非复制型痘苗病毒NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L的构建及免疫效果评价

作     者：任皎 袁航 赵莉 豆亚美 刘士元 孟昕 田厚文 王文玲 谭文杰 Ren Jiao;Yuan Hang;Zhao Li;Dou Yamei;Liu Shiyuan;Meng Xin;Tian Houwen;Wang Wenling;Tan Wenjie

作者机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 

出 版 物：《中华实验和临床病毒学杂志》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology)

年 卷 期：2024年第38卷第2期

页      面：181-187页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：新冠与流感等大流行风险病原体多肽疫苗的研制(2022YFC2304100) 

主　　题：痘苗病毒 重组病毒 免疫原性 

摘      要：目的对我国非复制型痘苗病毒NTV进行基因改造,以提高其免疫原性。方法通过基于CRISPR-Cas9技术的痘苗病毒同源重组方法,在痘苗病毒F1L基因缺失的同时回插C7L基因,构建NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L。然后将该重组病毒以10^(7) PFU免疫BALB/c小鼠,采用ELISA和ELISpot方法分别检测修饰株NTV-ΔF1L-C7L诱导产生的体液免疫和细胞免疫水平,并采用噬斑减少中和实验测定中和抗体水平。结果经PCR和western blot鉴定证明构建的NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L的F1L基因缺失,同时C7L基因回插在该区域,且C7L基因能正常表达,说明重组病毒构建正确。NTV-ΔF1L-C7L免疫小鼠后,ELISA结果表明重组病毒NTV-ΔF1L-C7L诱导产生的IgG抗体水平高于NTV;ELISpot结果亦能够表明该重组病毒能够诱导产生水平更高的IFN-γ;噬斑减少中和实验结果表明,该重组病毒比NTV能够诱导产生水平更高的中和抗体。结论正确构建了NTV基因修饰株NTV-ΔF1L-C7L,相比于NTV,其能诱导更强的体液免疫和细胞免疫,为我国天花或猴痘疫苗的换代产品研发提供参考数据。