麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶D246A异源表达及性质表征

作     者：高雨晴 董钢印 张洪瑞 马占山 方丽 詹冬玲 GAO Yuqing;DONG Gangyin;ZHANG Hongrui;MA Zhanshan;FANG Li;ZHAN Dongling

作者机构：吉林农业大学食品科学与工程学院长春130118 吉林农业大学生物质活性成分研究与高附加值农产品实验室长春130118 

出 版 物：《吉林大学学报（理学版）》 (Journal of Jilin University:Science Edition)

年 卷 期：2024年第62卷第3期

页      面：742-749页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：吉林省自然科学基金(批准号:20230101262JC). 

主　　题：定点突变 异源表达 性质表征 麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶 

摘      要：以大型真菌灵芝中的麦芽糖酶-葡萄糖淀粉酶(MGAM)为研究对象,采用同源序列比对、同源模建、底物对接和定点突变等方法成功构建酶活力显著降低的突变体D246A.酶学性质表征结果表明:最适反应温度由野生型(wild type,WT)的65℃减少至60℃,突变体耐热能力下降;最适pH值由WT的6.0升高至7.0,有利于工程菌生长;半衰期由WT的2.0 h下降至1.5 h,酶稳定性降低.酶动力学结果表明:突变体D246A酶动力学曲线符合Michaelis方程,与WT相比,K_(m)值变大,表明酶与底物亲和力下降;V_(max)约降低至原来的1/4.