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鲤鱼g型溶菌酶基因的cDNA克隆及其在毕赤酵母中的表达

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福建农林大学学报（自然科学版） 2017年第1期46卷 81-88页

作者：李雯陶妍上海海洋大学食品学院/上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306

从鲤鱼鳃组织中分离克隆到一种新的g型溶菌酶同工型基因(CLYG).该基因的全长cDNA为558 bp,除去终止密码子,编码185个氨基酸,推断的氨基酸序列没有信号肽,含3个催化位点(谷氨酸73、脯氨酸86和天冬氨酸97),具有鱼类g型溶菌酶的基本特征.通... 详细信息

从鲤鱼鳃组织中分离克隆到一种新的g型溶菌酶同工型基因(CLYG).该基因的全长cDNA为558 bp,除去终止密码子,编码185个氨基酸,推断的氨基酸序列没有信号肽,含3个催化位点(谷氨酸73、脯氨酸86和天冬氨酸97),具有鱼类g型溶菌酶的基本特征.通过PCR方法在CLYG基因的5'和3'端分别引入XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点.扩增到的目的片段与表达载体pPICZαA连接构建重组表达载体pPICZαA-CLYG后,电转至毕赤酵母X-33,筛选得到的阳性转化子在1.0%甲醇、29℃、pH 6.0的条件下诱导表达72 h,获得重组体***-PAGE和蛋白质印迹分析显示,在毕赤酵母中成功表达了重组体CLYG.

关键词：鲤鱼 g型溶菌酶毕赤酵母重组表达

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中国人保财务绩效的综合评价研究

中国人保财务绩效的综合评价研究

作者：陶妍欣首都经济贸易大学

学位级别：硕士

外资保险公司不断涌入中国市场,他们拥有雄厚的资金优势和先进的管理经验,给国内保险企业带来了巨大的经营压力。同时受当前经济下行压力影响,我国保险行业整体利润水平下降。保险企业管理者认识到绩效管理的重要性,尤其是财务绩效管理... 详细信息

外资保险公司不断涌入中国市场,他们拥有雄厚的资金优势和先进的管理经验,给国内保险企业带来了巨大的经营压力。同时受当前经济下行压力影响,我国保险行业整体利润水平下降。保险企业管理者认识到绩效管理的重要性,尤其是财务绩效管理对检验企业经营成果、改善企业经营状况发挥的重要作用。因此,科学评价我国保险企业的财务绩效,具有重要的现实意义。首先,本文研究了企业经营绩效、财务绩效和绩效评价的相关概念,介绍了企业财务绩效评价中因子分析法、沃尔评分法等五种常用的评价方法。其次,介绍了杜邦分析法的基本原理和利用价值,结合美国学者对杜邦分析体系的改进和我国保险业实际情况,构建了适用于我国财产保险行业财务绩效评价的杜邦分析体系。最后,选取中国人保财险这一具有行业代表性的企业为研究对象,通过新构建的杜邦分析法研究案例企业2013年到2015年的企业财务绩效,并与行业其他三家上市公司作对比,选取重点财务指标分析案例企业的盈利、偿债、营运及发展能力;最终将分析结论与企业经营现状相结合,分析中国人保财险财务绩效的影响因素,提出提升中国人保财务绩效的发展对策及管理建议。

关键词：财务绩效评价杜邦分析体系财产保险公司

基于小波分解的水中电爆炸冲击波波形重建方法研究

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振动与冲击 2021年第5期40卷 149-153,178页

作者：谢宇超周海滨陶妍王晨旭中国船舶工业系统工程研究院北京100094

水中金属丝电爆炸产生的冲击波,上升时间仅有数十纳秒,脉冲宽度仅为十几微秒,远小于化学炸药产生的冲击波,采用现有传感器对其进行精确测量非常困难。分析了冲击波波形形成过程,基于帕塞瓦尔时频域能量守恒定律,采用多尺度小波分解的方... 详细信息

水中金属丝电爆炸产生的冲击波,上升时间仅有数十纳秒,脉冲宽度仅为十几微秒,远小于化学炸药产生的冲击波,采用现有传感器对其进行精确测量非常困难。分析了冲击波波形形成过程,基于帕塞瓦尔时频域能量守恒定律,采用多尺度小波分解的方法,给出了一种冲击波波形重建方法。采用该方法对PCB138传感器实测的压力信号进行了重建,并与Müller-plate针式压力传感器得到的波形进行了比对。结果表明:重建后的信号更加接近真实波形,基于多尺度小波分解的波形重建算法,较基于傅立叶变换的重建算法,稳定性更好,准确度更高。

关键词：水中冲击波冲击波测量波形重建多尺度小波分解能量守恒

斑点叉尾鮰BPI抗菌肽的cDNA克隆及原核表达载体的构建

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生物技术通报 2012年第12期28卷 131-138页

作者：高北陶妍上海海洋大学食品学院上海201306

杀菌/渗透增强蛋白(bactericidal/permeability increasing protein,BPI)是生物机体细胞中表达的一种能够特异性杀灭革兰氏阴性菌的抗菌类蛋白,该蛋白包括氨基端和羧基端两个结构域,其中氨基端结构域主要承担杀菌和中和内毒素的功能。... 详细信息

杀菌/渗透增强蛋白(bactericidal/permeability increasing protein,BPI)是生物机体细胞中表达的一种能够特异性杀灭革兰氏阴性菌的抗菌类蛋白,该蛋白包括氨基端和羧基端两个结构域,其中氨基端结构域主要承担杀菌和中和内毒素的功能。参考已经报道的对人类BPI进行重组DNA表达的研究结果,首先通过RT-PCR和巢式PCR从斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)鳃中克隆了编码BPI氨基端活性结构域的cDNA片段"BPI_(Ntd)",该片段由175个氨基酸残基组成,其中63个氨基酸残基在空间上形成一个非极性的脂质结合袋,与革兰氏阴性菌外膜上脂多糖(LPS)结合,从而改变细菌膜的通透性,达到杀菌的效果。根据斑点叉尾鮰与其他生物之间BPI氨基酸序列的比对结果,发现氨基端存在40个保守的氨基酸残基,其中9个高度保守的残基位于脂多糖结合区域内。为了进一步建立原核表达系统,根据pET-32a(+)和pET-28a(+)两种质粒的不同特点,选择其作为原核表达质粒,将"BPI_(Ntd)"片段分别插入两种质粒,通过菌落PCR、EcoRⅠ和HindⅢ双酶切反应以及DNA测序等方法,证明了重组表达质粒"pET-32a-BPI_(Ntd)"和"pET-28a-BPI_(Ntd)"已被成功构建。

关键词：斑点叉尾鮰 BPI结构域 cDNA克隆原核表达

基于重组毕赤酵母的草鱼C型溶菌酶生物合成及其抑菌活性

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生物技术通报 2021年第12期37卷 169-179页

作者：杨悦陶妍谢晶钱韻芳上海海洋大学食品学院上海201306

C型溶菌酶(Chicken-type lysozyme)作为草鱼(Ctenopharyngodon idella)内源性免疫系统中的重要蛋白质类免疫因子,能在草鱼抵抗病原微生物侵染的过程中发挥重要作用,亦是开发绿色饲料添加剂或生物类抗菌剂的佳选。本研究通过逆转录PCR(re... 详细信息

C型溶菌酶(Chicken-type lysozyme)作为草鱼(Ctenopharyngodon idella)内源性免疫系统中的重要蛋白质类免疫因子,能在草鱼抵抗病原微生物侵染的过程中发挥重要作用,亦是开发绿色饲料添加剂或生物类抗菌剂的佳选。本研究通过逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)克隆草鱼C型溶菌酶的编码基因“CilyC”,再经二次PCR在其5'和3'端添加各种必需位点。将“CilyC”与表达载体“pPICZαA”连接后转入工程菌毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33中,获得重组菌株“X-33/pPICZαACilyC”。经含高浓度博莱霉素的培养基筛选得到高拷贝重组菌株后,对其最适蛋白质表达条件进行优化和筛选。通过镍离子亲和层析法纯化重组菌株的表达产物,并对纯化产物进行Western blot分析和LC-MS/MS质谱鉴定。此外,经平板涂布法和最小抑菌浓度(MIC)法考察重组菌株表达产物的抑菌活性。结果表明:X-33/pPICZαA-CilyC在29℃、250 r/min、1%甲醇浓度、96 h的发酵培养条件下,能产13.7 mg/L的重组蛋白;该重组蛋白经结构鉴定为预期分子量14.5 kD的CilyC蛋白。抑菌试验结果显示:重组CilyC具有明显的抗革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilisi)、单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)以及革兰氏阴性的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)和沙门氏菌(Salmonella)的生物学活性。本研究构建的重组毕赤酵母菌株“X-33/pPICZαA-CilyC”能有效合成草鱼C型溶菌酶,为鱼类来源C型溶菌酶的大规模制备奠定了良好基础。

关键词：草鱼 C型溶菌酶重组毕赤酵母抑菌活性

淡水鱼肌球蛋白Ca^(2+)-ATPase热稳定性的季节变化

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上海水产大学学报 2007年第4期16卷 362-367页

作者：韩黎陶妍汪之和上海水产大学食品学院上海200090

对来自春季(4月份)、夏季(8月份)、秋季(11月份)和冬季(1月份)的草鱼(Ctenopharyngodonidellus)和鲢(Hypophthalmichthys molitrix)骨骼肌肌球蛋白进行提取和纯化,通过测定肌球蛋白在不同热变性温度下Ca2+-ATPase的变性速率常数(KD),考... 详细信息

对来自春季(4月份)、夏季(8月份)、秋季(11月份)和冬季(1月份)的草鱼(Ctenopharyngodonidellus)和鲢(Hypophthalmichthys molitrix)骨骼肌肌球蛋白进行提取和纯化,通过测定肌球蛋白在不同热变性温度下Ca2+-ATPase的变性速率常数(KD),考察了两种淡水鱼肌球蛋白热稳定性的季节变化。研究结果表明,两种鱼肌球蛋白Ca2+-ATPase的活性均显示夏季鱼>春季鱼>秋季鱼>冬季鱼。在35℃、40℃、45℃和50℃的热变性温度下,测定了两种鱼的肌球蛋白Ca2+-ATPase变性速率常数(KD),证明了肌球蛋白的热变性符合一级反应速度方程。经35℃热变性的肌球蛋白的KD值显示了冬季鱼约为夏季鱼的4倍,而秋季鱼和春季鱼介于冬季鱼和夏季鱼之间,且秋季鱼的KD值略低于冬季鱼,而春季鱼的KD值略高于夏季鱼。在40℃、45℃和50℃的热变性温度下,对各种肌球蛋白测得的KD值的变化趋势与上述结果相似。本研究证明了淡水鱼肌球蛋白的热稳定性夏季鱼明显优于冬季鱼,而春季鱼和秋季鱼分别与夏季鱼和冬季鱼的相似。

关键词：淡水鱼肌球蛋白 Ca^2+-ATPase 热稳定性季节变化

草鱼和鲢鱼肌球蛋白Ca^(2+)-ATPase热力学活化参数的季节变化

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水生生物学报 2008年第2期32卷 161-166页

作者：韩黎陶妍汪之和上海水产大学食品学院上海200090

肌球蛋白构成了鱼肌肉肌原纤维蛋白的50%以上,它的性质主要决定了肌原纤维蛋白的性质,进而影响了鱼肌肉蛋白质的加工适性。本文对来自春季(4月份)、夏季(8月份)、秋季(11月份)和冬季(1月份)的草鱼(Ctenopharyngodonidellus Valenciennes... 详细信息

肌球蛋白构成了鱼肌肉肌原纤维蛋白的50%以上,它的性质主要决定了肌原纤维蛋白的性质,进而影响了鱼肌肉蛋白质的加工适性。本文对来自春季(4月份)、夏季(8月份)、秋季(11月份)和冬季(1月份)的草鱼(Ctenopharyngodonidellus Valenciennes)和鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix Valenciennes)骨骼肌肌球蛋白进行提取和纯化,通过测定不同季节的两种淡水鱼肌球蛋白Ca2+-ATPase的热力学活化参数,从化学反应的热力学理论上证明了淡水鱼肌球蛋白的热稳定性与季节温度变化之间的关系。研究结果表明,草鱼和鲢鱼肌球蛋白Ca2+-ATPase的热力学活化参数活化能Ea、活化焓ΔH和活化熵ΔS伴随栖息环境温度的上升而增大,而活化自由能ΔG的变化幅度很小,证明了肌球蛋白的热稳定性夏季鱼明显优于冬季鱼,而春季鱼和秋季鱼分别与夏季鱼和冬季鱼的相似。另一方面,ΔH与ΔS之间显示了良好的线性相关,证明了淡水鱼能够通过其肌肉蛋白质反应的活化焓与活化熵之间的互补效应,以应对自然界季节环境温度的变化。

关键词：草鱼鲢鱼肌球蛋白 Ca^2+-ATPase活性热力学活化参数季节变化

社会企业家公共服务动机对社会企业绩效的影响:商业模式创新的中介作用

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管理评论 2023年第8期35卷 85-99页

作者：吴剑琳陶妍妮吕萍中国科学技术大学管理学院合肥230026

社会企业对解决社会问题、打破福利僵局、促进社会可持续发展有重要作用,如何提升社会企业绩效受到了学界的关注。公共服务动机作为推动社会企业家发展社会企业的内在动力,对社会企业绩效有重要影响。然而社会企业家公共服务动机通过何... 详细信息

社会企业对解决社会问题、打破福利僵局、促进社会可持续发展有重要作用,如何提升社会企业绩效受到了学界的关注。公共服务动机作为推动社会企业家发展社会企业的内在动力,对社会企业绩效有重要影响。然而社会企业家公共服务动机通过何种内在机制影响社会企业绩效并没有得到系统的阐释与实证研究。基于此,本研究基于高阶梯队理论,探讨社会企业家公共服务动机对社会企业绩效的影响机制,包括商业模式创新的中介作用和环境动荡性的调节作用。对198家社会企业的调查数据分析结果表明,公共服务动机对社会企业的经济绩效与社会绩效有显著的正向影响。新颖型商业模式创新在公共服务动机和社会企业的经济绩效与社会绩效间发挥中介作用。效率型商业模式创新在公共服务动机和社会企业的经济绩效间发挥中介作用。环境动荡性正向调节公共服务动机对效率型商业模式创新和新颖型商业模式创新的作用。研究结论丰富了社会企业绩效的前因研究,揭示了公共服务动机影响社会企业绩效的内在机制和边界条件,同时也为提高社会企业绩效提供了新思路。

关键词：社会企业绩效效率型商业模式创新新颖型商业模式创新公共服务动机环境动荡性

斑点叉尾鮰NK-lysin基因的cDNA克隆及融合表达质粒构建

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生物技术通报 2012年第9期28卷 166-172页

作者：张卓娜陶妍上海海洋大学食品学院上海201306

以斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)NK-lysin-type1的成熟肽为研究目标,首先通过RT-PCR和巢式PCR从斑点叉尾鮰的鳃中克隆到编码NK-lysin成熟肽的基因,该基因编码由92个氨基酸残基组成的成熟肽;6个高度保守的半胱氨酸残基位于成熟肽内,... 详细信息

以斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)NK-lysin-type1的成熟肽为研究目标,首先通过RT-PCR和巢式PCR从斑点叉尾鮰的鳃中克隆到编码NK-lysin成熟肽的基因,该基因编码由92个氨基酸残基组成的成熟肽;6个高度保守的半胱氨酸残基位于成熟肽内,它们被推测与NK-lysin的抗菌活性有关。为了进一步构建原核表达系统用于成熟肽的表达,pET-32a(+)被选择作为融合表达质粒,该质粒含有1个trxA融合头基因,与目的片段mNK-lysin连接后形成融合基因trxA-mNK-lysin,进而有助于在工程菌***21(DE3)中的可溶性融合表达。通过PCR、EcoR I和HindⅢ双酶切处理以及DNA测序鉴定,证明pET-32a-mNK-lysin重组融合表达质粒已经被成功构建;将其转化至工程菌***21(DE3)后的测序结果表明该重组质粒未发生任何DNA变异。

关键词：斑点叉尾鮰抗菌肽 NK-lysin cDNA克隆融合表达质粒