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氨基酸脱氢酶突变体的高通量筛选方法

化学与生物工程 2024年第6期41卷 21-28页

作者：任红谢莹莹黄锦婷金钰莹范文静黄桂东钟先锋佛山科学技术学院食品科学与工程学院广东佛山528000 广东省传统发酵食品工程技术研究中心广东佛山528000 佛山市酿造工程技术研究中心广东佛山528000

基于显色体系和破壁条件的优化,构建了酶解破壁与显色反应相结合的氨基酸脱氢酶突变体高通量筛选方法。以颜色和吸光度表征内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶(StDAPDH)酶活,以碘硝基四唑紫(INT)-吩嗪硫酸甲酯(PMS)为显色剂,通过其与StDAPD... 详细信息

基于显色体系和破壁条件的优化,构建了酶解破壁与显色反应相结合的氨基酸脱氢酶突变体高通量筛选方法。以颜色和吸光度表征内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶(StDAPDH)酶活,以碘硝基四唑紫(INT)-吩嗪硫酸甲酯(PMS)为显色剂,通过其与StDAPDH的偶联反应优化了显色体系;以StDAPDH酶活为评价指标,在单因素实验的基础上,采用响应面法探究了菌体量、破壁时间、溶菌酶加量对菌体破壁效果的影响。确定最优显色体系为:INT浓度0.1 mg·mL^(-1)、PMS浓度0.5μg·mL^(-1)、检测波长510 nm;确定最优菌体破壁条件为:30 mL OD 600值为1.5的菌悬液,离心后用10 mL PBS缓冲液重悬菌体沉淀,加入0.2 mg·mL^(-1)的溶菌酶,在37℃下破壁50 min。该方法简单高效,为氨基酸脱氢酶突变体的高通量筛选提供了一定参考。

关键词：显色体系破壁高通量筛选氨基酸脱氢酶

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酱曲源产脂肪酶肉葡萄球菌的选育及应用

食品科技 2024年第2期49卷 8-14页

作者：黄乐怡林怡华于茜雅邓川龄阮润达黄桂东钟先锋王阿利佛山科学技术学院食品科学与工程学院广东佛山528231 广东省传统发酵食品工程技术研究中心广东省食品流通安全控制工程技术研究中心佛山市酿造工程技术研究中心佛山市农业生物制造工程技术研究中心广东佛山528231

为筛选酱曲中高脂肪酶活力的菌株以提升原料利用率,采用吐温-80和三丁酸甘油酯平板法、对硝基苯酚法及分子生物学鉴定,从酱曲中筛选出产脂肪酶菌株,并对其进行诱变选育,同时将选育菌株应用于酱曲制备。结果显示,筛选菌株JQZ10鉴定为肉... 详细信息

为筛选酱曲中高脂肪酶活力的菌株以提升原料利用率,采用吐温-80和三丁酸甘油酯平板法、对硝基苯酚法及分子生物学鉴定,从酱曲中筛选出产脂肪酶菌株,并对其进行诱变选育,同时将选育菌株应用于酱曲制备。结果显示,筛选菌株JQZ10鉴定为肉葡萄球菌,经紫外诱变后酶活达3.92 U/mL,酶活提高了68%,且突变菌株在传代过程中产脂肪酶稳定性好。选育菌株应用于酱曲制备时,成曲感官没有明显的差异,同时添加原始菌株的成曲脂肪酶活性较单一米曲霉提高了48%,添加突变菌株的成曲酶活性提高了77%,且原始菌株和突变菌株之间差异显著(P<0.05)。研究结果表明,酱曲中选育的内源性肉葡萄球菌,可显著提高酱油成曲的脂肪酶活性,为酱油强化发酵和酱曲发酵剂开发提供了理论基础和菌株资源。

关键词：酱曲脂肪酶肉葡萄球菌紫外诱变育种

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“工匠型”食品人才的培育路径研究

农产品加工 2024年第5期 134-136页

作者：钟先锋梅琴琴任红曹凤黄桂东董思远佛山科学技术学院食品科学与工程学院广东佛山528231

目前,我国食品工业正处于转型的关键时期,面临着破解人民群众对兼具健康美味食品的需求、解决食品行业发展不充分,不平衡的矛盾和低端食品转型的艰巨任务,迫切需要食品领域专业人才夯实基础研究、突破现有共性技术难题。探究“工匠型”... 详细信息

目前,我国食品工业正处于转型的关键时期,面临着破解人民群众对兼具健康美味食品的需求、解决食品行业发展不充分,不平衡的矛盾和低端食品转型的艰巨任务,迫切需要食品领域专业人才夯实基础研究、突破现有共性技术难题。探究“工匠型”食品人才的培育路径,有助于充分发挥高校人才培育的作用,提高食品专业学生的职业素养、创新创业意识,推动食品工业快速转型,为食品安全保驾护航。

关键词：工匠精神食品专业培育

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对数生长期酿酒酵母胞内代谢情况分析

食品与发酵工业 2022年第22期48卷 68-75页

作者：曹凤任红黄桂东祝智航陈忻钟先锋佛山科学技术学院食品科学与工程学院广东佛山528231 广东省传统发酵食品工程技术研究中心广东佛山528231 广东省食品流通安全控制工程技术研究中心广东佛山528231 佛山市酿造工程技术研究中心广东佛山528231 佛山市农业生物制造工程技术研究中心广东佛山528231

酿酒酵母是发酵产业中的关键微生物,处于对数生长期的酵母菌迅速繁殖,积累大量初级代谢产物,对此时期进行调控可以提高发酵效率。为了解对数生长期酿酒酵母发酵情况,采用液相色谱串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrom... 详细信息

酿酒酵母是发酵产业中的关键微生物,处于对数生长期的酵母菌迅速繁殖,积累大量初级代谢产物,对此时期进行调控可以提高发酵效率。为了解对数生长期酿酒酵母发酵情况,采用液相色谱串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对酵母胞内主要代谢物及其代谢途径进行分析。结果表明,在对数生长期酿酒酵母胞内共鉴定927种代谢物,含氮和含硫化合物数量及相对含量均最高。这些代谢物参与的代谢途径中,核苷酸代谢、辅因子和维生素代谢、碳水化合物代谢以及氨基酸代谢为酿酒酵母主要代谢途径,核苷酸代谢中相对含量最高的为嘧啶代谢。代谢物和代谢途径主要涉及酵母细胞膜的构建,遗传信息的复制,信号分子的传递,渗透压的调节等。为酵母提供生长所需的基本小分子物质和能量,同时为合成蛋白质、核酸等生物大分子物质提供原料。此外,碳水化合物和氨基酸代谢的代谢流分布可更好地支持酿酒酵母进行核苷酸代谢,促进酵母菌的增殖、生长和存活。该研究结果为定向改造酿酒酵母、提高其发酵效率提供一定科学依据。

关键词：酿酒酵母对数生长期胞内代谢代谢物代谢途径

凝固型脱皮亚麻籽仁发酵乳的研制及贮藏稳定性研究

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食品与发酵工业 2023年

作者：梅琴琴董思远范文静黄剑波黄桂东钟先锋广东产品质量监督检验研究院佛山科学技术学院食品科学与工程学院

该研究以脱皮亚麻籽仁原浆和全脂牛奶为主要原料，通过单因素试验和响应面法对脱皮亚麻籽仁发酵乳的发酵工艺进行优化，并对其贮藏稳定性进行研究。结果表明，凝固型脱皮亚麻籽仁发酵乳最佳制备工艺条件为：脱皮亚麻籽仁原浆与全脂牛奶... 详细信息

该研究以脱皮亚麻籽仁原浆和全脂牛奶为主要原料，通过单因素试验和响应面法对脱皮亚麻籽仁发酵乳的发酵工艺进行优化，并对其贮藏稳定性进行研究。结果表明，凝固型脱皮亚麻籽仁发酵乳最佳制备工艺条件为：脱皮亚麻籽仁原浆与全脂牛奶的体积比3:7、蔗糖添加量7.4%、发酵剂添加量0.23%、β-环糊精添加量0.2%、发酵温度42 ℃、发酵时间8 h。另外在此优化条件下，贮藏21 d后发酵乳的可滴定酸度为84 oT、pH 4.3、持水力为84.03%、活菌数为2.44×108CFU/g，硬度为109.4 gf、弹性为0.63 mm、咀嚼性为45.8 gf、黏性为72.1 gf、内聚性为0.66。其凝固型发酵乳色泽乳白、质地均匀一致、无乳清析出，具有亚麻籽的香气且稳定性良好，所得结果为植物基发酵乳的发酵工艺及贮藏特性评价提供研究思路和数据参考。

关键词：脱皮亚麻籽仁牛奶发酵乳质构特性贮藏稳定性

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酒饼叶对豉香型白酒酒饼细菌多样性影响研究

食品与发酵工业 2022年第13期48卷 63-69页

作者：孙哲黄芷珊刘幼强曹荣冰黄桂东钟先锋佛山科学技术学院食品科学与工程学院广东佛山528231 广东省九江酒厂有限公司广东佛山528203 广东省传统发酵食品工程技术研究中心广东佛山528231 广东省食品流通安全控制工程技术研究中心广东佛山528231 佛山市酿造工程技术研究中心广东佛山528231 佛山市农业生物制造工程技术研究中心广东佛山528231

该文以广东省豉香型白酒的酒饼为研究对象,采用Illumina MiSeq高通量测序平台对不同比例酒饼叶生产的豉香型白酒酒饼中的细菌16S rDNA V3-V4区进行测序,分析豉香型白酒酒饼细菌菌群的多样性。结果表明,酒饼中细菌微生物群落构成比较稳定... 详细信息

该文以广东省豉香型白酒的酒饼为研究对象,采用Illumina MiSeq高通量测序平台对不同比例酒饼叶生产的豉香型白酒酒饼中的细菌16S rDNA V3-V4区进行测序,分析豉香型白酒酒饼细菌菌群的多样性。结果表明,酒饼中细菌微生物群落构成比较稳定,90%以上分布在芽孢杆菌纲中,分别属于乳杆菌属、片球菌属和魏斯氏菌属等(相对丰度≥1%),不同比例酒饼叶对于豉香型白酒酒饼的细菌群落丰富度和多样性的影响各不相同;1%桂叶和8%假鹰爪叶生产的酒饼能够很好地提升其细菌菌群的丰富度和多样性;添加酒饼叶对乳杆菌属的相对丰度有抑制作用,桂叶和假鹰爪叶混合生产的酒饼可以大大提高魏斯氏菌属的相对丰度而降低片球菌属的丰度。该研究为优化豉香型白酒酒饼的生产发酵工艺和丰富酒曲微生物菌群数据库提供了理论依据。

关键词：豉香型白酒酒饼桂叶假鹰爪叶微生物菌群高通量测序

酱油渣中具有抑菌活性的乳酸菌的筛选及其抑菌特性

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食品工业科技 2022年第18期43卷 137-144页

作者：吕蕾杨晓萍王阿利钟先锋黄桂东赵嘉乐佛山科学技术学院食品科学与工程学院广东佛山528231 广东省传统发酵食品工程技术研究中心广东佛山528231 广东省食品流通安全控制工程技术研究中心广东佛山528231 佛山市酿造工程技术研究中心广东佛山528231 佛山市农业生物制造工程技术研究中心广东佛山528231

本研究以实验室前期从酱油渣中分离的16株乳酸菌ZW1~ZW16为出发菌株,拟筛选对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑制效果较强的菌株,并对菌株产生的抑菌物质、生长特性及其影响因素进行分析。结果显示,乳酸菌ZW2、ZW9、ZW14对大肠杆菌、金黄色... 详细信息

本研究以实验室前期从酱油渣中分离的16株乳酸菌ZW1~ZW16为出发菌株,拟筛选对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑制效果较强的菌株,并对菌株产生的抑菌物质、生长特性及其影响因素进行分析。结果显示,乳酸菌ZW2、ZW9、ZW14对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有较高的抑菌活性,其中ZW9抑菌效果最好,排除有机酸和H_(2)O_(2)影响后,胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K、α-蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶处理后抑菌活性均显著性降低(P<0.05),初步推断抑菌物质是一种具有蛋白质属性的细菌素。抑菌动力学曲线显示,菌株培养至20 h抑菌活性趋于稳定。抑菌稳定性显示,抑菌物质在40~100℃具有较好的热稳定性,在紫外线照射、表面活性剂处理下均保持较高的抑菌活性;在pH2.0~6.0抑菌活性无明显变化,pH10.0抑菌能力完全丧失。酱油渣中筛选的3株乳酸菌具有抑菌功能且产生的抑菌物质稳定,对开发成新型生物抑菌剂具有重要参考价值。

关键词：酱油渣乳酸菌抑菌活性细菌素稳定性

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糯米酒源贝莱斯芽孢杆菌的体外安全性评价

食品与发酵工业 2022年第18期48卷 95-100页

作者：黄芷珊任红黄炜健刘少韵谢卓珊钟先锋黄桂东佛山科学技术学院食品科学与工程学院广东佛山528231 广东省传统发酵食品工程技术研究中心广东佛山528231 广东省食品流通安全控制工程技术研究中心广东佛山528231 佛山市酿造工程技术研究中心广东佛山528231 佛山市农业生物制造工程技术研究中心广东佛山528231

针对前期从糯米酒中分离得到的4株抗逆性强且产蛋白酶特性优良的贝莱斯芽孢杆菌,为充分开发其使用价值,该文对这4株贝莱斯芽孢杆菌分别从耐药性检测、耐药质粒检测、溶血实验、毒力基因PCR检测4个方面展开安全性评价,结果显示,4株菌均... 详细信息

针对前期从糯米酒中分离得到的4株抗逆性强且产蛋白酶特性优良的贝莱斯芽孢杆菌,为充分开发其使用价值,该文对这4株贝莱斯芽孢杆菌分别从耐药性检测、耐药质粒检测、溶血实验、毒力基因PCR检测4个方面展开安全性评价,结果显示,4株菌均对庆大霉素、卡那霉素、链霉素、红霉素、氯霉素、万古霉素敏感;菌株B1、B7、B8对四环素中度敏感,菌株B2对四环素耐药。在耐药质粒检测中,对四环素不敏感的B2中不存在耐药质粒,不具备耐药性通过质粒转移的可能性。在溶血实验中,4株菌皆不溶血。在毒力基因PCR检测中,除菌株B2、B7以外,菌株菌株B1、B8皆检测出携带有溶血性肠毒素hblA基因,但并未检测出携带有编码溶血性肠毒素其他组分的hblC和hblD基因,无法产生溶血素;除菌株B2以外,菌株B1、B7、B8皆检测出携带有非溶血性肠毒素nheC基因,但并未检测出携带编码非溶血性肠毒素其他组分的nheA和nheB基因,无法对蛋白起到抑制作用;4株菌都不具备产生肠毒素和呕吐毒素的可能性。综上,4株菌在耐药性检测、耐药质粒检测、溶血实验、毒力基因PCR检测4个方面皆表现出了良好的安全性,为后续此菌株资源的开发打下坚实的应用基础。

关键词：贝莱斯芽孢杆菌糯米酒安全性耐药性溶血性毒力基因

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酱油渣源副干酪乳杆菌体外安全性评价

食品与发酵工业 2022年第11期48卷 80-86页

作者：魏梓晴詹紫瑶王阿利于茜雅张沛黄桂东钟先锋佛山科学技术学院食品科学与工程学院广东佛山528231 广东省传统发酵食品工程技术研究中心广东佛山528231 广东省食品流通安全控制工程技术研究中心广东佛山528231 佛山市酿造工程技术研究中心广东佛山528231 佛山市农业生物制造工程技术研究中心广东佛山528231

部分副干酪乳杆菌存在一定致病性,故食品源副干酪乳杆菌安全性评价仍是值得深入探讨的科学问题。该实验室前期从酱油渣中分离得到6株副干酪乳杆菌,分别为HT31、HT90、HT111、HT155、HT159、HT197,为了开发其使用价值,通过药敏试验、质... 详细信息

部分副干酪乳杆菌存在一定致病性,故食品源副干酪乳杆菌安全性评价仍是值得深入探讨的科学问题。该实验室前期从酱油渣中分离得到6株副干酪乳杆菌,分别为HT31、HT90、HT111、HT155、HT159、HT197,为了开发其使用价值,通过药敏试验、质粒提取实验、溶血实验、吲哚实验和氨基酸脱羧酶实验对其安全性展开评价。结果表明,在耐药性研究中,6株菌均对庆大霉素、复方新诺明呈现抗性,且均不含有质粒;5株菌(HT31、HT90、HT155、HT159、HT197)对青霉素、头孢噻吩、红霉素、氯霉素敏感,对环丙沙星中度耐药,HT111对青霉素、头孢噻吩、红霉素、氯霉素、环丙沙星敏感,说明庆大霉素、复方新诺明对6株菌的抑制效果较强,其他5种抗生素对6株菌的抑制效果较弱。在有害代谢产物研究中,6株菌均不产生精胺、尸胺、腐胺及色氨酸酶;HT197为β-溶血,HT31、HT90、HT111、HT155、HT159为α-溶血,其中HT31与HT111为轻微溶血。综上,HT197的安全性相对较低,不能作为益生及发酵菌株;HT31、HT90、HT111、HT155、HT159在耐药性检测、产有害代谢物方面相对安全,均没有出现β-溶血,由此可得出这5株副干酪乳杆菌具有良好的体外安全性,为其作为发酵剂应用于食品、解决酱油渣资源浪费问题提供科学依据。

关键词：副干酪乳杆菌安全性酱油渣耐药性有害代谢产物