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简析祁县农业综合执法工作的现状及几点建议

新农村（黑龙江） 2016年第14期 168-168页

作者：范锋萍山西祁县农业综合执法大队030900

2014年10月23日．党的十八届四中全会通过了依法治国的若干重大问题．指出依法治国是发展社会主义市场经济的客观需要，农业执法也不例外。所以为了祁县农业市场经济秩序有一个更健康良好的发展前景，加快祁县现代农业的进程步伐．必须... 详细信息

2014年10月23日．党的十八届四中全会通过了依法治国的若干重大问题．指出依法治国是发展社会主义市场经济的客观需要，农业执法也不例外。所以为了祁县农业市场经济秩序有一个更健康良好的发展前景，加快祁县现代农业的进程步伐．必须依法治县、依法行政、依法富农、依法兴农。本文主要阐述了祁县农业综合执法工作的现状及几点建议以供参考。

关键词：现状问题建议

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刍议科学选用优良品种

农民致富之友 2014年第8期 79-79页

作者：范锋萍山西省祁县种子管理站

近年来,随着农业的生产逐渐走向科学化、技术化。农业种植的种子选取更需要进行科学的选种。为科学指导农民选用优良农作物品种,本文中主要介绍了优良品种的重要性、目前存在问题以及选用优良品种的基本原则略述浅见。

关键词：科学选种品种

3个湖泊中黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)体内CYP1A1和GST的比较及其功效分析

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农业环境科学学报 2013年第10期32卷 2072-2076页

作者：宋超钟立强裘丽萍陈校辉刘颖范锋陈家长中国水产科学研究院淡水渔业研究中心江苏无锡214081 江苏省淡水水产研究所南京210017 无锡市动物疫病控制中心江苏无锡214000 南京农业大学渔业学院江苏无锡214081

环境中污染物生物标志物的选取和研究是环境监测的重要内容之一,作为污染物肝脏解毒作用的关键酶,多功能氧化酶(CYP1A1)和谷胱甘肽硫转移酶(GST)常被用来作为多种污染物监测的生物标志物。比较了3个湖泊(巢湖、洪泽湖和鄱阳湖)黄颡鱼(Pe... 详细信息

环境中污染物生物标志物的选取和研究是环境监测的重要内容之一,作为污染物肝脏解毒作用的关键酶,多功能氧化酶(CYP1A1)和谷胱甘肽硫转移酶(GST)常被用来作为多种污染物监测的生物标志物。比较了3个湖泊(巢湖、洪泽湖和鄱阳湖)黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)体内的CYP1A1和GST的活性,并对其进行功效分析。结果显示,3个湖泊中黄颡鱼体内CYP1A1和GST之间呈现反相关关系;洪泽湖黄颡鱼体内CYP1A1值明显小于其他两个湖,而洪泽湖黄颡鱼体内GST值明显大于巢湖,与鄱阳湖相比差异不显著。巢湖、洪泽湖和鄱阳湖黄颡鱼体内CYP1A1和GST的平均功效值分别为0.81和0.42,当设定功效等于0.8时,3个湖泊CYP1A1的最佳样本量平均值为20,而GST的最佳样本量平均值为47。本文为利用功效分析的手段评估监测过程中所需要的最佳样本量,以期为进一步的污染物生物监测提供重要的数据参考。

关键词：黄颡鱼 CYP1A1 GST 功效分析生物标志物

晋麦47幼苗叶片水分胁迫差异表达蛋白的鉴定与分析

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麦类作物学报 2013年第3期33卷 566-572页

作者：范锋贵金秀锋叶石任万杰张帆鞠丽萍王宏礼张晓科西北农林科技大学农学院/国家小麦改良中心杨凌分中心陕西杨凌712100

为了从蛋白质水平进一步揭示小麦抗旱机理,以旱地小麦品种晋麦47为试验材料,采用蛋白质双向电泳技术,结合质谱鉴定技术,研究幼苗在正常供水与水分胁迫(-0.5 MPa的PEG-6000溶液处理48h)后叶片蛋白质组表达谱间的差异,分析水分胁迫差异表... 详细信息

为了从蛋白质水平进一步揭示小麦抗旱机理,以旱地小麦品种晋麦47为试验材料,采用蛋白质双向电泳技术,结合质谱鉴定技术,研究幼苗在正常供水与水分胁迫(-0.5 MPa的PEG-6000溶液处理48h)后叶片蛋白质组表达谱间的差异,分析水分胁迫差异表达的蛋白种类及其功能。研究发现,在正常供水和水分胁迫处理两种条件下,幼苗叶片蛋白的双向电泳图谱均可重复检测到850个蛋白点;31个蛋白点在两种供水水平间表达量存在显著差异,其中17个蛋白点在水分胁迫处理下表达量明显增加,14个蛋白点表达量明显减少。对这些蛋白点进行肽指纹图谱分析,并利用Mascot软件在NCBInr数据库搜索,最终有26个蛋白点被成功鉴定;其中,未知功能蛋白7个;已知功能蛋白19个,主要涉及能量、代谢、抗病与防御、细胞结构、转录与翻译以及信号转导等功能类别。结果表明,小麦体内的多个代谢及调控途径参与了对干旱的应激反应。最后,本文还对鉴定到的差异蛋白点与水分胁迫的关系进行了分析和讨论。

关键词：普通小麦水分胁迫双向电泳差异表达蛋白

高效液相色谱串联三重四级杆质谱法检测重组铜绿假单胞菌外毒素A蛋白质原液中氨苄西林残余量

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中国生物制品学杂志 2015年第8期28卷 827-831页

作者：慕艳红范锋锋马庆华罗树权方红春徐英魏然赵志强朱莉萍兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃兰州730046

目的建立高效液相色谱串联三重四级杆质谱法检测重组铜绿假单胞菌外毒素A（recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA）蛋白原液中氨苄西林残余量。方法用乙腈沉淀蛋白质,离心后收集上清,采用高效液相色谱串联三重四级杆质... 详细信息

目的建立高效液相色谱串联三重四级杆质谱法检测重组铜绿假单胞菌外毒素A（recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA）蛋白原液中氨苄西林残余量。方法用乙腈沉淀蛋白质,离心后收集上清,采用高效液相色谱串联三重四级杆质谱法上样分析,色谱条件：色谱柱Zorbax SB-C18 Rapid Resolution HT,1.8 Micron2.1 mm×100 mm,流动相30%乙腈,流速0.1 ml/min;质谱检测条件：多重反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）,正离子模式,ESI电压3 500 V,碎裂电压110 V,碰撞能10,气体流速8 L/min,母离子的质荷比（mass to charge ratio,m/z）=350.1,定量子离子m/z=105.8,定性子离子m/z=159.9。对建立的方法进行系统适用性、专属性、精密度、稳定性验证,确定该方法的线性范围及最低检出限、定量限,并进行基质效应试验。结果该方法试验参数符合检测要求,对氨苄西林的检测专属性强,当氨苄西林浓度在10~100 ng/ml范围内,r2〉0.999 00,最低检出限为5 ng/ml,最低定量限为10 ng/ml。氨苄西林加标试验的回收率在98%~110%之间,重复性及日间精密度RSD均小于5.5%;冻融稳定性、样品前处理后的稳定性、短期稳定性试验中,样品回收率均在95%~120%之间;以超纯水5倍稀释的r EPA蛋白原液作为溶剂配制的3个不同浓度的氨苄西林对照品溶液的回收率均接近120%,RSD值在3%~5%之间,准确度和精密度良好。结论该方法系统适用性好,灵敏度高,专属性强,准确度和精密度好,检测时间短,是一种易于实现仪器自动化分析的方法。

关键词：高效液相色谱法三重四级杆质谱法铜绿假单胞菌外毒素A 氨苄西林残留量

人血清中抗伤寒Vi多糖特异IgG抗体含量ELISA检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2015年第10期28卷 1057-1062页

作者：刘月萍范锋锋周海飞许博王欣茹金鑫赵志强祝秉东谢贵林谭小梅兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046 兰州大学基础医学院甘肃兰州730000 中国生物技术股份有限公司北京100029

目的建立测定人血清中抗伤寒Vi多糖特异Ig G抗体含量的ELISA方法,并进行验证。方法以美国国立卫生研究院（National Institutes of Health,NIH）测定Vi抗体的ELISA方法为主要参考,对包被抗原、不同吸附力酶标板、抗原包被浓度、样品反... 详细信息

目的建立测定人血清中抗伤寒Vi多糖特异Ig G抗体含量的ELISA方法,并进行验证。方法以美国国立卫生研究院（National Institutes of Health,NIH）测定Vi抗体的ELISA方法为主要参考,对包被抗原、不同吸附力酶标板、抗原包被浓度、样品反应条件、显色时间进行优化,建立测定人血清中抗伤寒Vi多糖Ig G抗体含量的ELISA方法,并对建立的方法进行特异性、线性、准确性、精密度、最低检测限验证。结果优化的ELISA法为：以伤寒Vi多糖作为包被抗原,costar92592型酶标板作为检测酶标板,2.0μg/ml为抗原包被浓度,20~25℃过夜为样品的反应条件,在40~80 min内（A405值在1.8~2.5之间）终止显色。质控血清经不同含量多糖吸收后,抗体含量与多糖浓度具有明显的浓度依赖关系,多糖抑制率最高可达92%;血清稀释度与抗体含量存在负相关的线性关系,R2=0.999;本试验检测的质控血清抗体浓度为76.80 EU/ml,变异系数（CV）=8.55%,与美国NIH检测的数据（75 EU/ml,CV≤15%）一致性良好;该方法重复性（CV≤15%）及中间精密度（CV≤20%）均符合要求;最低检测限为0.78 EU/ml。结论建立了人血清中抗伤寒Vi多糖特异Ig G抗体含量ELISA检测方法,该方法特异性、线性、准确性、精密度良好,可快速、准确地检测人血清中抗伤寒Vi多糖Ig G抗体含量。

关键词：伤寒Vi多糖免疫球蛋白G 酶联免疫吸附测定验证

重组铜绿假单胞菌外毒素A含量SDS-PAGE检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2016年第6期29卷 632-636页

作者：范锋锋李燕婷金鑫冯宜扬夏莲坤刘月萍朱衍志赵志强谢贵林谭小梅兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046

目的建立测定重组铜绿假单胞菌外毒素A（recombinant exotoxin of Pseudomonas aeruginosa,r EPA）含量的SDSPAGE法,并进行验证。方法采用SDS-PAGE,经考马斯亮蓝R-250染色后,利用Image Lab软件分析获得目标蛋白条带光密度值,计算目标蛋... 详细信息

目的建立测定重组铜绿假单胞菌外毒素A（recombinant exotoxin of Pseudomonas aeruginosa,r EPA）含量的SDSPAGE法,并进行验证。方法采用SDS-PAGE,经考马斯亮蓝R-250染色后,利用Image Lab软件分析获得目标蛋白条带光密度值,计算目标蛋白在待测样品中的含量。对建立的方法进行专属性、准确性和重复性验证,确定检测范围,并用建立的方法检测r EPA宿主湿菌体中r EPA发酵产量及r EPA宿主菌休克液柱层析纯化样品中r EPA含量。结果 r EPA含量在100~600μg/ml范围内与其对应条带的光密度值具有良好的相关性,决定系数在0.97以上。大肠埃希菌固有组分及纯化过程中常用的添加物对r EPA含量检测均未产生明显影响,专属性较好;用建立的方法检测500、300、150μg/ml r EPA样品10次的回收率分别为（102.32±4.18）%、（102.77±4.94）%和（95.04±16.41）%,CV值分别为4.08%、4.81%和17.27%。各批r EPA发酵产量为250~500 mg/L,三步柱层析纯化后,r EPA总回收率约为50%。结论建立了测定r EPA含量的SDS-PAGE法,该方法专属性、准确性和重复性良好,为r EPA生产工艺的优化奠定了基础。

关键词：重组铜绿假单胞菌外毒素A SDS-PAGE 收率

小鼠血清中杀O139霍乱弧菌抗体检测方法的初步建立

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微生物学免疫学进展 2014年第6期42卷 24-30页

作者：范锋锋谭小梅李燕婷吴朝今刘月萍乔瑞洁王浩赵志强谢贵林兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046 中国生物技术股份有限公司北京100029

目的研究探索O139霍乱弧菌杀弧菌抗体的检测方法。方法用微孔板培养和琼脂平板克隆计数相结合的杀弧菌抗体检测方法,对实验菌株及稀释度、补体浓度等关键参数进行筛选;对50份小鼠免疫血清进行杀弧菌抗体滴度检测,并与O139群霍乱弧菌LPS ... 详细信息

目的研究探索O139霍乱弧菌杀弧菌抗体的检测方法。方法用微孔板培养和琼脂平板克隆计数相结合的杀弧菌抗体检测方法,对实验菌株及稀释度、补体浓度等关键参数进行筛选;对50份小鼠免疫血清进行杀弧菌抗体滴度检测,并与O139群霍乱弧菌LPS Ig G抗体滴度进行相关分析;对该方法的特异性、线性和精密性进行了验证。结果筛选出最佳菌株为20100603菌株,最佳稀释度倍数为2 000倍,补体最佳稀释倍数为16倍。O139群霍乱弧菌小鼠免疫血清检测到较高的杀弧菌抗体滴度而PBS小鼠免疫血清未检测到杀弧菌抗体滴度。小鼠免疫血清杀弧菌抗体滴度与O139群霍乱弧菌LPS Ig G抗体滴度之间存在正相关关系。验证结果显示,在抑制剂浓度达到1.0～2.0 A600时,抑制率100%;线性回归方程为y=-1.093x＋5.058,其相关系数为-0.999,P〈0.05;方法批内CV值为15.72%,批间CV值为23.47%。结论初步建立了O139霍乱弧菌杀弧菌抗体的检测方法,该方法具有较高的特异性、线性和精密度。

关键词：霍乱霍乱弧菌 O139 小鼠免疫血清杀弧菌抗体滴度

白喉毒素无毒突变体H21G蛋白的分泌性表达及纯化

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中国生物制品学杂志 2016年第12期29卷 1262-1266页

作者：范锋锋李燕婷金鑫刘月萍吴朝今冯宜扬乔瑞洁许博赵志强谭小梅谢贵林兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046 中国生物技术股份有限公司北京100029

目的原核分泌性表达白喉毒素无毒突变体H21G蛋白并进行纯化,为下一步开发以重组H21G蛋白为基础的疫苗奠定基础。方法以p ET16a-H21G质粒为模板,PCR扩增H21G基因,亚克隆至p ET22b载体中,构建重组原核表达质粒p ET22b-H21G,转化感受态大... 详细信息

目的原核分泌性表达白喉毒素无毒突变体H21G蛋白并进行纯化,为下一步开发以重组H21G蛋白为基础的疫苗奠定基础。方法以p ET16a-H21G质粒为模板,PCR扩增H21G基因,亚克隆至p ET22b载体中,构建重组原核表达质粒p ET22b-H21G,转化感受态大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导重组H21G蛋白分泌性表达。重组蛋白经渗透压休克,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Phenyl Sepharose 6FF（high sub）疏水层析纯化后,使用还原/非还原SDS-PAGE和HPLC法分析纯化蛋白的纯度,窄范围等电聚焦分析其等电点,MALDI-TOF质谱法分析其相对分子质量,N-末端测序法鉴定N-末端氨基酸序列。结果重组原核分泌性表达质粒p ET22b-H21G经双酶切（NcoⅠ和XhoⅠ）和测序证明构建正确;目标蛋白以可溶形式存在于宿主菌周质间隙,表达量为10%-15%;经纯化后,重组蛋白纯度达95%以上,等电点在4.55-6.20之间,相对分子质量和N-末端氨基酸序列均与白喉毒素相符合。结论成功分泌性表达并纯化了重组白喉毒素无毒突变体H21G蛋白,为下一步开发以重组H21G蛋白为基础的疫苗奠定了基础。

关键词：白喉毒素无毒突变体H21G 分泌性表达纯化