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不同蛋白酶突变子对鲢鱼蛋白酶解及产物抗氧化性的影响

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现代食品科技 2012年第10期28卷 1336-1339页

作者：田宝玉郑汉坤黄薇蓝灿华黄建忠蔡婉玲郭菁福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院福建福州350108

本实验采用芽孢杆菌丝氨酸蛋白酶及其突变产物对淡水鱼类白鲢鱼肉蛋白进行酶解,对比分析了酶的不同突变产物对水解过程水解度的影响及其酶解产物的抗氧化活性变化。大部分蛋白酶在水解反应前40 min内反应速率较高,水解度迅速增加,40min^... 详细信息

本实验采用芽孢杆菌丝氨酸蛋白酶及其突变产物对淡水鱼类白鲢鱼肉蛋白进行酶解,对比分析了酶的不同突变产物对水解过程水解度的影响及其酶解产物的抗氧化活性变化。大部分蛋白酶在水解反应前40 min内反应速率较高,水解度迅速增加,40min^120 min之间水解曲线变得平缓甚至下降。其中细菌丝氨酸蛋白酶突变子239对白鲢鱼肉蛋白的水解能力最强,其2 h水解产物水解度最大,为11.51%;突变蛋白酶33的水解能力最差,最终水解产物的水解度只有3.08%。细菌丝氨酸蛋白酶及其突变酶的酶解产物均具有较高的抗氧化性,其中蛋白酶突变子166的酶解产物抗氧化活性最强,经测定其DPPH清除能力为91.02%,蛋白酶突变子169的酶解产物抗氧化活性最弱,DPPH清除能力为61.41%。结果表明,与三联体催化活性中心相关的突变对丝氨酸蛋白酶的水解能力和水产品蛋白的水解度影响较大,而酶底物特异性方面的改变则影响酶解产物的抗氧化活性。

关键词：酶工程白鲢鱼蛋白水解度酶解产物抗氧化

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水产品蛋白酶解工艺的正交设计优化

饲料研究 2012年第12期35卷 30-32页

作者：蓝灿华吕晔明黄薇蔡婉玲郭菁黄建忠田宝玉福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院福建省农业科学院中心实验室/福建省精密仪器农业测试重点实验室

试验以草鱼鱼肉蛋白为原料,采用蛋白酶突变株166水解,在单因素试验的基础上,以抗氧化性为考察指标,对反应时间、加酶量、反应pH及反应温度等因素进行正交试验,确定蛋白酶突变株166水解草鱼蛋白获得活性物质的最佳操作条件:酶解时间120 m... 详细信息

试验以草鱼鱼肉蛋白为原料,采用蛋白酶突变株166水解,在单因素试验的基础上,以抗氧化性为考察指标,对反应时间、加酶量、反应pH及反应温度等因素进行正交试验,确定蛋白酶突变株166水解草鱼蛋白获得活性物质的最佳操作条件:酶解时间120 min,酶解温度65℃,pH 7.5,加酶量4 000 U/g,在此条件下,水解产物的抗氧化性可达到52.07%。

关键词：草鱼蛋白蛋白酶解产物抗氧化性单因素试验正交设计

响应面法优化正红菇菌丝体产胞内凝集素培养条件

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福建师范大学学报（自然科学版） 2010年第1期26卷 103-108页

作者：黄维雅刘艳如蓝灿华黄建忠福建师范大学生命科学学院福建福州350108

采用响应面法对液体深层培养的正红菇(Russula vinosa)菌丝体产胞内凝集素的培养条件进行了优化.通过单因子实验确定最适碳源和氮源为淀粉和酵母膏,在此基础上,通过Plackett-Burrman设计对影响其产胞内凝集素的相关因素进行评估并筛选... 详细信息

采用响应面法对液体深层培养的正红菇(Russula vinosa)菌丝体产胞内凝集素的培养条件进行了优化.通过单因子实验确定最适碳源和氮源为淀粉和酵母膏,在此基础上,通过Plackett-Burrman设计对影响其产胞内凝集素的相关因素进行评估并筛选出具有显著效应的淀粉、酵母膏、装液量3个因素,通过最陡爬坡实验及响应面分析法确定了产凝集素的最适条件:ω(淀粉)3.04%,ω(酵母膏)0.3%,ω(KH2PO4)0.2%,ω(MgSO4)0.1%,装液量73mL,转速250r/min,初始pH5,发酵时间5d.在此条件下,菌丝体产胞内凝集素的总活力可达72127.3u,与初始培养条件下的凝集素总活力相比提高了1.88倍.

关键词：正红菇菌丝体凝集素响应面法优化

酿酒酵母adh2和ald6双基因缺失突变株的构建

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微生物学通报 2009年第2期36卷 211-216页

作者：王艳尊雷娟娟江贤章高媛媛李欣蓝灿华陈由强陈如凯黄建忠福建师范大学生命科学学院工业微生物教育部工程研究中心福建福州350108

酿酒酵母乙醇合成代谢过程中,阻断或削弱乙醛至乙酸代谢流不但能增强乙醇合成流,同时还能降低发酵乙酸含量。本研究以乙醇脱氢酶Ⅱ(adh2)基因缺陷型酿酒酵母YS2-Δadh2为出发菌株,应用长侧翼同源两步PCR(LFH-PCR)策略构建乙醛脱氢酶Ⅵ(a... 详细信息

酿酒酵母乙醇合成代谢过程中,阻断或削弱乙醛至乙酸代谢流不但能增强乙醇合成流,同时还能降低发酵乙酸含量。本研究以乙醇脱氢酶Ⅱ(adh2)基因缺陷型酿酒酵母YS2-Δadh2为出发菌株,应用长侧翼同源两步PCR(LFH-PCR)策略构建乙醛脱氢酶Ⅵ(ald6)基因敲除组件,转化酿酒酵母YS2-Δadh2敲除ald6基因,之后转入表达质粒pSH65到阳性克隆中,半乳糖诱导表达Cre重组酶切除Kanr基因筛选标记,最后,传代丢失质粒pSH65获得单倍体ald6基因缺失突变株。利用同样的敲除组件和技术再次敲除其等位基因,最终获得双基因缺失突变株YS2-△adh2-Δald6。发酵实验表明与出发菌株YS2相比,突变株乙酸合成量降低18%,乙醇最高产量提高12.5%。

关键词：酿酒酵母 ald6 adh2 LFH-PCR 基因敲除

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酶解法制备草鱼抗氧化多肽工艺的建立

生物技术 2012年第6期22卷 71-74页

作者：蓝灿华林小文黄薇蔡婉玲郭菁田宝玉福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院福建福州350108

目的:筛选优化合适的可用于水解草鱼蛋白制备活性多肽的蛋白酶制剂及其工艺。方法:选取不同特性来源的商品化蛋白酶制剂与实验室分离的枯草蛋白酶BPN,对比分析它们在水解草鱼蛋白过程中的水解度变化,及其酶解产物的抗氧化活性。结果:大... 详细信息

目的:筛选优化合适的可用于水解草鱼蛋白制备活性多肽的蛋白酶制剂及其工艺。方法:选取不同特性来源的商品化蛋白酶制剂与实验室分离的枯草蛋白酶BPN,对比分析它们在水解草鱼蛋白过程中的水解度变化,及其酶解产物的抗氧化活性。结果:大多数蛋白酶在水解反应最初的60min内,水解度迅速增加,之后2h内曲线变化不大。其中细菌来源的水解蛋白酶水解能力最强,其2h水解产物水解度可达15.17%;木瓜蛋白酶水解产物的抗氧化活性较强,经测定其DPPH清除能力为96.24%。结论:不同特性的蛋白酶水解草鱼蛋白的水解速度和产物的活性成分具有明显差异,总的来说,木瓜蛋白酶在草鱼蛋白加工中制备活性多肽是一个比较理想的选择。

关键词：蛋白酶草鱼酶解工艺多肽抗氧化性

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蛋白酶产生菌的筛选和紫外诱变育种

生物技术 2011年第1期21卷 73-76页

作者：蔡婉玲田宝玉郭菁蓝灿华黄薇黄建忠福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心福建福州350108

目的:筛选水产品加工用蛋白酶产生菌,为酶的的分子改造和水产品加工提供材料基础。方法:通过在富含水产品蛋白的场所的针对性采样,菌落平板筛选结合发酵上清液平板验证以及Folin-酚试剂定量检测确认筛选结果,并通过紫外诱变提高产中性... 详细信息

目的:筛选水产品加工用蛋白酶产生菌,为酶的的分子改造和水产品加工提供材料基础。方法:通过在富含水产品蛋白的场所的针对性采样,菌落平板筛选结合发酵上清液平板验证以及Folin-酚试剂定量检测确认筛选结果,并通过紫外诱变提高产中性蛋白酶菌株的产酶能力。结果:从12份土样中分离187株具有明显蛋白酶活性的单菌落。在挑取的11株透明圈明显的蛋白酶产生菌中,菌株W9在所有菌株中可以稳定产生较高的蛋白酶酶活力,约为1 594U/ml。通过对其进行紫外诱变后,在突变株中筛选得到一株酶活约为1 845U/ml的W9UV突变株,比野生菌株酶活提高了15.6%。结论:突变菌株W9UV可稳定产生较高的蛋白酶酶活力,发酵性能优良。

关键词：筛选蛋白加工中性蛋白酶酶活紫外诱变

蛋白酶底物特异性改变对白鲢鱼肉蛋白酶解效率和产物抗氧化性的影响

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福建农林大学学报（自然科学版） 2013年第3期42卷 323-327页

作者：田宝玉赖丽蓉蔡婉玲黄薇郭菁蓝灿华宋永康福建师范大学生命科学学院/工业微生物教育部工程研究中心福建福州350108 福建省农业科学院中心实验室/福建省精密仪器农业测试重点实验室福建福州350003

通过对比水产品加工蛋白酶及其底物特异性位点突变酶E156S、E156N和E156D对白鲢鱼肉蛋白水解能力及其酶解产物抗氧化性的差异,探讨底物特异性改变对酶的酶解效率和产物活性的影响.结果表明,突变酶E156D的终水解度最高(15.22%),其次为E15... 详细信息

通过对比水产品加工蛋白酶及其底物特异性位点突变酶E156S、E156N和E156D对白鲢鱼肉蛋白水解能力及其酶解产物抗氧化性的差异,探讨底物特异性改变对酶的酶解效率和产物活性的影响.结果表明,突变酶E156D的终水解度最高(15.22%),其次为E156S(13.60%),远高于E156N与原酶的9.37%.原酶和突变酶E156S酶解白鲢鱼肉产物的抗氧化性无明显差异,分别为83.79%和84.05%.而突变酶E156N酶解白鲢鱼肉产物的抗氧化性为76.6%;E156D酶解白鲢鱼肉产物的抗氧化性最低(50.05%).说明枯草蛋白酶BPN底物特异性相关的156位点突变对蛋白酶水解鲢鱼蛋白能力和产物活性都具有重要影响.

关键词：蛋白酶底物特异性突变子鲢鱼蛋白酶解抗氧化性

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中性蛋白酶在麦迪霉素溶媒萃取中的破乳作用

福建畜牧兽医 2016年第3期38卷 20-23页

作者：蓝灿华吴菲菲郑丹梅黄琳福建师范大学生命科学学院福州350117 福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心福州350117

研究一种利用AS1.398中性蛋白酶大幅度减轻麦迪霉素溶媒(醋酸丁酯,BA)萃取时乳化现象的方法,通过正交试验确定综合效果最佳的酶反应条件:酶加量(En)0.10%,温度37℃,pH7.0,搅拌时间60 min。在该条件下,可以减轻84%的乳化。利用该法破乳,... 详细信息

研究一种利用AS1.398中性蛋白酶大幅度减轻麦迪霉素溶媒(醋酸丁酯,BA)萃取时乳化现象的方法,通过正交试验确定综合效果最佳的酶反应条件:酶加量(En)0.10%,温度37℃,pH7.0,搅拌时间60 min。在该条件下,可以减轻84%的乳化。利用该法破乳,麦迪霉素的成品质量和提取收率不受影响,而溶媒损耗却降低28%,并且可以改善劳动条件,达到节能、环保的目的。

关键词： AS1.398中性蛋白酶麦迪霉素溶媒萃取破乳

破囊壶菌Δ~4-脂肪酸脱饱和酶基因5'端侧翼区域的克隆与鉴定

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福建师范大学学报（自然科学版） 2008年第6期24卷 89-94页

作者：江贤章陈金卿田宝玉高媛媛舒正玉李欣蓝灿华黄建忠福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心福建福州350108

应用衔接头PCR(LA-PCR)技术,扩增得到约1000 bp的海洋破囊壶菌Δ4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物.对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列(Genkbank登录号EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、C... 详细信息

应用衔接头PCR(LA-PCR)技术,扩增得到约1000 bp的海洋破囊壶菌Δ4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物.对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列(Genkbank登录号EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、INR等元件.将扩增得到的脱饱和酶基因5’端侧翼序列亚克隆到含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒pGlow-TOPO中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞.荧光显微观察大肠杆菌阳性转化子发出荧光,侧翼序列含有启动子功能得到确认.

关键词：破囊壶菌脱饱和酶衔接头PCR 启动子绿色荧光蛋白