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一例猫传染性腹膜炎的诊断

黑龙江畜牧兽医 2018年第8期 125-127,234,235页

作者：蒋剑成王志慧张思瑶刘秋瑾郭东华黑龙江八一农垦大学动物科技学院

为了确诊黑龙江八一农垦大学动物医院接诊的一例11月龄布偶猫所患疾病,通过剖检观察并采集病变组织进行苏木精-伊红染色（H.E.染色）,观察其病理变化;应用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术进行核酸复检。结果表明：胃、直肠、结肠等... 详细信息

为了确诊黑龙江八一农垦大学动物医院接诊的一例11月龄布偶猫所患疾病,通过剖检观察并采集病变组织进行苏木精-伊红染色（H.E.染色）,观察其病理变化;应用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术进行核酸复检。结果表明：胃、直肠、结肠等组织中均能扩增出猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）N基因片段,并且剖检及病理切片观察可见典型病理变化,说明该猫患有猫传染性腹膜炎。

关键词：猫传染性腹膜炎(FIP) 病理变化 H.E.染色 RT-PCR

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一例猫传染性腹膜炎的诊断报告

一例猫传染性腹膜炎的诊断报告

中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：蒋剑成王志慧张思瑶郭东华黑龙江八一农垦大学动物科技学院兽医分子病理实验室

猫传染性腹膜炎(Feline Infectious Peritonitis,FIP)是由猫传染性腹膜炎病毒引起的一种慢性、渐进性、致死性传染病,以腹膜炎、腹水及高致死性为主要特征。猫传染性腹膜炎分布广泛,世界各地均有报道。该病在预防和诊断上常存在困难。... 详细信息

猫传染性腹膜炎(Feline Infectious Peritonitis,FIP)是由猫传染性腹膜炎病毒引起的一种慢性、渐进性、致死性传染病,以腹膜炎、腹水及高致死性为主要特征。猫传染性腹膜炎分布广泛,世界各地均有报道。该病在预防和诊断上常存在困难。本病例报告为临床接诊一例11月龄布偶猫,通过临床症状、病理解剖学变化、病理组织学变化、分子生物学进行综合诊断,最后确诊该猫患有猫传染性腹膜炎。

关键词：猫传染性腹膜炎病理变化

牛坏死杆菌43K OMP原核表达及多克隆抗体制备

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牛坏死杆菌43K OMP原核表达及多克隆抗体制备

中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：王志慧张思瑶蒋剑成郭东华黑龙江八一农垦大学动物科技学院兽医分子病理实验室

(目的)通过构建牛坏死杆菌43K外膜蛋白(outermembraneprotein,OMP)原核表达载体,进行原核表达并将其纯化,免疫家兔制备多克隆抗体。(方法)针对大肠杆菌具有偏嗜性的密码子进行优化,构建p ET-32a-43K OMP重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌... 详细信息

(目的)通过构建牛坏死杆菌43K外膜蛋白(outermembraneprotein,OMP)原核表达载体,进行原核表达并将其纯化,免疫家兔制备多克隆抗体。(方法)针对大肠杆菌具有偏嗜性的密码子进行优化,构建p ET-32a-43K OMP重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌中,经IPTG诱导进行原核表达,用镍柱亲和层析法进行纯化,应用牛坏死杆菌H05菌株的天然血清经Western bolt方法分析其抗原性,免疫家兔制备多克隆抗体,应用间接ELISA方法测定抗体效价。(结果)经Bam HI和Xho I双酶切和PCR方法证实原核表达质粒p ET-32a-43K OMP构建成功;SDS-PAGE电泳结果显示,在59 k Da左右有一条清晰条带,其大小与目的蛋白一致,证实重组蛋白成功表达且以包涵体的形式存在;纯化的43K OMP重组蛋白免疫家兔,制备了43K OMP多克隆抗体;经Western blot检测,牛坏死杆菌H05菌株天然血清能与43K OMP重组蛋白特异性结合。ELISA检测结果显示,其抗体效价为1:6400。(结论)本研究成功构建p ET-32a-43K OMP原核表达载体,表达并纯化出牛坏死杆菌43K OMP重组蛋白,且抗体效价为1:6400,为进一步研究坏死杆菌外膜蛋白在细菌感染中的作用奠定物质基础。

关键词：牛坏死杆菌 43K OMP 原核表达多克隆抗体

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单元整体教学内容重构的基本逻辑与技术路径

教学与管理 2024年第14期 31-36页

作者：蒋剑秋江苏省宜兴市教师发展中心

素养本位的单元整体教学对核心素养发展有着重要意义。合理改造教材中自然单元的内容,实现其资源的高度结构化,是有效实施单元整体教学的先决条件。单元内容的重构可以从单元的具体类型入手,先通过知识的逻辑化处理,将“隐性散点”转化... 详细信息

素养本位的单元整体教学对核心素养发展有着重要意义。合理改造教材中自然单元的内容,实现其资源的高度结构化,是有效实施单元整体教学的先决条件。单元内容的重构可以从单元的具体类型入手,先通过知识的逻辑化处理,将“隐性散点”转化为“显性关联”;再通过资源的结构化聚合,将“原始素材”重构为“意义整体”;最后通过任务的群组化设计,将“预设目标”演绎为“学习路径”。由此,揭示单元内容重构的基本规律,为单元整体教学的实施奠定基础。

关键词：小学语文单元整体教学逻辑化处理结构化聚合群组化设计

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河北省某牛场坏死杆菌的分离及鉴定

中国生物制品学杂志 2019年第7期32卷 770-773页

作者：蒋剑成张思瑶贺显晶肖佳薇王丽娜汪锋锋郭东华黑龙江八一农垦大学动物科技学院

目的对河北省张家口市某牛场奶牛腐烂蹄肢部组织坏死杆菌进行分离及鉴定。方法采集17份奶牛腐烂蹄肢部组织,在苛养厌氧培养基中进行培养,培养液涂片进行革兰染色,提取细菌基因组DNA,PCR法鉴定病料组织培养物基因组DNA,并进行测序。纯化... 详细信息

目的对河北省张家口市某牛场奶牛腐烂蹄肢部组织坏死杆菌进行分离及鉴定。方法采集17份奶牛腐烂蹄肢部组织,在苛养厌氧培养基中进行培养,培养液涂片进行革兰染色,提取细菌基因组DNA,PCR法鉴定病料组织培养物基因组DNA,并进行测序。纯化后细菌进行生化鉴定及药敏试验。结果病牛蹄组织革兰染色阴性,部分菌体呈杆状或长丝状;17份病牛蹄组织中共检测出7份坏死杆菌阳性样品;纯化后阳性菌液的生理生化特性与坏死梭杆菌基本一致;对亚胺培南(泰能)高度敏感,对氨苄西林/舒巴坦、红霉素、妥布霉素中度敏感,对克林霉素、青霉素G、氨苄西林、头孢唑啉、哌拉西啉耐药。结论该牛场确认发生腐蹄病疫情,且主要由坏死杆菌引起。

关键词：奶牛腐蹄病坏死杆菌分离鉴定

牛坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国生物制品学杂志 2022年第9期35卷 1118-1122,1127页

作者：郭东华肖佳薇王丽娜汪锋锋贺显晶蒋剑成孙东波黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江省牛病防制重点实验室黑龙江大庆163319

目的制备坏死杆菌(Fusobacterium necrophorum)白细胞毒素(leukotoxin)PL2蛋白单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法原核表达并纯化坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白,腹腔注射免疫BALB/c雌性小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛... 详细信息

目的制备坏死杆菌(Fusobacterium necrophorum)白细胞毒素(leukotoxin)PL2蛋白单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法原核表达并纯化坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白,腹腔注射免疫BALB/c雌性小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,并用GST标签蛋白对阳性孔进行二次反向筛选,针对亚克隆后稳定分泌PL2蛋白单克隆抗体的细胞株制备腹水,对单克隆抗体进行抗体效价检测、抗体亚类和Western blot鉴定及杂交瘤染色体分析。结果成功筛选出1株稳定分泌坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2D5;杂交瘤细胞培养上清和腹水效价分别为1∶6400和1∶105;单克隆抗体重链为IgG3,轻链为κ链;杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体分别可与坏死杆菌培养液浓缩上清和重组PL2蛋白发生特异性反应,且与GST标签蛋白无反应;杂交瘤细胞染色体数目为102条,与预期一致。结论成功制备了牛坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体,为坏死杆菌白细胞毒素致病机制的研究提供了工具。

关键词：坏死杆菌白细胞毒素 PL2蛋白单克隆抗体

牛坏死杆菌43K OMP单克隆抗体的制备及鉴定

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中国生物制品学杂志 2021年第1期34卷 89-92页

作者：贺显晶张思瑶蒋剑成王丽娜肖佳薇汪锋锋孙东波郭东华黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

目的制备牛坏死杆菌43K OMP单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法经IPTG诱导表达重组43K OMP,纯化后免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌抗43K OMP特异性抗体的杂交瘤细胞,制备腹水,对抗43K OMP单克隆抗体进行效价、... 详细信息

目的制备牛坏死杆菌43K OMP单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法经IPTG诱导表达重组43K OMP,纯化后免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌抗43K OMP特异性抗体的杂交瘤细胞,制备腹水,对抗43K OMP单克隆抗体进行效价、亚类、免疫原性及特异性鉴定。结果获得3株稳定表达抗43K OMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,取其中效价最高的1株命名为O43,其重链为IgG1,轻链为κ链,上清和腹水效价分别为1∶25 600和1∶105;该单克隆抗体可与重组43K OMP发生特异性反应,且与转染后瞬时表达43K OMP的BHK-21细胞特异性结合,发生荧光反应。结论成功表达并纯化了43K OMP,制备了牛坏死杆菌43K OMP单克隆抗体,为研究坏死杆菌的感染机制及发病机理奠定了基础。

关键词：坏死杆菌牛 43K OMP 单克隆抗体

牛坏死杆菌43kDa OMP对小鼠免疫效果的评价

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牛坏死杆菌43kDa OMP对小鼠免疫效果的评价

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十三次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第三次学术研讨会、中国兽医病理学家第三次学术研讨会

作者：蒋剑成张思瑶汪锋锋王丽娜肖佳薇郭东华黑龙江八一农垦大学动物科技学院

研究目的:坏死杆菌(Fusobacterium necrophorum)为革兰氏阴性、多形性专性厌氧细菌,形状多为杆状。坏死杆菌无荚膜、无芽孢、无运动性,常寄生在人以及动物的口腔、呼吸道、消化道内[1]。主要引起动物的肝脓肿、腐蹄病等传染病以及人的Le... 详细信息

研究目的:坏死杆菌(Fusobacterium necrophorum)为革兰氏阴性、多形性专性厌氧细菌,形状多为杆状。坏死杆菌无荚膜、无芽孢、无运动性,常寄生在人以及动物的口腔、呼吸道、消化道内[1]。主要引起动物的肝脓肿、腐蹄病等传染病以及人的Lemierre's综合症[4],是一种人畜共患病病原[2-4]。本实验选择43k Da OMP作为坏死杆菌重组亚单位疫苗的一个候选抗原免疫小鼠,通过抗体效价检测及细胞因子检测,来明确牛坏

关键词：坏死杆菌免疫效果 OMP

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河北省某牛场奶牛腐蹄病坏死杆菌的分离鉴定

河北省某牛场奶牛腐蹄病坏死杆菌的分离鉴定

作者：张思瑶蒋剑成汪锋锋王丽娜肖佳薇郭东华黑龙江八一农垦大学动物科技学院

研究目的:坏死梭杆菌病是由坏死梭杆菌（Fusobacterium nerophorum）引起的牛、羊、猪等动物和人坏死性、化脓性疾病的一种人畜共患病1]。坏死梭杆菌属于革兰氏阴性专性厌氧多形性杆菌,它广泛存在于动物和人的口腔及胃肠道中2],是条件... 详细信息

研究目的:坏死梭杆菌病是由坏死梭杆菌（Fusobacterium nerophorum）引起的牛、羊、猪等动物和人坏死性、化脓性疾病的一种人畜共患病1]。坏死梭杆菌属于革兰氏阴性专性厌氧多形性杆菌,它广泛存在于动物和人的口腔及胃肠道中2],是条件性致病菌。2018年春季河北省某牛场爆发奶牛腐蹄病,为确定该牛场奶牛腐蹄病发病原因,随机采集17头患病奶牛蹄部病变组织,进行细菌分离实验。方法:取病料置于液体苛养厌氧菌肉汤培养基中厌氧培养72 h。进行革兰氏染色镜检,观察细菌形态。根据

关键词：奶牛腐蹄病坏死杆菌河北省分离鉴定