人脐血造血干／祖细胞的生物反应器大规模扩增及移植实验

作     者：毛平 段华新 王彩霞 李迎霄 邓婷芬 许艳丽 罗畅如 MAO Ping;DUAN Hua-xin;WANG Cai-xia

作者机构：广州医学院附属市一人民医院血液科510180 

出 版 物：《中华器官移植杂志》 (Chinese Journal of Organ Transplantation)

年 卷 期：2009年第30卷第3期

页      面：152-155页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主　　题：脐血干细胞移植 细胞培养技术 生物反应器 小鼠 SCID 

摘      要：目的利用生物反应器大规模扩增人脐血造血干／祖细胞，并通过动物移植实验检验该方法的有效性。方法采集抗凝脐血10份，分离出单个核细胞（MNC），分别进行生物反应器扩增培养和静态扩增培养。检测扩增前后细胞表面CD34、CD38、CD133、CD184和CD62L分子的表达，并进行造血干／祖细胞集落的培养。取非肥胖糖尿病重症联合免疫缺陷小鼠，以X射线照射后，分为4组，其中MNC组小鼠注射未经扩增培养的MNC；静态扩增组小鼠注射经过静态扩增培养的细胞；反应器扩增组小鼠注射经过生物反应器扩增培养的细胞；空白对照组小鼠注射生理盐水。移植后6周处死存活小鼠，收集骨髓细胞，检测其中CD45^＋、CD3^＋、CD19^＋和CD33^＋细胞的含量以及人特异的Cart—I和Alu基因的表达。结果生物反应器扩增前MNC为（1．2～2．8）×10^8个，扩增后为（3．7～12．6）×10^8个，扩增后的细胞数明显高于静态扩增培养者（P〈（0.01）。经生物反应器扩增后所形成的红系集落形成单位、粒一巨噬细胞集落形成单位数明显高于经静态扩增者（P〈0．05）。移植6周后，空白对照组小鼠均死亡，MNC组存活率为35％，静态扩增组存活率为30％，反应器扩增组存活率为62．9％，后者明显高于前二者（P〈0．05）。各组存活小鼠骨髓细胞中均检测到Alu基因和Cart—I基因的表达以及人源CD33^＋、CD45^＋、CD3^＋及CD19^＋细胞。结论利用生物反应器可大规模扩增人脐血造血干／祖细胞，所得细胞能植入小鼠体内，并能获得造血功能重建。