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非复制型痘苗病毒NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L的构建及免疫效果评价

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第2期38卷 181-187页

作者：任皎袁航赵莉豆亚美刘士元孟昕田厚文王文玲谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的对我国非复制型痘苗病毒NTV进行基因改造,以提高其免疫原性。方法通过基于CRISPR-Cas9技术的痘苗病毒同源重组方法,在痘苗病毒F1L基因缺失的同时回插C7L基因,构建NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L。然后将该重组病毒以10^(7) PFU免疫BALB/c小... 详细信息

目的对我国非复制型痘苗病毒NTV进行基因改造,以提高其免疫原性。方法通过基于CRISPR-Cas9技术的痘苗病毒同源重组方法,在痘苗病毒F1L基因缺失的同时回插C7L基因,构建NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L。然后将该重组病毒以10^(7) PFU免疫BALB/c小鼠,采用ELISA和ELISpot方法分别检测修饰株NTV-ΔF1L-C7L诱导产生的体液免疫和细胞免疫水平,并采用噬斑减少中和实验测定中和抗体水平。结果经PCR和western blot鉴定证明构建的NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L的F1L基因缺失,同时C7L基因回插在该区域,且C7L基因能正常表达,说明重组病毒构建正确。NTV-ΔF1L-C7L免疫小鼠后,ELISA结果表明重组病毒NTV-ΔF1L-C7L诱导产生的IgG抗体水平高于NTV;ELISpot结果亦能够表明该重组病毒能够诱导产生水平更高的IFN-γ;噬斑减少中和实验结果表明,该重组病毒比NTV能够诱导产生水平更高的中和抗体。结论正确构建了NTV基因修饰株NTV-ΔF1L-C7L,相比于NTV,其能诱导更强的体液免疫和细胞免疫,为我国天花或猴痘疫苗的换代产品研发提供参考数据。

关键词：痘苗病毒重组病毒免疫原性

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痘苗病毒天坛株F1L区高效重组方法的建立

病毒学报 2022年第4期38卷 791-798页

作者：袁航任皎赵莉豆亚美田厚文王文玲谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

痘苗病毒是一种在细胞质中复制的DNA病毒,曾作为天花疫苗在消除天花的过程中起着重要作用。近年来,随着分子生物学的发展,痘苗病毒作为基因表达载体,被广泛应用于疫苗研发、肿瘤治疗等不同方面。研究者们通过自然选择或基因工程技术减... 详细信息

痘苗病毒是一种在细胞质中复制的DNA病毒,曾作为天花疫苗在消除天花的过程中起着重要作用。近年来,随着分子生物学的发展,痘苗病毒作为基因表达载体,被广泛应用于疫苗研发、肿瘤治疗等不同方面。研究者们通过自然选择或基因工程技术减毒获得了复制缺陷型痘苗病毒,除了国际上广泛使用的MVA和NYVAC以外,国内还有非复制型痘苗病毒天坛株(NTV)。由于NTV缺失了多种宿主范围基因,导致其免疫原性低下,因此仍须对其进行基因改造以获得更好的疫苗载体。目前改造方法主要是同源重组,但是传统同源重组方法的重组率很低,限制了痘苗病毒载体疫苗载体的研发。近年来随着CRISPR/Cas9技术的发展,使得建立基于CRISPR/Cas9的高效重组体系成为可能。痘苗病毒目前的研究热点主要集中在抗凋亡基因上。有实验表明,抗凋亡基因F1L的缺失在不影响痘苗病毒的复制能力的同时,还降低了毒力,改善了CD8+T细胞免疫反应水平,提高了作为疫苗载体的安全性。这些发现表明该基因的缺失是优化痘苗病毒的有效策略之一。本研究设计了痘苗病毒F1L区重组质粒,通过运用CRISPR/Cas9技术,对TTV的F1L基因进行缺失重组。经重组病毒的噬斑纯化与PCR、Western Blot验证后,证明了该重组系统的有效性与正确性。我们建立了痘苗病毒F1L区高效重组技术方法并筛选出最佳的gRNA。这为后续NTV的改造提供了更多基因靶点选择。

关键词：痘苗病毒 CRISPR/Cas9 F1L 病毒载体

3个非复制型痘苗病毒基因修饰株细胞生物学特性及小鼠体内毒力比较

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中华实验和临床病毒学杂志 2023年第2期37卷 146-151页

作者：豆亚美任皎赵莉袁航孟昕田厚文王文玲谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室北京102206 北京生物制品研究所有限责任公司北京101100

目的通过对三个非复制型痘苗病毒修饰株的细胞生物学特性及小鼠体内毒力对比研究,为天花/猴痘疫苗替代产品的研制提供参考依据。方法在BHK-21/CEF中对复制型痘苗病毒天坛株(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)和复制缺陷型痘苗天坛株(n... 详细信息

目的通过对三个非复制型痘苗病毒修饰株的细胞生物学特性及小鼠体内毒力对比研究,为天花/猴痘疫苗替代产品的研制提供参考依据。方法在BHK-21/CEF中对复制型痘苗病毒天坛株(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)和复制缺陷型痘苗天坛株(non-replicating Tiantan Vaccinia virus strain,NTV)及其修饰株NTV-C7L、NTV-△F1L-C7L、NTV-K1L进行扩增纯化及Western blot鉴定后,采用免疫噬斑实验对各病毒株在细胞中的毒力和扩散能力进行评价;通过复制动力学曲线比较各毒株之间的复制差异,采用小鼠滴鼻实验进行体重变化观察,比较病毒的毒力水平。结果Western blot结果证明扩增纯化的痘苗病毒各毒株均正确。免疫噬斑及复制动力学曲线表明三株NTV基因修饰株在CEF中的复制能力与NTV相近;在Vero细胞间的扩散能力和复制能力均有所提高,但复制倍数都小于100倍;在MRC-5中复制水平与NTV相比得到明显增强,其中NTV-C7L的复制倍数达20000倍以上;小鼠体内毒力结果显示三个NTV基因修饰株与NTV相比体重变化无统计学意义。结论三个NTV基因修饰株在人源性细胞MRC-5中恢复了复制能力,但在小鼠中的毒力与NTV相近,具备了作为天花/猴痘疫苗换代产品候选株的初步条件。

关键词：痘苗病毒复制缺陷天花/猴痘毒力疫苗

非复制型痘苗病毒天坛株NTV诱发早期细胞凋亡

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中华实验和临床病毒学杂志 2022年第2期36卷 136-140页

作者：袁航吴雅彬任皎赵莉豆亚美田厚文王文玲谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室北京102206 恺佧生物科技有限公司上海201114

目的对非复制型痘苗病毒NTV感染人源细胞后的细胞形态变化及相关分子机制进行研究,为NTV载体的进一步优化改造和应用提供科学依据。方法用复制型痘苗病毒天坛株VTT和非复制型痘苗病毒NTV感染HeLa细胞,观察细胞的形态学变化。然后收获细... 详细信息

目的对非复制型痘苗病毒NTV感染人源细胞后的细胞形态变化及相关分子机制进行研究,为NTV载体的进一步优化改造和应用提供科学依据。方法用复制型痘苗病毒天坛株VTT和非复制型痘苗病毒NTV感染HeLa细胞,观察细胞的形态学变化。然后收获细胞,电泳检测rRNA断裂水平和Western blot检测凋亡相关分子信号,初步确定NTV诱导的早期细胞凋亡的通路与机制。结果在细胞形态学方面观察到被NTV感染的细胞,与VTT相比,能够在较早时间出现细胞变圆、皱缩等病变现象。DAPI染色观察到被NTV感染的细胞核在早期会出现染色质高度凝聚、边缘化的现象并随着时间的增加而崩解。rRNA断裂水平检测结果说明被NTV感染16 h后的rRNA已发生断裂和降解。Western blot检测结果说明在NTV感染HeLa细胞中能够检测到比正常细胞中更强的PARP、caspase-3及caspasee-9的分子信号,但caspasee-8并没有明显增加,而VTT的结果则与NTV相反。结论NTV在早期能够诱导细胞凋亡,为痘苗病毒载体改造提供理论依据。

关键词：痘苗病毒复制缺陷细胞凋亡病毒载体

公立小学课后服务政策执行问题与对策研究 ——以衡水市Y县六所小学为例

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公立小学课后服务政策执行问题与对策研究 ——以衡水市Y县六所小...

作者：靳亚美河北经贸大学

学位级别：硕士

随着“三点半难题”逐渐成为家庭和社会关注的焦点,国家相继推出了旨在解决此问题的指导性文件,强调了开展学校课后服务的重要性,并设定了更高的服务质量目标。在追求课后服务全面覆盖与提升服务质量的过程中,探索有效的课后服务实施方... 详细信息

随着“三点半难题”逐渐成为家庭和社会关注的焦点,国家相继推出了旨在解决此问题的指导性文件,强调了开展学校课后服务的重要性,并设定了更高的服务质量目标。在追求课后服务全面覆盖与提升服务质量的过程中,探索有效的课后服务实施方式和完善相关理论框架变得尤为关键。本项研究立足于教育公平、协同治理和利益相关者等理论,选取了衡水市Y县的六所公立小学作为研究对象,通过对教师、学生、家长等相关主体进行问卷调查及访谈,从内容、师资、经费等方面了解当前执行情况,发现学校进行了积极探索,并积累了一定经验,解决了家长接送难题、缓解了家长与学生作业的矛盾,减轻了经济负担。但是仍存在许多亟需解决的问题:政策细则制定模糊、师资问题突出、服务内容和形式的单一、社会机构缺少联动、政策保障机制不完善等问题。针对这些现实存在的问题,在总结有关经验基础上,结合利益相关理论与协同治理理论,对造成问题的成因,从政府、学校、家庭、社会方面进行分析提出相应的建议。要促进公立小学课后工作的有效开展,应建立起以政府为主导、学校、家庭和社会共同参与的合作体系。一是政府完善制度的顶层设计,健全课后服务制度体系,包括完善信息反馈机制、建立科学评价体系、优化教师激励制度、健全监督考核办法等;二是学校与教师提升执行能力,强化政策全面落实,包括优化学校教师队伍、善弹性服务制度、丰富课后服务内容、强化课后服务意识等;三是鼓励家庭与学生积极参与,包括强化课后服务认知、提高家长参与意识、改进学生学习习惯;四是鼓励社会主动作为,社会多位一体化协同治理,包括引导社区参与、营造良好执行环境、强化课后服务监督。通过政府、学校、家庭、社会多元合作,保障小学课后服务的规范性、针对性、有效性和全面性,有效促进课后服务制度的高质量发展。

关键词：公立小学课后服务政策政策执行

水滑石光催化剂结构调控用于二氧化碳还原的研究进展

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化工进展 2024年第7期43卷 3891-3909页

作者：罗丛佳豆义波卫敏北京化工大学化学学院化工资源有效利用国家重点实验室北京100029

光催化转化二氧化碳(CO_(2))为太阳能燃料或化学品被认为是缓解能源危机和温室效应的有效途径之一。为提高CO_(2)光还原产物的活性、选择性,光催化剂的结构设计和性能调控至关重要。在众多光催化剂中,二维层状双金属氢氧化物(layered do... 详细信息

光催化转化二氧化碳(CO_(2))为太阳能燃料或化学品被认为是缓解能源危机和温室效应的有效途径之一。为提高CO_(2)光还原产物的活性、选择性,光催化剂的结构设计和性能调控至关重要。在众多光催化剂中,二维层状双金属氢氧化物(layered double hydroxides,LDHs)又称水滑石,因其层板阳离子组成及比例可调变、层间客体阴离子可交换等特性在光催化领域展现出广阔的应用前景。本文综述了LDHs结构调控策略用于强化光催化CO_(2)还原的研究进展。首先介绍了光催化CO_(2)还原的机理和LDHs光催化材料的结构特征;然后重点总结了基于缺陷工程、形貌尺寸调控和异质结构筑等策略调控LDHs光催化剂的电子结构及几何结构,优化后的LDHs通过增强光吸收、电子空穴分离迁移能力及表面还原反应能力,尤其是通过调控活性位结构降低反应势垒,实现了性能强化;最后,基于LDHs光催化剂在CO_(2)还原领域存在的挑战,包括LDHs的设计构筑、机理探索以及多碳产物的调控提出了相关解决思路和策略。

关键词：二氧化碳还原催化剂光化学

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新时代领导干部政治能力提升的时代内涵及实践进路

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学校党建与思想教育 2024年第15期 93-96页

作者：李亚美重庆工业职业技术学院马克思主义学院重庆401120

政治能力是党的领导干部的第一能力,关系着领导干部能否贯彻执行党的路线、方针和政策,也关系着党和国家事业的健康发展。深刻理解领导干部政治能力在新时代的深层涵义,把握其时代要求、分析其时代特征、明确其时代价值,并在此基础上探... 详细信息

政治能力是党的领导干部的第一能力,关系着领导干部能否贯彻执行党的路线、方针和政策,也关系着党和国家事业的健康发展。深刻理解领导干部政治能力在新时代的深层涵义,把握其时代要求、分析其时代特征、明确其时代价值,并在此基础上探索领导干部政治能力提升的实践路径,有助于建设一支“政治过硬”的高素质领导干部队伍,为我国高质量发展提供坚实的人才保障。

关键词：领导干部政治能力时代内涵实践进路

PEMFC催化层耦合气体电荷传输过程的介观模拟

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化工学报 2024年

作者：豆少军郝亮上海理工大学能源与动力工程学院动力工程多相流动与传热上海市重点实验室

重建了质子交换膜燃料电池（PEMFC）催化层的多孔结构，并通过格子玻尔兹曼Shan-Chen模型模拟了催化层中水的毛细冷凝过程，分析了运行湿度和液态水分布对质子传导、电化学活性面积和气体传输的影响规律。基于开发的耦合阴极氧传输、质... 详细信息

重建了质子交换膜燃料电池（PEMFC）催化层的多孔结构，并通过格子玻尔兹曼Shan-Chen模型模拟了催化层中水的毛细冷凝过程，分析了运行湿度和液态水分布对质子传导、电化学活性面积和气体传输的影响规律。基于开发的耦合阴极氧传输、质子传导及电化学反应的介尺度电化学模型，解析了不同操作条件下催化层中的物理量分布并获得了催化层极化曲线，进一步研究确定了催化层运行的最佳相对湿度为95%-98%。

关键词：燃料电池催化层介尺度数值模拟液态水

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介电解冻技术对肉类原料品质影响的研究进展

食品科学 2024年第8期45卷 283-291页

作者：张孝金亚美巫宇航姚黄兵杨哪徐学明江南大学食品学院江苏无锡214122 江南大学食品科学与资源挖掘全国重点实验室江苏无锡214122 江南大学食品安全与营养协同创新中心江苏无锡214122

解冻是冷冻肉制品加工的重要单元操作,其应用效果关注的重点包括解冻时间、样品温度均匀性、汁液流失率、蒸煮损耗、新鲜度、质构特征和口感变化差异等。因此,选择适宜的技术及工艺参数最终能得到解冻品质俱佳的肉类原料产品。传统解冻... 详细信息

解冻是冷冻肉制品加工的重要单元操作,其应用效果关注的重点包括解冻时间、样品温度均匀性、汁液流失率、蒸煮损耗、新鲜度、质构特征和口感变化差异等。因此,选择适宜的技术及工艺参数最终能得到解冻品质俱佳的肉类原料产品。传统解冻技术包括空气解冻、浸泡解冻等,新型的物理场解冻包括微波解冻、射频解冻、远红外解冻和欧姆解冻等。以高频电磁波为激励源的微波和射频介电解冻方式因其操作时间短、高效等优点逐渐在冷冻肉制品加工领域得到应用。本文综述了介电解冻技术,概述其关键影响因素,探讨了介电解冻过程中肉类原料品质的变化,并对介电解冻过程中还存在的共同问题以及未来研究方向提出了新的思考。

关键词：介电特性射频解冻微波解冻肉类原料影响因素

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