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人脐血造血干／祖细胞的磁力搅拌悬浮培养及移植实验

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中华器官移植杂志 2009年第1期30卷 17-20页

作者：段华新毛平罗畅如许艳丽谢健晋张玉平广州医学院附属市一人民医院血液科 510180

目的探讨磁搅拌大规模培养体系对人脐血造血祖细胞的扩增效果以及扩增的人造血祖细胞植入动物体内后的造血重建情况。方法从新鲜抗凝脐血中分离出单个核细胞（MNC），以添加干细胞因子、酪氨酸激酶受体3配基及血小板生成素的无血清培养... 详细信息

目的探讨磁搅拌大规模培养体系对人脐血造血祖细胞的扩增效果以及扩增的人造血祖细胞植入动物体内后的造血重建情况。方法从新鲜抗凝脐血中分离出单个核细胞（MNC），以添加干细胞因子、酪氨酸激酶受体3配基及血小板生成素的无血清培养体系进行培养。静态扩增组的细胞置于T25培养瓶中培养，磁搅拌悬浮扩增组（磁搅拌扩增组）的细胞采用Celstir装置进行培养，培养体系为50～100ml。培养7d后进行细胞计数、集落培养检测和细胞表面分子表达的测定。以不进行培养者为对照组。非肥胖糖尿病重症联合免疫缺陷（NOD／SCID）小鼠在接受2．5Gy的亚致死剂量X射线照射后分别从尾静脉输入上述静态扩增组、磁搅拌扩增组和对照组的MNC（5×10^6个），另设不移植的空白对照组。观察小鼠的存活情况，6周后处死存活小鼠，检测骨髓细胞中CD34^＋细胞、CD3^＋细胞、CD19^＋细胞、CD33^＋细胞及CD45^＋细胞的含量以及人特异的Cart—I和Alu基因的表达。结果经过7天的培养，磁搅拌扩增组的造血祖细胞扩增倍数为（2．8±0．45）倍，明显高于静态扩增组的（2．1±0．48）倍（P〈0．01）。磁搅拌扩增组形成的红系集落、粒-巨噬细胞集落数均明显高于静态扩增组（P〈0．05）。静态扩增组扩增后的CD34^＋细胞、CD34^＋CD38^-细胞和CD133^＋细胞含量均高于磁搅拌扩增组（P〈0．05），而CD184^＋细胞和CD62L^＋细胞含量低于磁搅拌扩增组（P〈0．01）。移植后6周，对照组、静态扩增组和磁搅拌扩增组分别有3、4、5只小鼠存活，三组间两两比较，6周存活率的差异无统计学意义（P〉0．05）。存活6周的小鼠，其骨髓中能检出人特异性CD34^＋细胞，以及CD3^＋细胞、CD19^＋细胞、CD33^＋细胞及CD45^＋细胞，也检测到人Alu基因和Cart—I基因的表达。结论磁搅拌培养能大规模扩增脐带血造血祖细胞，扩增的细胞能植入X射线照射的NOD／SCID小鼠，并重建其多系造血。

关键词：脐血造血干细胞细胞培养技术磁力学移植

为提升IPTR患者血小板输注后CCI值建立分级规避HLA抗体对应抗原方法及HLAMatchmaker的应用研究

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中国实验血液学杂志 2024年第1期32卷 242-249页

作者：高素青徐筠娉罗畅如李大成彭龙刘通邹琼彩深圳市血液中心输血医学研究所深圳市第二人民医院血液科广东深圳518040

目的:建立分级规避HLA抗体MFI阈值对应抗原方法,联合应用HLAMatchmaker表位计算法,选择供患者表位最小错配评分值,评估两种方法为免疫性血小板输注无效(Immune platelet transfusion refractoriness,IPTR)患者选择HLA相容性血小板供者,... 详细信息

目的:建立分级规避HLA抗体MFI阈值对应抗原方法,联合应用HLAMatchmaker表位计算法,选择供患者表位最小错配评分值,评估两种方法为免疫性血小板输注无效(Immune platelet transfusion refractoriness,IPTR)患者选择HLA相容性血小板供者,在提升血小板输注后校正增加值(CCI)的应用价值。方法:采用SPRCA法完成51例IPTR患者的7807次血小板交叉配型实验,判断其免疫反应阴/阳性结果。采用Luminex单抗原流式微珠法检测患者的HLA-I类抗体,获得不同特异性抗体对应HLA-I类抗原MFI值,并将其分组及分级,强阳性组(MFI>4000,1级)、中阳性组(1000中阳性组>弱阳性组)。强阳性和中阳性组与阴性对照组之间的SPRCA实验免疫反应阳性结果检出数存在统计学差异(P0.05)。设置强阳性组为相应特异性HLA位点对应抗原1级规避阈值,中阳性组为2级规避阈值,弱阳性组为3级规避阈值,在供者血小板紧缺情况下,可以不需要规避弱阳性组。规避1和2级HLA-I类抗体对应供者抗原及选择HLAMatchmaker表位错配评分数≤7血小板供者策略,24 h内CCI值均>4.5×109/L,均可获得临床血小板输注有效。结论:在为IPTR患者选择HLA-I类相容性供者时,分级规避HLA-I类抗体对应供者抗原,综合选择供受者HLAMatchmaker表位错配评分数≤7,经血小板交叉配型实验确认为阴性结果的供者选择策略,对提升IPTR患者血小板计数具有一定实际应用价值。

关键词：血小板人类白细胞抗原抗体表位 HLAMatchmaker

血液透析滤过处理CAR-T治疗后IL-6受体抑制剂治疗无效的3~4级细胞因子释放综合征3例

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中华血液学杂志 2022年第6期43卷 494-498页

作者：陈诗彧陈伟红万晓春杜新罗畅如李晓清张晓瀚深圳大学第一附属医院/深圳市第二人民医院血液内科深圳518035 中国科学院深圳先进技术研究院、生物医药与技术研究所蛋白与细胞药物研究中心深圳518055

目的观察血液透析滤过(HDF)处理嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)免疫疗法后IL-6受体抑制剂治疗无效细胞因子释放综合征(CRS)的有效性及安全性.方法回顾性分析2015年7月至2021年7月深圳大学第一附属医院血液内科经CAR-T细胞治疗后出现托珠... 详细信息

目的观察血液透析滤过(HDF)处理嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)免疫疗法后IL-6受体抑制剂治疗无效细胞因子释放综合征(CRS)的有效性及安全性.方法回顾性分析2015年7月至2021年7月深圳大学第一附属医院血液内科经CAR-T细胞治疗后出现托珠单抗治疗无效的3~4级CRS并接受HDF治疗的3例患者,包括急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)2例,弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)1例.结果患者在HDF治疗结束后12h内临床症状(体温、血压、血氧)缓解,细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α、INF-γ及C反应蛋白(CRP)明显下降.随访3个月未发现HDF治疗相关不良反应.结论HDF控制CAR-T细胞治疗后托珠单抗治疗无效3~4级CRS安全可行.

关键词：血液透析滤过嵌合抗原受体T细胞细胞因子释放综合征 IL-6受体抑制剂

脂质体多柔比星强化预处理方案异基因造血干细胞移植治疗白血病的效果观察

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白血病．淋巴瘤 2022年第2期31卷 96-98页

作者：张晓瀚杜新蔡云汪鹏程罗畅如李晓清深圳市第二人民医院血液内科深圳518035

目的探讨脂质体多柔比星强化预处理方案异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗白血病的效果。方法回顾性分析深圳市第二人民医院2016年1月至2017年6月20例应用脂质体多柔比星强化预处理方案allo-HSCT患者的资料。分析患者移植效果、并发... 详细信息

目的探讨脂质体多柔比星强化预处理方案异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗白血病的效果。方法回顾性分析深圳市第二人民医院2016年1月至2017年6月20例应用脂质体多柔比星强化预处理方案allo-HSCT患者的资料。分析患者移植效果、并发症发生情况及预后。结果白细胞植活中位时间17 d(13~23 d),血小板植活中位时间22.5 d(最短13 d,最长>90 d)。急性移植物抗宿主病(GVHD)和慢性GVHD分别有2例和1例;出血性膀胱炎8例,EB病毒血症15例,巨细胞病毒血症8例,败血症1例,急性肝损伤1例,真菌性肺炎2例。中位随访31.7个月(0.8~53.8个月),1例患者移植后第25天发生颅内感染而死亡;3例患者随访期内复发,其中2例死亡;其余16例患者随访期复查均为100%供者基因。结论脂质体多柔比星强化预处理方案allo-HSCT治疗白血病效果较好,提高预处理强度未增加治疗相关不良反应。EB病毒、巨细胞病毒血症发生率虽然较高,但积极治疗后均好转。

关键词：白血病造血干细胞移植移植预处理多柔比星

人脐血造血干／祖细胞的生物反应器大规模扩增及移植实验

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中华器官移植杂志 2009年第3期30卷 152-155页

作者：毛平段华新王彩霞李迎霄邓婷芬许艳丽罗畅如广州医学院附属市一人民医院血液科 510180

目的利用生物反应器大规模扩增人脐血造血干／祖细胞，并通过动物移植实验检验该方法的有效性。方法采集抗凝脐血10份，分离出单个核细胞（MNC），分别进行生物反应器扩增培养和静态扩增培养。检测扩增前后细胞表面CD34、CD38、CD133、C... 详细信息

目的利用生物反应器大规模扩增人脐血造血干／祖细胞，并通过动物移植实验检验该方法的有效性。方法采集抗凝脐血10份，分离出单个核细胞（MNC），分别进行生物反应器扩增培养和静态扩增培养。检测扩增前后细胞表面CD34、CD38、CD133、CD184和CD62L分子的表达，并进行造血干／祖细胞集落的培养。取非肥胖糖尿病重症联合免疫缺陷小鼠，以X射线照射后，分为4组，其中MNC组小鼠注射未经扩增培养的MNC；静态扩增组小鼠注射经过静态扩增培养的细胞；反应器扩增组小鼠注射经过生物反应器扩增培养的细胞；空白对照组小鼠注射生理盐水。移植后6周处死存活小鼠，收集骨髓细胞，检测其中CD45^＋、CD3^＋、CD19^＋和CD33^＋细胞的含量以及人特异的Cart—I和Alu基因的表达。结果生物反应器扩增前MNC为（1．2～2．8）×10^8个，扩增后为（3．7～12．6）×10^8个，扩增后的细胞数明显高于静态扩增培养者（P〈（0.01）。经生物反应器扩增后所形成的红系集落形成单位、粒一巨噬细胞集落形成单位数明显高于经静态扩增者（P〈0．05）。移植6周后，空白对照组小鼠均死亡，MNC组存活率为35％，静态扩增组存活率为30％，反应器扩增组存活率为62．9％，后者明显高于前二者（P〈0．05）。各组存活小鼠骨髓细胞中均检测到Alu基因和Cart—I基因的表达以及人源CD33^＋、CD45^＋、CD3^＋及CD19^＋细胞。结论利用生物反应器可大规模扩增人脐血造血干／祖细胞，所得细胞能植入小鼠体内，并能获得造血功能重建。

关键词：脐血干细胞移植细胞培养技术生物反应器小鼠 SCID

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磁力搅拌悬浮培养大规模扩增脐血造血祖细胞

中国实验血液学杂志 2008年第4期16卷 867-870页

作者：段华新毛平邓婷芬罗畅如许艳丽张玉平广州医学院附属广州市第一人民医院血液科广州510008

为了利用磁力搅拌悬浮培养装置大规模体外扩增脐血造血祖细胞,从脐血分离单个核细胞,以无血清培养基stem span添加干细胞因子、FLT-3配基及血小板生成素为培养体系进行培养。先研究磁场(25和50mT)对静态扩增培养的造血祖细胞生长和集落... 详细信息

为了利用磁力搅拌悬浮培养装置大规模体外扩增脐血造血祖细胞,从脐血分离单个核细胞,以无血清培养基stem span添加干细胞因子、FLT-3配基及血小板生成素为培养体系进行培养。先研究磁场(25和50mT)对静态扩增培养的造血祖细胞生长和集落形成能力的影响,再研究磁力搅拌悬浮大规模培养对造血细胞总数扩增、造血集落形成和表面分子标志表达变化。结果表明,在0,25和50mT磁场组和磁转子组,细胞总数扩增倍数和造血集落形成数在各组间均无明显区别(p>0.05)。经过7天的扩增培养,磁力搅拌悬浮大规模培养细胞总数扩增倍数为2.8±0.45,高于静态培养细胞总数扩增倍数(2.1±0.48)(p<0.01);磁力搅拌悬浮培养组形成的红系集落数(1983.5±582.6)、粒-巨噬细胞集落数(186.4±62.7)明显高于静态培养形成的相应的造血集落数(分别为1396.2±425.7和136.5±40.8)(p均<0.05)。磁力搅拌悬浮扩增后造血干细胞(CD34+、CD34+/CD38-或CD133+)比例分别为(0.9±0.34)%、(0.7±0.21)%和(1.1±0.35)%,低于静态培养的干细胞比例[分别为(1.4±0.35)%、(1.2±0.34)%和(1.6±0.68%)](p均<0.05);但是,归巢相关分子CD184和CD62L高于静态扩增培养。结论:磁力搅拌悬浮装置可能有利于脐血造血祖细胞规模扩增,本研究结果还有待于动物实验及临床移植试验进一步验证。

关键词：磁力搅拌悬浮培养造血祖细胞细胞扩增脐血

国产粒细胞集落刺激因子动员健康供者造血干细胞的临床观察

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中国医学创新 2018年第15期15卷 39-42页

作者：罗畅如陈伟红李明杜新广东省深圳市第二人民医院(深圳大学第一附属医院) 广东深圳518035 广东省深圳市血液研究所

目的:观察国产粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对32名健康供者外周血造血干细胞动员效果及不良反应。方法:选取2017年4-11月期间32名健康供者应用G-CSF 5~10μg/(kg·d)连续5 d皮下注射,若第4天白细胞低于30×10~9/L,第4.5天开始采集前2 h加... 详细信息

目的:观察国产粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对32名健康供者外周血造血干细胞动员效果及不良反应。方法:选取2017年4-11月期间32名健康供者应用G-CSF 5~10μg/(kg·d)连续5 d皮下注射,若第4天白细胞低于30×10~9/L,第4.5天开始采集前2 h加用G-CSF 5μg/kg皮下注射,用COBE Spectra血细胞分离机采集外周血造血干细胞,若采集数量不够,第5.5天再采集1次。观察供者动员前后血常规的变化和采集造血干细胞结果,以及出现的不良反应。结果:动员后第4.5天白细胞明显高于动员前,差异均有统计学意义(P<0.05)。32名供者均成功采集,外周血单个核细胞(PBMNC)8.5(3.17~20.95)×10~8/kg、CD34^+6.43(2.15~17.5)×10~6/kg,其中4名供者需采集2次,余28名供者均采集1次。10名供者出现腰背部酸痛,3名出现乏力,均能耐受;4名供者采集过程中出现口唇、四肢麻木,予静滴钙剂后均缓解。结论:所有供者经G-CSF动员后均可成功采集,并能耐受其不良反应,可替代进口G-CSF供临床使用。

关键词：动员粒细胞集落刺激因子造血干细胞

急性髓系白血病患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖分析

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中国实验血液学杂志 2009年第2期17卷 431-436页

作者：毛平罗畅如张玉平王彩霞许艳丽应逸杜庆华谢健晋广州医学院附属广州市第一人民医院血液内科广东广州510180

本研究探讨AML患者在初发、治疗缓解后、复发等不同疾病状态下外周血T细胞TCRVβ亚家族表达及T细胞克隆性增殖的情况,分析不同白血病细胞负荷对患者外周血T淋巴细胞数量及功能,尤其是对抗白血病功能的影响。应用RT-PCR扩增11例AML白血... 详细信息

本研究探讨AML患者在初发、治疗缓解后、复发等不同疾病状态下外周血T细胞TCRVβ亚家族表达及T细胞克隆性增殖的情况,分析不同白血病细胞负荷对患者外周血T淋巴细胞数量及功能,尤其是对抗白血病功能的影响。应用RT-PCR扩增11例AML白血病患者不同疾病状态下及3名正常供者外周血的TCRBV24个家族的基因序列,通过基因扫描(genescan)的方法判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质,比较不同疾病状态下白血病患者外周血T细胞的Vβ亚家族的应用、克隆性增殖、T细胞的复杂性以及T细胞免疫表型的变化。结果表明:11例AML白血病患者初诊时外周血T细胞均表达部分TCRVβ亚家族,经体外诱导后TCRVβ亚家族表达增加;完全缓解期患者外周血T细胞TCRVβ亚家族数量明显增多,但未达到完全正常;4例患者在复发时TCRVβ亚家族表达数量明显下降;11例患者中有9例在初诊时外周血有1至2个TCRVβ亚家族T细胞克隆性增殖,缓解期克隆性增殖的Vβ亚家族T细胞有增加趋势,在多数病例观察到部分Vβ亚家族T细胞在初发、缓解、体外诱导扩增以及复发时仍维持克隆性增殖状态;AML白血病患者初发及复发时T细胞CDR3复杂性明显降低,呈偏态分布,而疾病缓解时T细胞复杂性有所改善。结论:AML白血病患者外周血T细胞TCRVβ亚家族呈限制性表达;在大多数病例中无论是疾病初发抑或缓解及体外诱导、甚至在疾病复发时均可观察到克隆性T细胞的存在;在部分病例中某些Vβ亚家族在上述不同疾病状态下始终维持克隆性增殖状态,部分Vβ亚家族的克隆性增殖同白血病细胞的存在相关;在疾病状态下,AML白血病患者外周血T细胞的复杂性有所降低,而疾病缓解后可部分恢复。

关键词：急性髓系白血病 T淋巴细胞 Vβ亚家族克隆性增殖

培门冬酶对成人急性淋巴细胞白血病患者凝血功能的影响及处理方法

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中国实用医刊 2018年第8期45卷 113-115页

作者：罗畅如陈伟红杜新蔡云蔡力生张晓瀚广东省深圳市第二人民医院深圳大学第一附属医院血液科 518035

目的探讨培门冬酶对成人急性淋巴细胞白血病患者凝血功能的影响及处理方法。方法应用培门冬酶方案对33例急性淋巴细胞白血病患者进行化疗，在培门冬酶治疗前ld及治疗后4、9、14d，进行血浆凝血酶原时间（胛）、活化部分凝血活酶时间（A... 详细信息

目的探讨培门冬酶对成人急性淋巴细胞白血病患者凝血功能的影响及处理方法。方法应用培门冬酶方案对33例急性淋巴细胞白血病患者进行化疗，在培门冬酶治疗前ld及治疗后4、9、14d，进行血浆凝血酶原时间（胛）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、血浆纤维蛋白原（FIB）监测，并对纤维蛋白低于1．0g/L的患者输注适量的冷沉淀。结果33例患者经培门冬酶治疗后，31例患者出现凝血功能异常（占93．9％），以FIB下降为主：除治疗后4dPT与治疗前比较差异未见统计学意义（P〉0．05），治疗后PT、AFTT、FIB与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0．05）。经输注适量冷沉淀治疗后，2例患者出现皮肤散在瘀斑，其余患者未见明显出血现象。治疗后2周FIB逐渐恢复，但仍未达正常，与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论应用培门冬酶时需密切定期监测患者凝血功能变化，培门冬酶对FIB影响明显，必要时补充冷沉淀治疗。

关键词：培门冬酶凝血功能纤维蛋白原冷沉淀