基于环介导等温扩增方法高效检测模拟眼内液中铜绿假单胞菌的研究

作     者：孙杨 荣先芳 卢奕 季樱红 SUN Yang;RONG Xianfang;LU Yi;JI Yinghong

作者机构：复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科国家卫生健康委员会近视眼重点实验室中国医学科学院近视眼重点实验上海市视觉损害与重建重点实验室上海200031 

出 版 物：《中国眼耳鼻喉科杂志》 (Chinese Journal of Ophthalmology and Otorhinolaryngology)

年 卷 期：2020年第20卷第5期

页      面：392-396,404页

学科分类：1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81770907) 上海市人才发展资金(2018049) 

主　　题：环介导等温扩增 铜绿假单胞菌 眼内液 灵敏度 

摘      要：目的建立一个稳定、高效检测眼内液中铜绿假单胞菌的体系。方法采用环介导等温扩增(LAMP)技术,由0.1~0.2 mL眼内平衡盐溶液(BSS)模拟眼内房水或玻璃体,利用铜绿假单胞菌gbca基因,特异性设计5组LAMP引物,并对扩增方法进行关键试剂的优化,检测眼内液中铜绿假单胞菌。结果该扩增方法经过优化后,最低可以检出100 fg/μL纯基因组DNA,接近荧光定量灵敏度,具有很好的重现性。此外该方法在检测眼内液中混合的菌落时呈现出良好的检测效果,可以检测出2.1×10^2 CFU/mL,极具应用价值。结论建立了一个稳定、高效、灵敏的恒温扩增体系,可以应用于眼内液中铜绿假单胞菌的检测。