牛坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

作     者：郭东华 肖佳薇 王丽娜 汪锋锋 贺显晶 蒋剑成 孙东波 GUO Dong-hua;XIAO Jia-wei;WANG Li-na;WANG Feng-feng;HE Xian-jing;JIANG Jian-cheng;SUN Dong-bo

作者机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江省牛病防制重点实验室黑龙江大庆163319 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2022年第35卷第9期

页      面：1118-1122,1127页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划(2017YFD0502200) 国家自然科学基金资助项目(31572534) 黑龙江八一农垦大学校内培育课题(XA2016-03) 

主　　题：坏死杆菌 白细胞毒素 PL2蛋白 单克隆抗体 

摘      要：目的制备坏死杆菌(Fusobacterium necrophorum)白细胞毒素(leukotoxin)PL2蛋白单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法原核表达并纯化坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白,腹腔注射免疫BALB/c雌性小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,并用GST标签蛋白对阳性孔进行二次反向筛选,针对亚克隆后稳定分泌PL2蛋白单克隆抗体的细胞株制备腹水,对单克隆抗体进行抗体效价检测、抗体亚类和Western blot鉴定及杂交瘤染色体分析。结果成功筛选出1株稳定分泌坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2D5;杂交瘤细胞培养上清和腹水效价分别为1∶6400和1∶105;单克隆抗体重链为IgG3,轻链为κ链;杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体分别可与坏死杆菌培养液浓缩上清和重组PL2蛋白发生特异性反应,且与GST标签蛋白无反应;杂交瘤细胞染色体数目为102条,与预期一致。结论成功制备了牛坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体,为坏死杆菌白细胞毒素致病机制的研究提供了工具。