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嗜热蛋白酶PH1704别构中心量子化学计算与突变体动力学

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高等学校化学学报 2014年第1期35卷 146-153页

作者：詹冬玲高楠韩葳葳冯雁吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室长春130012 吉林农业大学食品科学与工程学院长春130118 中国科学院长春应用化学研究所长春130022

通过量子化学计算，确定嗜热菌PyrococcushorikoshiiOT3的PHl704蛋白酶别构位点的关键残基为Argll3，Tyrl20和Asnl29．其中，Argll3及Asnl29与别构抑制剂结合，参与别构调控．Tyrl20残基位于亚基交界面附近，并与亲核残基Cys100之间以... 详细信息

通过量子化学计算，确定嗜热菌PyrococcushorikoshiiOT3的PHl704蛋白酶别构位点的关键残基为Argll3，Tyrl20和Asnl29．其中，Argll3及Asnl29与别构抑制剂结合，参与别构调控．Tyrl20残基位于亚基交界面附近，并与亲核残基Cys100之间以氢键相连，可通过影响亚基聚合来影响酶的亲核催化．DJ-1超家族的4种构建蛋白的结构显示，120位点位于亚基交界面处，影响亚基的聚合，进而影响蛋白酶的活力，并间接参与别构调控．分子生物学实验显示，突变体R113T／Y120P／N129D的kcat/km（L·μmol^-1·min^-1）值是野生型kcat/km。值的6倍，h系数由野生型的0．86转变为1．3，负协同效应消失．113和129位点处阴离子别构剂脱离，从而破坏113，120和129位点间的封闭环结构，使AC交界面胡螺旋（124～129，524—529）间聚合度增强；120位点残基由rryr转变为Pro，与Cys100间氢键断裂，亲核进攻的阻力减小，从而使酶活力提高，别构负调控消失．

关键词：嗜热蛋白酶量子化学计算别构中心定点突变

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浅析中国奶牛养殖发展趋势

吉林畜牧兽医 2013年第8期34卷 20-20,22页

作者：詹冬玲吉林农业大学食品工程与科技学院吉林长春130118

中国的牛奶价格居世界奶价中游，奶牛饲养劳动力成本居世界中游，奶牛的平均产量居世界中上游，牛奶的人均消费水平不及发达国家的十分之一，而白领阶层已经突破3亿，成为世界上最具消费潜力的国家。中国牛奶消费即将进入爆炸式增长期... 详细信息

中国的牛奶价格居世界奶价中游，奶牛饲养劳动力成本居世界中游，奶牛的平均产量居世界中上游，牛奶的人均消费水平不及发达国家的十分之一，而白领阶层已经突破3亿，成为世界上最具消费潜力的国家。中国牛奶消费即将进入爆炸式增长期，奶业、奶牛养殖业也必将进入新的增长阶段，但绝不仅仅是数量的增长，更是质鞋的。可以说中国的养牛人是世界上最辛苦的人群之一，起早贪黑，风险大，不赚钱。坊问传“对谁有仇，劝谁养牛”。

关键词：奶牛养殖业中国发展趋势消费水平劳动力成本奶牛饲养发达国家白领阶层

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杏仁中苦杏仁苷的提取分离纯化

粮油加工 2010年第10期 132-135页

作者：王秀娟王春雷詹冬玲吉林农业大学食品科学与工程学院

本试验采用水提取法、乙醇提取法对苦杏仁苷进行提取,并对两种提取方法进行比较。结果表明:水提取法比乙醇提取法提取率高,但乙醇提取法在纯化过程中更方便。水提取法的最佳工艺参数为:料液比1∶10的沸水直接提取,提取时间40min。乙醇... 详细信息

本试验采用水提取法、乙醇提取法对苦杏仁苷进行提取,并对两种提取方法进行比较。结果表明:水提取法比乙醇提取法提取率高,但乙醇提取法在纯化过程中更方便。水提取法的最佳工艺参数为:料液比1∶10的沸水直接提取,提取时间40min。乙醇提取法的最佳工艺参数为∶乙醇浓度60%、料液比1∶6、提取温度85℃、提取时间50min。用高效液相色谱法对水提取物和乙醇提取物进行了检测,测定了两种提取物中存在苦杏仁苷。

关键词：苦杏仁苷提取高效液相色谱

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牛乳中主要过敏原组分的分离纯化

粮油加工 2010年第7期 148-151页

作者：王秀娟郑磊詹冬玲吉林农业大学食品科学与工程学院

本文采用硫酸铵分级沉淀法和等电点沉淀法来提取牛乳中的主要过敏原酪蛋白组分,通过SDS-聚丙烯酰胺电泳检测发现,酪蛋白分离最佳条件是:pH值4.6、温度55℃。

关键词：牛奶酪蛋白分离纯化

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大豆对母猪和仔猪生产性能及免疫反应的影响

大豆对母猪和仔猪生产性能及免疫反应的影响

作者：詹冬玲吉林农业大学

学位级别：硕士

本试验研究了大豆对母猪和仔猪生产性能和免疫反应的影响。12头母猪随机分成3组，每组4头。母猪在整个妊娠期和哺乳期，第Ⅰ、Ⅱ组饲喂SBM料（含生大豆），第Ⅲ组饲喂CGM料。仔猪从7日龄起补饲，28日龄断奶，试验至35日龄结束。饲喂SBM... 详细信息

本试验研究了大豆对母猪和仔猪生产性能和免疫反应的影响。12头母猪随机分成3组，每组4头。母猪在整个妊娠期和哺乳期，第Ⅰ、Ⅱ组饲喂SBM料（含生大豆），第Ⅲ组饲喂CGM料。仔猪从7日龄起补饲，28日龄断奶，试验至35日龄结束。饲喂SBM料的第Ⅰ、Ⅱ两组仔猪分别饲喂RS（生大豆）料和HS（蒸汽处理大豆）料，饲喂CGM料的第Ⅲ组的仔猪饲喂MP料（乳蛋白）。在试验期1、7、28、35日测仔猪体重和饲料消耗量，计算日增重和饲料转化率;在试验的1、7、28、35日进行抽血，以检测血清中大豆致敏因子的抗体滴度;在试验的第35天进行皮肤试敏试验，以检测仔猪体内的免疫反应状况。本试验采用SPSS统计软件进行数理统计分析。结果：在母猪的繁殖性状上，RS、HS、MP组的窝产仔数相近，差异不显著（P＞0.05）;从仔猪的初生重上，RS组的初生重高于HS组和MP组（P＜0.05），而HS组和MP组初生重相近（P＞0.05）;从20日龄窝重上看，MP组最高，HS组居中，RS组最低，各组间差异不显著（P＞0.05）。在日增重上，各组仔猪1周内的日增重相近，各组差异不显著（P＞0.05）;2～4周内日增重RS组明显比MP组和HS组低，差异显著（P＜0.01），而MP组和HS组差异显著（P＜0.05）;第5周，MP组和RS、MP组日增重差异极显著（P＜0.01），而HS与MP组差异显著（P＜0.05）。在饲料转化率上，RS组和MP组的差异显著（P＜0.05），而HS组和它们的差异则不显著（P＞0.05）。在体重上，7日龄时RS组和HS组间差异极显著（P＜0.01），而MP组体重与这两组差异不显著（P＞0.05）;28、35日龄时RS组体重显著低于MP、HS组（P＜0.01），MP、HS组差异不显著（P＞0.05）。在抗体滴度上，整个试验期内，仔猪体内的抗体滴度的变化有规律性。对血清中大豆球蛋白的抗体滴度，初生时，各组差异不显著（P＞0.05）;7日龄肘，MP组与RS、HS组差异显著（P＜0.05），而RS、HS两组差异不显著;28、35日龄时，各组差异极显著（P＜0.01）。血清中，β-伴大豆球蛋白的抗体滴度也遵循此规律。仔猪的抗体滴度，从初生至35日龄呈现上升趋势。在皮肛试敏试验上，各组间的红斑面积差异不显著（P＞0．05）。注射大豆球蛋白后，各组问皮诏厚度的差异极显著o＜0．01＼注射p－伴大豆球蛋白后，也如此。从腹泻发生频率上看，补饲期门－28日龄)，各组间差异极显著（P＜O刀1），＊S＞＊S＞＊P;断奶后一周内（28－35日龄），＊S组明昆高于MP组（P＜001），＊S组居中， HS组与 MP组间差异显著（P＜0．05）。各组间仔猪死亡率随时间而发生变化。7R龄内，各组死亡率差异不显著（P＞0刀引;补饲期门～兆R龄），MP组与RS组间差异显著（P＜0．05），HS组与这两组问差异不兄著（P＞0仍）：断奶后一周内（指－35 H龄），各组死亡率差异个席著小＞0刀引。在整个哺乳期，MP、RS组与HS组问差异不显著(P＞0．O，，而MP组和RS组向差异极显著(P＜0刀1＼整个试验期内，＊S组与＊S、＊P组问差异极寝著(P＜0刀卜，而 HS组高于 MP组（P＞0．05）。结论：大豆对母猪和仔猪的生产性能和免疫反应均有影响。母猪妊娠期饲喂生大豆饲粮对产仔数、初生重和泌乳力无大影响。蒸汽高压处理过的大豆中的致熟因于并未灭活，仍对什猪产生作用;大豆球蛋白的抗体滴度和皮稻厚度都比p－伴大豆球蛋白高，对仔猪的免疫反应影响较大：仔猪的R增重与抗体滴度和皮褡厚度呈负相关，抗体滴度与皮诏厚度呈干相关。

关键词：大豆母猪仔猪生产性能免疫反应

北京棒杆菌天冬氨酸激酶突变体R169H的构建及酶学性质表征

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微生物学报 2014年第6期54卷 663-669页

作者：李慧颖朱运明闵伟红詹冬玲任军吉林农业大学食品科学与工程学院小麦和玉米深加工国家工程实验室吉林长春130118

【目的】提高北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)中天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)活力。【方法】利用定点突变技术对AK基因进行突变,并将突变体转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中异源表达。重组菌经超声破碎后、利用镍柱对AK... 详细信息

【目的】提高北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)中天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)活力。【方法】利用定点突变技术对AK基因进行突变,并将突变体转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中异源表达。重组菌经超声破碎后、利用镍柱对AK进行纯化,并经SDS-PAGE和Western blot验证。通过检测酶活力比较突变体和野生型动力学变化并研究突变体和野生型的部分酶学性质。【结果】成功构建突变体R169H。经验证知,AK分子量为48kDa。突变体R169H的Vmax为226.3 U/mg·s-1,较野生型提高2.3倍。最适反应温度为26℃,与野生型经验值相同;最适反应pH为9.0,较野生型经验值8.0有所提高;在最适温度和pH值下的半衰期为5.5 h,比野生型的4h稳定性要好;代谢产物赖氨酸、苏氨酸和蛋氨酸在低浓度时对AK均具有激活作用。【结论】突变体中R169与E92间氢键消失,能够影响亚基间聚合度,降低酶对底物的亲和力,减弱代谢产物对AK的反馈抑制作用,从而使R169H中AK的Vmax提高2.3倍。

关键词：北京棒杆菌天冬氨酸激酶突变酶学性质

麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶D246A异源表达及性质表征

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吉林大学学报（理学版） 2024年第3期62卷 742-749页

作者：高雨晴董钢印张洪瑞马占山方丽詹冬玲吉林农业大学食品科学与工程学院长春130118 吉林农业大学生物质活性成分研究与高附加值农产品实验室长春130118

以大型真菌灵芝中的麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶(MGAM)为研究对象,采用同源序列比对、同源模建、底物对接和定点突变等方法成功构建酶活力显著降低的突变体D246A.酶学性质表征结果表明:最适反应温度由野生型(wild type,WT)的65℃减少至60℃,... 详细信息

以大型真菌灵芝中的麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶(MGAM)为研究对象,采用同源序列比对、同源模建、底物对接和定点突变等方法成功构建酶活力显著降低的突变体D246A.酶学性质表征结果表明:最适反应温度由野生型(wild type,WT)的65℃减少至60℃,突变体耐热能力下降;最适pH值由WT的6.0升高至7.0,有利于工程菌生长;半衰期由WT的2.0 h下降至1.5 h,酶稳定性降低.酶动力学结果表明:突变体D246A酶动力学曲线符合Michaelis方程,与WT相比,K_(m)值变大,表明酶与底物亲和力下降;V_(max)约降低至原来的1/4.

关键词：定点突变异源表达性质表征麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶

Spinigerin α抗菌肽的分离纯化及其活性研究

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经济动物学报 2013年第3期17卷 165-168+173页

作者：宋玉涛詹冬玲陈晓平吉林农业大学食品科学与工程学院

Spinigerinα抗菌肽是一种源于白蚁的线性抗菌肽,包括25个氨基酸,不含半胱氨酸,呈α-螺旋结构。本研究采用凝胶加热-层析法,对Spinigerinα抗菌肽样液通过水浴加热至100℃保持20;0 min,除去不耐热的部分蛋白,经葡聚糖凝胶SephadexG-25... 详细信息

Spinigerinα抗菌肽是一种源于白蚁的线性抗菌肽,包括25个氨基酸,不含半胱氨酸,呈α-螺旋结构。本研究采用凝胶加热-层析法,对Spinigerinα抗菌肽样液通过水浴加热至100℃保持20;0 min,除去不耐热的部分蛋白,经葡聚糖凝胶SephadexG-25脱盐层析分离得到Spinigerinα抗菌肽提纯物。根据SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱绘制分子质量标准曲线,计算Spinigerinα抗菌肽的分子质量。试验结果表明:SDS-PAGE电泳表现为单一条带,其分子质量为2.74 ku;Spinigerinα抗菌肽对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,最小抑菌浓度分别为0.5 mg/mL、0.3 mg/mL、0.2 mg/mL。

关键词： Spinigerin α 抗菌肽分离纯化抑菌活性

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角鲨烯合成酶抑制剂的高通量虚拟筛选

吉林大学学报（理学版） 2012年第2期50卷 361-364页

作者：詹冬玲韩葳葳刘景圣吉林农业大学食品科学与工程学院长春130118 吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室长春130012

以SQS抑制剂CP-320473为先导物,在60%结构相似性的基础上,先通过AutoDockVina软件进行分子对接,再选取结合能量最低的新化合物进行分子对接研究.结果表明:zinc_8442249比先导化合物CP-320473的抑制效果更好;SQS活性位点的Lys52通过与氢... 详细信息

以SQS抑制剂CP-320473为先导物,在60%结构相似性的基础上,先通过AutoDockVina软件进行分子对接,再选取结合能量最低的新化合物进行分子对接研究.结果表明:zinc_8442249比先导化合物CP-320473的抑制效果更好;SQS活性位点的Lys52通过与氢键与抑制剂结合,在抑制过程中具有重要作用.

关键词：角鲨烯合成酶高通量虚拟筛选分子对接抑制剂