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促红细胞生成素缓释微球对视神经挫伤大鼠视网膜神经节细胞长效保护作用的实验研究

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促红细胞生成素缓释微球对视神经挫伤大鼠视网膜神经节细胞长效保...

作者：荣先芳复旦大学

学位级别：硕士

视神经疾病等神经性慢性致盲性眼病,目前尚无有效的治疗方法,药物治疗仍是这些疾病的主要治疗手段之一。神经营养因子对视网膜神经细胞的保护作用的研究一直是眼科届研究的重点,由于眼球结构的特殊性,视网膜给药苦难重重,如何才能达到... 详细信息

视神经疾病等神经性慢性致盲性眼病,目前尚无有效的治疗方法,药物治疗仍是这些疾病的主要治疗手段之一。神经营养因子对视网膜神经细胞的保护作用的研究一直是眼科届研究的重点,由于眼球结构的特殊性,视网膜给药苦难重重,如何才能达到安全、持久、有效的视网膜给药治疗效果仍然是有待克服的难题。近些年来,眼内蛋白缓释给药系统的开发和应用从一定程度上克服了传统给药方式（如全身给药、滴眼、局部注射等）药物难以到达眼内或难以达到持久、安全的药效的不足。研究证明,促红细胞生成素（Erythropoietin, EPO）对视网膜神经节细胞、感光细胞、视网膜色素上皮细胞等均具有神经保护作用,且价格相对便宜,具有很好的临床应用前景。本研究就乳酸/羟基乙酸共聚物[Poly（L-lactic-co-glycolic acid）, PLGA]包裹的EPO缓释微球注射到SD大鼠视神经挫伤模型的玻璃体腔来探讨这种缓释系统对视网膜神经细胞保护作用的可行性及长效的视网膜神经保护作用。第一部分促红细胞生成素缓释微球的制备和体外释放实验目的制备装载EPO的PLGA缓释微球（EPO-PLGA微球）,并探讨其体外EPO释放曲线。方法利用低温诱导相分离方法制备EPO多糖微粒,然后用水包油-油包固法（Solid-in-oil-in-water method, S/O/W法）制备EPO-PLGA缓释微球。ELISA法检测所制备的EPO-PLGA缓释微球EPO的释放曲线。结果S/O/W法制备的EPO-PLGA缓释微球,表面光滑,粒径在40-100μm之间,体外释放第一天突释小于10%,缓释到第60天时,释放率可达80%以上,释放持久稳定,释放曲线接近线性释放。结论S/O/W法制备的EPO-PLGA缓释微球可以达到EPO的长效线性缓释作用,为进一步探讨EPO-PLGA缓释微球的生物学药效提供了依据。第二部分促红细胞生成素缓释微球体外活性和安全性的评估目的探讨EPO-PLGA缓释微球的体外活性,并对PLGA及其降解产物安全性进行评估。方法建立体外培养的大鼠视网膜组织三维立体培养系统,取1—3天新生SD大鼠视网膜,选取旁中心区视网膜,切成0.5mm×0.5mm大小植片,培养其中,分四组：EPO组,EPO-PLGA组,PLGA组和对照组,分别加入EPO （1 IU/mL）、EPO-PLGA释放液（含EPO 1 IU/mL）、空白PLGA释放液,对照组不加。在倒置相差显微镜下动态观察视网膜神经节细胞轴突生长情况,取培养第6天进行统计分析。结果培养第6天后,从视网膜植片轴突再生的平均长度和密度来看,与对照组相比,EPO和EPO-PLGA释放液对视网膜神经节细胞轴突生长均有促进作用,具有显著统计学差异（p＜0.001）;而空白PLGA释放液组与对照组间无明显差别（p＞0.05）。结论EPO-PLGA缓释微球在制备和释放过程中不影响EPO的生物学活性,且PLGA及其降解产物无明显的组织细胞毒副作用。第三部分促红细胞生成素缓释微球对视神经挫伤大鼠视网膜神经节细胞-长效保护作用的实验研究目的以视神经挫伤大鼠为模型,探讨促红细胞生成素缓释微球EPO-PLGA微球经玻璃体腔注射对受损视网膜神经节细胞的长效保护作用。方法选取成年SD大鼠,分为五组：未治疗组,EPO组,EPO-PLGA组,PBS组和PLGA组。建立视神经挫伤模型。建模后,未治疗组不予玻璃体腔注射,EPO组分别于即刻和造模后4周玻璃体腔内注射EPO10IU （5μL）, EPO-PLGA组即刻给予玻璃体腔内注射EPO-PLGA缓释微球20mg （5μL,含EPO 20 IU）, PBS组分别于即刻和造模后4周给予玻璃体腔内注射0.01M PBS （5μL）, PLGA组即刻给予玻璃体腔内注射空白PLGA微球20mg（5μL）。分别术后4周和8周处死大鼠,处死前5天DiI上丘逆标视网膜神经节细胞（Reinal Ganglion Cells, RGCs）,视网膜铺片观察各组RGCs存活情况;视网膜切片TUNEL检测各组分别在术后1天、5天、2周、4周RGCs的凋亡情况;免疫组化检测各组分别在术后1天、5天、2周、4周视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白（Glial Fibrilary Acid Protein, GFAP）的表达情况。结果视网膜铺片RGCs计数显示,正常SD大鼠RGCs密度为2387.69±164.87（个/mm2）;术后4周,未治疗组、EPO组、EPO-PLGA组、PBS组和PLGA组RGCs密度（个/mm2）分别为748.30±58.81、1418.52±154.91、1296.68±157.55、804.43±86

关键词：促红细胞生成素缓释微球视网膜神经节细胞视神经挫伤神经保护

银杏内酯B通过抑制视网膜神经节细胞凋亡促进其轴突生长

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生理学报 2012年第4期64卷 417-424页

作者：王振宇莫晓芬蒋旭花荣先芳缪华茂复旦大学附属眼耳鼻喉科医院上海200032 复旦大学脑科学研究院上海200032

青光眼、视神经炎等疾病的一个共同病理特征是视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的持续、不可逆性凋亡。银杏内酯B对脑组织神经元有很好的保护作用,并对神经元突起的生长和突触形成起重要作用。本文旨在观察银杏叶提取物(E... 详细信息

青光眼、视神经炎等疾病的一个共同病理特征是视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的持续、不可逆性凋亡。银杏内酯B对脑组织神经元有很好的保护作用,并对神经元突起的生长和突触形成起重要作用。本文旨在观察银杏叶提取物(EGB761)和银杏内酯B对RGCs轴突生长的影响。采用三维立体培养系统进行视网膜植片培养,观察RCGs轴突数目和长度的变化,并对生长出的轴突进行免疫荧光染色鉴定,培养的视网膜植片用TUNEL法检测RGCs的凋亡,并进行免疫染色观察Caspase-3激活的情况。结果显示,与阴性对照组相比,EGB761或银杏内酯B处理的视网膜植片中轴突数量和长度明显增加。免疫荧光染色证实生长出的突起为RGCs轴突。相对阴性对照组,银杏内酯B处理的RGCs凋亡减少,Caspase-3的激活也被抑制。以上结果提示,银杏内酯B能够促进RGCs轴突的生长,主要机制是抑制RGCs凋亡。

关键词：银杏叶提取物银杏内酯B 视网膜神经节细胞神经保护轴突生长青光眼

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试题与答案

中国眼耳鼻喉科杂志 2014年第2期14卷 130-130,82,99,106页

作者：荣先芳江睿褚仁远复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031

1．下列有关先天性眼黑变病的描述不正确的是：A．葡萄膜内扁平状、弥漫性或局限性黑色素细胞增生；B．增生的黑色素细胞类似正常黑色素细胞或体积稍大；c．增生的黑色素细胞胞核较小，胞质丰富，含有大量黑色素颗粒，无明显细胞异型性... 详细信息

1．下列有关先天性眼黑变病的描述不正确的是：A．葡萄膜内扁平状、弥漫性或局限性黑色素细胞增生；B．增生的黑色素细胞类似正常黑色素细胞或体积稍大；c．增生的黑色素细胞胞核较小，胞质丰富，含有大量黑色素颗粒，无明显细胞异型性；D．本病不易伴发先天性青光眼、葡萄膜黑色素瘤、中枢神经细胞黑色素瘤。

关键词：葡萄膜黑色素瘤黑色素细胞先天性眼黑变病细胞增生试题先天性青光眼中枢神经细胞黑色素颗粒

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表观遗传学在眼科的研究进展

国际眼科纵览 2014年第2期38卷 80-86页

作者：荣先芳卢奕复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031

表观遗传学（epigenetics）是指DNA序列不发生变化但基因表达的水平和功能发生了可遗传的改变,主要包括DNA甲基化、组蛋白共价修饰、非编码RNA调控、基因印记等.这种调控机制的基因型未变而表型改变,并在细胞的分裂、增生及之后的发育... 详细信息

表观遗传学（epigenetics）是指DNA序列不发生变化但基因表达的水平和功能发生了可遗传的改变,主要包括DNA甲基化、组蛋白共价修饰、非编码RNA调控、基因印记等.这种调控机制的基因型未变而表型改变,并在细胞的分裂、增生及之后的发育过程中均能稳定地传递下去,并可引起相应的病理生理变化.本文重点讨论DNA甲基化和组蛋白质修饰、非编码RNA调控,并就其在眼球发育、眼科疾病的发病和潜在的治疗机制研究进展进行综述.

关键词：表观遗传学 DNA甲基化组蛋白共价修饰非编码RNA调控

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双眼脉络膜骨瘤1例

中国眼耳鼻喉科杂志 2013年第1期13卷 44-45页

作者：荣先芳王玲王文吉复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031

资料患者女性，37岁，因双眼视力下降2年于2012年8月6日就诊。

关键词：双眼脉络膜骨瘤视力下降患者临床治疗

Ndrg2在阿尔茨海默病的发生发展中发挥重要的作用

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Ndrg2在阿尔茨海默病的发生发展中发挥重要的作用

2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：荣先芳孙英妮王晓良北京协和医学院＆中国医学科学院药物研究所

＜正＞前期研究表明N-myc downstream regulated gene2（Ndrg2）在15月龄的快速老化小鼠的脑内表达量显著增加,暗示其是一个跟老年相关的蛋白。Ndrg2是Ndrg家族成员之一,它的表达受N-myc的调节。Ndrg2高表达与脑,心脏,在肝脏以及肾脏也... 详细信息

＜正＞前期研究表明N-myc downstream regulated gene2（Ndrg2）在15月龄的快速老化小鼠的脑内表达量显著增加,暗示其是一个跟老年相关的蛋白。Ndrg2是Ndrg家族成员之一,它的表达受N-myc的调节。Ndrg2高表达与脑,心脏,在肝脏以及肾脏也能见其表达。大量的研究表明Ndrg2是一个潜在的肿瘤抑制因子,其表达与肿瘤的恶性程度成反比。此外,在迟发性AD患者脑中,Ndrg2的mRNA水平和蛋白表达水平均显著升高,且与老年斑、NFT在AD患者脑中共定位。但是,其在AD发病过程中的机制尚不明确。

关键词：阿尔茨海默病 Ndrg2 β-淀粉样蛋白 tau磷酸化

来源： cnki会议评论

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左眼葡萄膜炎-青光眼-前房积血综合征1例

中国眼耳鼻喉科杂志 2021年第S1期21卷 23-27页

作者：季樱红荣先芳卢奕复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031

51岁女性,因"左眼反复视力下降2年,加重1年"就诊。2年前因左眼反复视力下降,外院诊断为左眼玻璃体积血,予左眼玻璃体切除术,术后症状未见改善。此次就诊左眼裸眼视力0.1,矫正无助,眼压有波动,最高到32.4 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),症状在... 详细信息

51岁女性,因"左眼反复视力下降2年,加重1年"就诊。2年前因左眼反复视力下降,外院诊断为左眼玻璃体积血,予左眼玻璃体切除术,术后症状未见改善。此次就诊左眼裸眼视力0.1,矫正无助,眼压有波动,最高到32.4 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),症状在活动时更明显。裂隙灯检查见角膜色素性KP(+),前房Tyndall(+++),前房细胞(+++),颞上方虹膜基质萎缩伴透照缺损,瞳孔欠圆,直径约4 mm,对光反应迟钝,人工晶状体(IOL)倾斜,玻璃体混浊,眼底糊。5年前曾行双眼白内障摘除联合IOL植入术,双眼高度近视病史。诊断为葡萄膜炎-青光眼-前房积血综合征(UGH),需要与白内障术后的非感染性葡萄膜炎、迟发性感染性眼内炎相鉴别。给予巩膜层间缝线固定IOL置换术,术中房角镜下见前房角色素沉着,送检房水病原菌检测阴性,房水涂片见红细胞。术后1年内随访患者眼压稳定,玻璃体混浊消退,视力提高明显。讨论体会:白内障术后远期出现的反复视力下降伴眼压升高,反复前房炎症反应在考虑UGH时,应首先排除迟发性感染性炎症的可能性。无缝线巩膜固定三片式IOL(如Yamane方法)在高度近视患者中需谨慎使用。

关键词：白内障人工晶状体无缝线巩膜固定葡萄膜炎葡萄膜炎-青光眼-前房积血综合征

基于环介导等温扩增方法高效检测模拟眼内液中铜绿假单胞菌的研究

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中国眼耳鼻喉科杂志 2020年第5期20卷 392-396,404页

作者：孙杨荣先芳卢奕季樱红复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科国家卫生健康委员会近视眼重点实验室中国医学科学院近视眼重点实验上海市视觉损害与重建重点实验室上海200031

目的建立一个稳定、高效检测眼内液中铜绿假单胞菌的体系。方法采用环介导等温扩增(LAMP)技术,由0.1~0.2 mL眼内平衡盐溶液(BSS)模拟眼内房水或玻璃体,利用铜绿假单胞菌gbca基因,特异性设计5组LAMP引物,并对扩增方法进行关键试剂的优化... 详细信息

目的建立一个稳定、高效检测眼内液中铜绿假单胞菌的体系。方法采用环介导等温扩增(LAMP)技术,由0.1~0.2 mL眼内平衡盐溶液(BSS)模拟眼内房水或玻璃体,利用铜绿假单胞菌gbca基因,特异性设计5组LAMP引物,并对扩增方法进行关键试剂的优化,检测眼内液中铜绿假单胞菌。结果该扩增方法经过优化后,最低可以检出100 fg/μL纯基因组DNA,接近荧光定量灵敏度,具有很好的重现性。此外该方法在检测眼内液中混合的菌落时呈现出良好的检测效果,可以检测出2.1×10^2 CFU/mL,极具应用价值。结论建立了一个稳定、高效、灵敏的恒温扩增体系,可以应用于眼内液中铜绿假单胞菌的检测。

关键词：环介导等温扩增铜绿假单胞菌眼内液灵敏度

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老年痴呆生物标志物的转化医学研究

老年痴呆生物标志物的转化医学研究