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固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定饲料中4种林可胺类药物

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动物营养学报 2023年第6期35卷 3978-3990页

作者：王凤芹开丽霞程远之汪以真浙江大学动物科学学院教育部动物分子营养学重点实验室农业农村部华东动物营养与饲料重点实验室浙江省饲料与动物营养重点实验室杭州310058

本研究旨在建立一种同时准确测定饲料中4种林可胺类药物(林可霉素、克林霉素、克林霉素磷酸酯和吡利霉素)的方法。饲料中林可胺类药物用甲醇-0.1 mol/L磷酸氢二钾(8∶2,体积比)缓冲溶液提取,提取液经混合型强阳离子交换固相萃取小柱净化... 详细信息

本研究旨在建立一种同时准确测定饲料中4种林可胺类药物(林可霉素、克林霉素、克林霉素磷酸酯和吡利霉素)的方法。饲料中林可胺类药物用甲醇-0.1 mol/L磷酸氢二钾(8∶2,体积比)缓冲溶液提取,提取液经混合型强阳离子交换固相萃取小柱净化,采用C18色谱柱分离,流动相为0.1%甲酸溶液和乙腈,梯度洗脱,以电喷雾离子源(ESI)正离子扫描方式,在多反应监测(MRM)模式下进行测定,外标法定量。结果表明:本研究建立的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱(SPE-UPLC-MS/MS)法对饲料中林可胺类药物检出限为10μg/kg,定量限为40μg/kg;4种林可胺类药物在1~200μg/L浓度范围内,线性关系良好,相关系数(R2)均大于0.99;在4个浓度水平(40μg/kg、400μg/kg、4 mg/kg和100 mg/kg)下进行添加试验,林可胺类药物的回收率为81.5%~107.6%,相对标准偏差(RSD)为1.4%~9.8%。由此可见,本研究建立的SPE-UPLC-MS/MS法灵敏、可靠,可应用于饲料中4种林可胺类药物的准确测定。

关键词：固相萃取超高效液相色谱-串联质谱法饲料林可胺类药物

固相萃取-反相高效液相色谱法测定蛋黄中的斑蝥黄

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动物营养学报 2021年第8期33卷 4675-4683页

作者：王凤芹刘鑫程远之郭冠群路则庆汪以真浙江大学饲料科学研究所农业农村部(华东)动物营养与饲料重点实验室浙江省饲料与动物营养重点实验室杭州310058

本试验旨在建立一种定量测定蛋黄中斑蝥黄的固相萃取-反相高效液相色谱法。蛋黄用乙腈在超声波辅助下提取,提取液经过Oasis PRiME HLB固相萃取柱净化,再由C 18色谱柱分离,流动相为乙腈-水(95∶5,体积比),流速为1.2 mL/min,等度洗脱,在紫... 详细信息

本试验旨在建立一种定量测定蛋黄中斑蝥黄的固相萃取-反相高效液相色谱法。蛋黄用乙腈在超声波辅助下提取,提取液经过Oasis PRiME HLB固相萃取柱净化,再由C 18色谱柱分离,流动相为乙腈-水(95∶5,体积比),流速为1.2 mL/min,等度洗脱,在紫外-可见吸收波长474 nm处检测,外标法定量。结果显示:蛋黄中斑蝥黄的检出限为0.05μg/g,定量限为0.1μg/g。斑蝥黄在0.1~10.0μg/mL的浓度范围内线性关系良好,相关系数(R^(2))为0.9999。在3个加标浓度(0.1、1.0和4.0μg/g)下,斑蝥黄的回收率为85.9%~98.6%,相对标准偏差(RSD)为1.7%~8.0%。应用上述方法测得市售新鲜鸡蛋蛋黄中斑蝥黄含量高达8.3μg/g。本试验建立的固相萃取-反相高效液相色谱法能够满足蛋黄中斑蝥黄及其异构体快速定量的需要。

关键词：固相萃取高效液相色谱斑蝥黄

不同类型酸化剂对断奶仔猪生长性能和免疫功能的影响

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动物营养学报 2021年第5期33卷 2575-2584页

作者：程远之周洪彬虞财华张佩发路则庆汪以真王腾浩浙江大学动物科学学院生物饲料安全与污染防控国家工程实验室农业部华东动物营养与饲料重点实验室浙江省饲料与动物营养重点实验室杭州310058 大连成三畜牧业有限公司大连116308 上海新农饲料股份有限公司上海201604 浙江青莲食品股份有限公司嘉兴314317

本试验旨在研究不同类型酸化剂对断奶仔猪生长性能、抗氧化功能和免疫功能的影响。试验选取体重[(7.14±0.30)kg]相近的30日龄断奶仔猪162头,随机分为3组,每组3个重复,每个重复18头。对照组饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,试验组在基础饲粮中... 详细信息

本试验旨在研究不同类型酸化剂对断奶仔猪生长性能、抗氧化功能和免疫功能的影响。试验选取体重[(7.14±0.30)kg]相近的30日龄断奶仔猪162头,随机分为3组,每组3个重复,每个重复18头。对照组饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加0.2%磷酸型酸化剂和0.2%乳酸型酸化剂。试验期21 d。结果表明:1)与对照组相比,磷酸型酸化剂组和乳酸型酸化剂组断奶仔猪平均日采食量分别提高了6.75%和11.69%(P>0.05),平均日增重分别提高了10.67%和13.07%(P>0.05),料重比分别降低了3.40%和1.36%(P>0.05)。2)与对照组相比,乳酸型酸化剂组断奶仔猪血清总超氧化物歧化酶活性显著提高(P<0.05),血清丙二醛含量显著降低(P<0.05)。3)与对照组相比,乳酸型酸化剂组断奶仔猪血清免疫球蛋白G和免疫球蛋白A含量显著提高(P<0.05),且血清免疫球蛋白G含量显著高于磷酸型酸化剂组(P<0.05);乳酸型酸化剂组断奶仔猪十二指肠白细胞介素-10和转化生长因子-βmRNA相对表达量显著提高(P<0.05),空肠肿瘤坏死因子-α和转化生长因子-βmRNA相对表达量的表达量显著高于对照组和磷酸型酸化剂组(P<0.05)。综上所述,饲粮添加0.2%磷酸型酸化剂和0.2%乳酸型酸化剂均能一定程度上增强断奶仔猪抗氧化功能和免疫功能,且具有提高仔猪生长性能的趋势,其中乳酸型酸化剂效果优于磷酸型酸化剂。

关键词：酸化剂生长性能抗氧化免疫断奶仔猪

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定富硒蛋白多糖中纳米单质硒含量

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动物营养学报 2018年第3期30卷 1155-1161页

作者：王凤芹程远之肖肖李笑笑宋德广路则庆汪以真浙江大学饲料科学研究所生物饲料安全与污染防控国家工程实验室农业部华东动物营养与饲料重点实验室杭州310058

本试验旨在建立高效、准确、快速测定富硒蛋白多糖中纳米单质硒含量的方法。将25 mg阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)Z0206产富硒蛋白多糖样品悬浮在3 mL蒸馏水中,在3 mgⅩⅣ型蛋白酶作用下超声处理30 min(37℃),将酶解液离心得到的沉... 详细信息

本试验旨在建立高效、准确、快速测定富硒蛋白多糖中纳米单质硒含量的方法。将25 mg阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)Z0206产富硒蛋白多糖样品悬浮在3 mL蒸馏水中,在3 mgⅩⅣ型蛋白酶作用下超声处理30 min(37℃),将酶解液离心得到的沉淀物(纳米单质硒)在常温下经双氧水-盐酸(H_2O_2-HCl)体系消解,所得溶液直接经高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)分析[以PRP X100阴离子色谱柱对样品中的亚硒根离子(SeO_2-3)进行分离,流动相组成为5 mmol/L柠檬酸水溶液(pH 4.5)],测得样品中纳米单质硒含量为2 439μg/g。以国家标准(GB/T 13883—2008)方法[样品以硝酸-高氯酸(HNO_3-HClO_4)体系消解处理,经氢化物发生-原子荧光(HG-AFS)分析]为对照,测得样品中纳米单质硒含量为2 450μg/g。2种方法的测定结果高度一致。与GB/T 13883—2008中描述的方法相比,采用本试验建立的氧化体系条件更温和、快速并且易于控制,适用于纳米单质硒的快速检测。

关键词：高效液相色谱电感耦合等离子体质谱富硒蛋白多糖纳米单质硒

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氧化还原一步法测定饲料中总硒含量

饲料研究 2021年第15期44卷 96-100页

作者：曹进平程远之刘鑫汪以真王凤芹浙江大学动物科学学院生物饲料安全与污染防控国家工程实验室农业农村部(华东)动物营养与饲料重点实验室浙江省饲料与动物营养重点实验室教育部动物分子营养重点实验室浙江杭州310058

试验旨在建立过氧化氢-盐酸氧化还原一步法消解饲料样品,利用高效液相质谱-电感耦合等离子体质谱联用仪(HPLC-ICP-MS)测定饲料中总硒含量的方法。饲料样品中加入过氧化氢和盐酸在水浴1 h,进行氧化还原一步消解,SeO_(3)^(2-)定容,采用HPL... 详细信息

试验旨在建立过氧化氢-盐酸氧化还原一步法消解饲料样品,利用高效液相质谱-电感耦合等离子体质谱联用仪(HPLC-ICP-MS)测定饲料中总硒含量的方法。饲料样品中加入过氧化氢和盐酸在水浴1 h,进行氧化还原一步消解,SeO_(3)^(2-)定容,采用HPLC-ICP-MS测定硒的含量。样品经C18色谱柱分离,磷酸二氢钾水溶液-七氟丁酸和甲醇体系等度洗脱,ICP-MS在KED模式分析^(78)Se,外标法定量测定样品中的总硒。结果表明:试验所建立的方法的线性方程中R^(2)大于0.9900,硒的检出限为0.17μg/g,定量限为0.57μg/g,且峰面积与保留时间的相对标准偏差均低于3%。采用该方法测得2批富硒多糖饲料样品中总硒的含量分别为1118.00、1402.06μg/g,富硒酵母中总硒的含量为941.13μg/g,预混合饲料中总硒的含量为0.95μg/g。除预混合饲料外,采用该方法测定不同饲料样品的相对标准偏差均小于10%。与传统测定总硒采用HNO3-HClO4混合酸体系消解样品,再用盐酸进一步还原的前处理过程相比,该方法具有操作简单、样品转移少、反应快速、回收率高、安全环保、适用性强等特点。

关键词：氧化还原一步法富硒饲料 HPLC-ICP-MS 总硒

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生物纳米单质硒研制及其功能研究

生物纳米单质硒研制及其功能研究

中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会

作者：宋德广程远之李笑笑路则庆王凤芹汪以真浙江大学饲料科学研究所生物饲料与污染防控国家工程实验室教育部动物分子营养学重点实验室农业部(华东)动物营养与饲料重点实验室

硒是人和动物健康生长所必需的微量元素,缺硒会导致机体免疫力降低、生殖障碍、神经系统障碍和氧化应激等。硒代蛋氨酸因其高活性、高安全性被认为是适宜的补硒形式,而近年来研究表明,纳米尺寸单质硒具有更高的生物活性和安全性。本研... 详细信息

硒是人和动物健康生长所必需的微量元素,缺硒会导致机体免疫力降低、生殖障碍、神经系统障碍和氧化应激等。硒代蛋氨酸因其高活性、高安全性被认为是适宜的补硒形式,而近年来研究表明,纳米尺寸单质硒具有更高的生物活性和安全性。本研究通过菌株WZ制备生物纳米单质硒(WZ-BNS),通过C57BL/6小鼠氧化应激模型和猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)氧化应激模型对比探讨WZ-BNS与化学合成纳米单质硒(Nano-Se)、硒代蛋氨酸(SeMet)的生物学功能差异。利用菌株WZ转化亚硒酸钠制备,并提纯获得WZ-BNS,通过透射电镜-能谱分析(TEM-EDX)、X射线光电子能谱分析(XPS)和纳米粒度分析表明WZ-BNS是均匀分散的球状颗粒,粒径均一,平均粒径为(144±1.14)nm,硒的价态为零价。在小鼠上的研究表明,WZ-BNS和SeMet可显著降低氧化应激小鼠血清二胺氧化酶(DAO)活性和D-乳酸(DLA)含量;缓解空肠绒毛形态损伤,紧密连接蛋白表达下降和上皮细胞凋亡;提高空肠Thioredoxin reductase(TXNRD)和Glutathione Peroxidase(GPx)活性,减少肠道活性氧(ROS)产生和脂质过氧化物(MDA)含量,且WZ-BNS效果优于SeMet,而Nano-Se对以上指标无显著影响。在肠道上皮细胞上的研究表明,WZ-BNS可显著缓解氧化应激导致的肠道上皮细胞TER值降低和通透性增强(Fitc-Dextran通透量),显著缓解肠道上皮细胞凋亡和紧密连接蛋白表达降低,减少活ROS和MDA的产生,且效果均极显著优于SeMet和Nano-Se。为阐明三者缓解氧化应激能力差异的原因,我们进一步研究了其对关键抗氧化通路Nrf2-ARE抗氧化链的影响差异,Western blot结果显示,WZ-BNS可显著提高Nrf2及其下游抗氧化酶Heme Oxygenase 1(HO-1)、NAD(P)H:quinoneoxidore ductase(NQO-1)、TXNRD-1、Superoxide Dismutase 1(SOD-1)、Thioredoxin(TRX)和GPx-1的蛋白表达,增强细胞整体抗氧化能力;进一步结合Western blot和Immunofluorescence分析发现,WZ-BNS可以促进Nrf2入核,激活Nrf2-ARE通路。而SeMet和Nano-Se仅具有提高TXNRD-1和GPx-1的趋势,对Nrf2-ARE抗氧化通路并无显著影响。以siRNA沉默Nrf2基因后,WZ-BNS缓解氧化应激导致的活性氧产生和细胞凋亡的作用显著降低。综上所述,WZ-BNS通过调控Nrf2-ARE抗氧化链,增强细胞和机体抵抗氧化应激能力,减少氧化应激导致的肠道上皮细胞凋亡、紧密连接蛋白表达降低,保护肠道屏障功能。

关键词：生物纳米单质硒氧化应激肠道屏障 Nrf2

来源： cnki会议评论

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构造煤变形能及在煤与瓦斯突出中的作用

煤炭学报 2024年第2期49卷 645-663页

作者：程远平王成浩煤矿瓦斯治理国家工程研究中心江苏徐州221116 中国矿业大学人工智能研究院江苏徐州221116 中国矿业大学安全工程学院江苏徐州221116

煤与瓦斯突出是一种以煤体变形能与瓦斯膨胀能共同驱动的煤岩动力灾害,尽管突出的综合作用假说已被广泛认可,相比于瓦斯膨胀能,煤体变形能在突出中的作用总被忽视。为了确定煤体变形能在突出中是否可以被忽略,对霍多特和郑哲敏的研究(... 详细信息

煤与瓦斯突出是一种以煤体变形能与瓦斯膨胀能共同驱动的煤岩动力灾害,尽管突出的综合作用假说已被广泛认可,相比于瓦斯膨胀能,煤体变形能在突出中的作用总被忽视。为了确定煤体变形能在突出中是否可以被忽略,对霍多特和郑哲敏的研究(突出能量领域的代表性成果)开展了系统回顾与讨论,认为霍多特提出的突出激发能量判据以煤体变形能为核心,而郑哲敏的数量级对比结果不能作为变形能可以被忽视的证据。大部分煤与瓦斯突出事故发生在构造煤层中,为揭示构造煤变形能在突出中的贡献,开展了煤体循环载荷实验与三轴破坏同步声发射监测实验,实验结果表明:与原生煤的线性、小变形特征不同,构造煤的加卸载曲线具有非线性、大变形的特征,构造煤的变形能与应力不再符合平方关系。基于土力学临界状态模型,构建了适用于构造煤非线性特征的变形能理论计算模型,该模型反映了煤体变形能与应力间的幂函数关系,确定了构造煤的幂指数主要为1.1~1.3,原生煤的幂指数主要为1.7~1.9,进一步表明构造煤的性质与土体更相似,而原生煤的性质更接近理想弹性体。尽管在相同应力水平下,构造煤的变形能更大,但构造煤在失稳后的对外释放能量很低,表现为损伤破碎时几乎不产生声发射信号。构造煤变形能的对外释放能量增加了煤体孔隙率,对内耗散能量为瓦斯快速解吸提供条件,2者综合控制了瓦斯膨胀能的释放。瓦斯膨胀能的研究对象应为参与突出做功的瓦斯,即突出煤体在短时间内的释放瓦斯,进一步的实验与数值分析结果表明,参与突出做功的瓦斯膨胀能与构造煤体变形能数量级相近,为10^(2)~10^(3)kJ/t。煤体变形能与瓦斯膨胀能的释放存在时序性与因果性,在突出孕育–激发阶段,煤体变形能的预先释放是瓦斯膨胀能聚集的必要条件。突出由煤体变形能与瓦斯膨胀能共同控制,煤体变形能与瓦斯膨胀能在突出中具有同等重要的地位。

关键词：煤与瓦斯突出构造煤煤体变形能瓦斯膨胀能释放机制

走出以邻为壑:破解边界合作治理困境的自主路径

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复旦学报（社会科学版） 2024年第3期66卷 190-200页

作者：季程远上海交通大学国际与公共事务学院上海200030

行政区划毗邻的地方政府容易陷入不合作的困境之中,出现各扫门前雪,甚至以邻为壑的现象。既有研究强调纵向干预是科层制下破解横向沟通难题的方案,本研究则以某毗邻区市的环境联合执法为例,分析了地方自主推进边界合作治理的路径。基于2... 详细信息

行政区划毗邻的地方政府容易陷入不合作的困境之中,出现各扫门前雪,甚至以邻为壑的现象。既有研究强调纵向干预是科层制下破解横向沟通难题的方案,本研究则以某毗邻区市的环境联合执法为例,分析了地方自主推进边界合作治理的路径。基于2019年至2022年的全国季度空气质量数据和回归合成控制法,利用反事实框架分析了联合执法的效果,并使用安慰剂检验排除其他偶然因素。实证结果发现,联合执法使得两地的空气质量平均提高了19%。继而,基于田野调查,从现代科层制的局限性出发,本研究讨论了通过毗邻党建搭建横向沟通平台,突破行政等级限制,最终探索形成一体化执法体系的路径。本研究认为:在自发秩序下,基于党建搭建横向沟通的法约尔桥,对科层制度进行补充,是实现边界合作治理的可行路径。

关键词：边界合作治理科层制法约尔桥联合执法回归合成控制法

高铁列控系统工程仿真测试平台建设方案研究及验证

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铁道标准设计 2024年第6期68卷 201-206,228页

作者：程远中国铁道科学研究院集团有限公司通信信号研究所北京100081

高速铁路列控系统安全等级高,设备组成繁多,功能结构和接口关系非常复杂,现场测试和验证的难度极大。利用仿真测试技术,能将完全依赖于现场的动态验证测试工作通过仿真测试实施完成,可以进一步提高测试覆盖度、降低对运输的影响。在对... 详细信息

高速铁路列控系统安全等级高,设备组成繁多,功能结构和接口关系非常复杂,现场测试和验证的难度极大。利用仿真测试技术,能将完全依赖于现场的动态验证测试工作通过仿真测试实施完成,可以进一步提高测试覆盖度、降低对运输的影响。在对项目建设必要性、建设目标、技术方案等进行研究的基础上,对地面设备、车载设备、仿真系统方案等进行具体研究。经比选,高铁列控系统工程仿真测试平台地面设备采用半实物、半仿真结构,利用云平台技术,具有更好的扩展性、经济性;车载设备采用完全真实设备,提高了测试的可信性和真实性。通过构建仿真测试平台并基于湖杭高铁仿真环境进行验证,研究结果表明,与现场测试相比,仿真测试完成了更多的场景、案例以及进路测试,数量分别增加了275%、336%及442%,可以进一步提升列控系统测试的质量、深度和广度。

关键词：高速铁路列控系统仿真测试平台建设方案云平台半实物半仿真