴传播的危险性判断指标。

关键词： HBcAg(乙型肝炎核心抗原) HBsAg(乙型肝炎表面抗原) HBeAg(乙型肝炎e抗原) 抗-HBc(乙型肝炎核心抗体) HBV-DNAP(乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸多聚酶)

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论银行业务网络性能分析与优化研究

福建电脑 2010年第10期26卷 59-61页

作者：张治斌马炳南河南省理工大学河南焦作454100

本文从银行业务网的网络结构分析入手,介绍了银行业务网的现状和存在的问题,提出了银行系统网络优化的必要性。并结合业务网自身的网络结构特点,论述了系统网络优化的设计原则,对优化后的网络构架进行了性能分析,对银行业务网的网络优... 详细信息

本文从银行业务网的网络结构分析入手,介绍了银行业务网的现状和存在的问题,提出了银行系统网络优化的必要性。并结合业务网自身的网络结构特点,论述了系统网络优化的设计原则,对优化后的网络构架进行了性能分析,对银行业务网的网络优化设计方案进行了总结。

关键词：网络结构性能分析网络优化

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基于属性识别模型的铜仁市空气质量评价

贵州大学学报（自然科学版） 2023年第1期40卷 112-117页

作者：马炳南侯双双吴伟贵州大学生命科学学院贵州贵阳550025

为行政部门有效治理城市环境和生态保护,科学客观评价空气质量极为重要。本研究以铜仁市为对象,统计分析了2015-2020年铜仁市空气污染物变化动态特征,同时利用属性识别模型综合评价了铜仁市空气质量水平。研究结果表明:1)铜仁市主要污... 详细信息

为行政部门有效治理城市环境和生态保护,科学客观评价空气质量极为重要。本研究以铜仁市为对象,统计分析了2015-2020年铜仁市空气污染物变化动态特征,同时利用属性识别模型综合评价了铜仁市空气质量水平。研究结果表明:1)铜仁市主要污染物是PM_(2.5)、PM_(10)和O_(3),其污染程度为PM_(2.5)>PM_(10)≈O_(3),PM_(2.5)和PM_(10)浓度水平处于Ⅱ级标准,PM_(2.5)在冬季处于不达标水平,PM_(10)于2020年达Ⅰ级以下标准,有显著好转,O_(3)浓度2016年以来显著增加,存在污染风险。2)铜仁市近几年空气综合质量均为Ⅰ级标准,但空气质量综合水平呈下降趋势,主要原因在于PM_(2.5)作为首要的空气污染物,污染水平一直没有得到有效控制。此外,O_(3)污染程度风险增加。因此,PM_(2.5)和O_(3)是以后污染物控制的重点。

关键词：空气污染物空气质量评价属性识别模型铜仁市

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