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“她阅读”视域下女性网络文学出版平台的深度融合发展——以晋江文学城为例

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新阅读 2024年第3期 62-64页

作者：尹章池石余竞楠武汉理工大学法学与人文社会学院

网络文学自20世纪90年代发展至今，逐渐衍生出了男频与女频发展方向。随着女性阅读群体的不断壮大，女性网络文学出版平台更成为研究网络文学的一大参照物。为了更好地剖析女性网络文学出版平台，从女性网络文学创作基地——晋江文学城... 详细信息

网络文学自20世纪90年代发展至今，逐渐衍生出了男频与女频发展方向。随着女性阅读群体的不断壮大，女性网络文学出版平台更成为研究网络文学的一大参照物。为了更好地剖析女性网络文学出版平台，从女性网络文学创作基地——晋江文学城着手，通过研究其平台的发展模式，分析平台签约作者、读者用户，以及其内容付费与营利模式，并从女性意识、质量把关、市场运作与全媒体融合发展的角度，分析晋江文学城转型升级的融合之路。

关键词：女性阅读网络文学晋江文学城

内蒙古地区牛乳腺炎致病性粪肠球菌表面蛋白esp基因的克隆、表达及抗原性分析

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中国病原生物学杂志 2023年第1期18卷 23-29页

作者：石竞楠锡林高娃吴金花布日额王金良陈金龙王赞嘉内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所山东省滨州畜牧兽医研究院

目的克隆、表达内蒙古地区奶牛乳腺炎临床分离粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的表面蛋白esp基因,对表达产物进行抗原性鉴定及生物信息学分析。方法以Genbank公布的序列号为CP045045.1粪肠球菌esp基因DNA为模板设计1对引物,对esp基... 详细信息

目的克隆、表达内蒙古地区奶牛乳腺炎临床分离粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的表面蛋白esp基因,对表达产物进行抗原性鉴定及生物信息学分析。方法以Genbank公布的序列号为CP045045.1粪肠球菌esp基因DNA为模板设计1对引物,对esp基因进行克隆、测序,构建重组表达载体pET-30a(+)-esp后进行原核表达,对表达蛋白进行Western blot鉴定。利用DNA Star生物信息软件对表达蛋白的空间构象,理化特性,跨膜区,抗原性等进行预测分析。结果测序显示,克隆的esp基因序列长度为776 bp,与NCBI公布的esp序列(CP045045.1)相似度为100%。经PCR及酶切鉴定,重组表达质粒pET30a(+)-esp构建正确。将其转化至原核表达工程菌BL21后经IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示该蛋白的相对分子质量约28×10^(3)。Western blot分析显示,纯化的重组蛋白能够被相应小鼠抗血清识别。DNAStar生物信息学软件分析显示,该蛋白相对分子质量为37×10^(3),等电点为4.33,带负电荷残基总数54个,带正电荷残基总数30个,分子式为C_(1190)H_(1899)N_(309)O_(438),α螺旋占6.98%,β折叠占1.94%,无规则折叠占68.6%;其二级结构以无规则卷曲为主,表面存在较多抗原表位;6-25位氨基酸之间存在跨膜区域,推测该蛋白具有跨膜特性。抗原性分析显示,esp基因编码蛋白在14-55、59-170、186-197、206-255位氨基酸残基区段存在良好的抗原可及性,以59-170位区间抗原可及性较为集中。结论内蒙古地区分离的牛乳腺炎致病性粪肠球菌esp基因编码蛋白具有良好的抗原性,可作为该菌感染检测靶标候选抗原。

关键词：奶牛乳腺炎粪肠球菌 esp基因抗原理化特性分析

基于P32蛋白的山羊痘病毒抗体荧光微球检测方法的建立

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畜牧与兽医 2024年第4期56卷 89-94页

作者：孟卫芹王金良吴信明唐娜李通石竞楠董帅沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028000 河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056000

为建立一种山羊痘病毒(GTPV)抗体快速检测方法,试验将携带GTPV结构蛋白P32基因的重组质粒pET28a-P32转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后获得了重组蛋白,纯化后经Western blot鉴定表明该蛋白具有良好的特异性和反应原性... 详细信息

为建立一种山羊痘病毒(GTPV)抗体快速检测方法,试验将携带GTPV结构蛋白P32基因的重组质粒pET28a-P32转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后获得了重组蛋白,纯化后经Western blot鉴定表明该蛋白具有良好的特异性和反应原性。以荧光微球为标记材料对P32蛋白进行标记,通过优化反应条件制备了快速检测GTPV抗体的荧光微球免疫层析试纸条,并对其性能进行评价。结果:该试纸条与山羊副流感病毒3型(CPIV3)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊口疮病毒(ORFV)的阳性血清均无交叉反应;阳性血清稀释至800倍仍能检出阳性,敏感性较高;批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,稳定性较好;与ELISA检测方法对比的总符合率为92.5%。综上,本试验建立的荧光微球试纸条可用于GTPV抗体的快速检测和流行病学调查。

关键词：山羊痘病毒 P32蛋白荧光微球抗体

基于N蛋白单克隆抗体的小反刍兽疫病毒抗体检测胶体金试纸条的研制

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生物工程学报 2023年第12期39卷 4915-4926页

作者：董帅孟卫芹莫玲陈金龙石竞楠杨哲李通徐倩倩沈志强刘建钗王金良河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056038 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028000 青岛农业大学动物医学院山东青岛266109

本研究旨在建立一种简便、快捷、可直观检测小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)抗体的检测方法。将pET-32a-N重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,以纯化的PPRVN蛋白免... 详细信息

本研究旨在建立一种简便、快捷、可直观检测小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)抗体的检测方法。将pET-32a-N重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,以纯化的PPRVN蛋白免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)筛选及亚克隆,获得了抗PPRV N蛋白的单克隆抗体。将PPRV N蛋白分别作为金标抗原及检测线(T线)包被抗原、单克隆抗体作为质控线(C线)包被抗体,组装成检测PPRVN蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条。结果显示:成功获得1株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为1F1;间接ELISA检测1F1腹水效价为1:128000;亚类鉴定结果为IgG1,轻链为kappa链。Westernblotting结果显示,1F1能与PPRV N蛋白特异性结合;间接免疫荧光(indirect immunofluorescent assay,IFA)结果显示,制备的单克隆抗体能够识别PPRV;建立的试纸条能够特异性地检测PPRV抗体,以不同批次的试纸条重复检测,结果无差异。根据122份临床血清的检测结果,PPRV抗体试纸条与ELISA试验的符合率为97.6%。本研究建立的试纸条检测方法具有良好的特异性、重复性和敏感性,可用于PPRV抗体的快速检测。

关键词：小反刍兽疫病毒 N蛋白单克隆抗体胶体金抗体检测

内蒙古地区牛乳腺炎粪肠球菌临床分离株全基因组测序与生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2021年第12期16卷 1409-1413页

作者：邢家辉锡林高娃吴金花王赞嘉代牡兰布日额石竞楠内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古通辽028043 内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所内蒙古通辽028043

目的对内蒙古地区奶牛乳腺炎临床分离粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的基因组进行测序,并预测和分析其生物信息学特征。方法本实验以“内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心”分离的粪肠球菌临床分离菌株FC(BME1708)为对象,... 详细信息

目的对内蒙古地区奶牛乳腺炎临床分离粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的基因组进行测序,并预测和分析其生物信息学特征。方法本实验以“内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心”分离的粪肠球菌临床分离菌株FC(BME1708)为对象,利用PacBio RS II平台进行全基因组测序,分别使用RNAmmer和tRNAscan-SE软件对菌株基因组中的rRNA和tRNA进行预测,并对测序基因序列进行数据分析、基因注释、耐药性及毒力因子分析。结果测序组装后结果显示,该菌株基因组大小为2934454 bp,其中包含5个双股环状质粒DNA、61个tRNA、12个rRNA,蛋白总数为3151个。耐药性及毒力因子基因预测结果显示,该菌株对庆大霉素、链霉素、β内酰胺、青霉素、四环素、万古霉素等27类抗生素耐药,存在cyl、esp、ace、gel、efaA等82个相关毒力因子。结论已将本次分离的粪肠球菌基因组测序结果登录于GenBank(登录号:CP028835.1),该实验结果将为后续致病及免疫调控机理研究,以及防控策略的制定提供了可靠的生物信息数据。

关键词：牛乳腺炎粪肠球菌全基因组测序

基于N蛋白小反刍兽疫病毒单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立

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中国兽医学报 2024年第5期44卷 935-939页

作者：孟卫芹董帅陈金龙唐娜石竞楠郭璐宋晶晶王金良山东省滨州畜牧兽医研究院河北工程大学生命科学与食品工程学院石河子大学动物科技学院内蒙古民族大学生命科学与食品学院

为建立一种小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体的快速检测方法,本研究将pET-32a-N重组质粒转化至*** BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达、纯化获得重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,制备了抗PPRV-N蛋白的单克隆抗体并进行HRP标记,通过优化反应条件... 详细信息

为建立一种小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体的快速检测方法,本研究将pET-32a-N重组质粒转化至*** BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达、纯化获得重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,制备了抗PPRV-N蛋白的单克隆抗体并进行HRP标记,通过优化反应条件建立了PPRV阻断ELISA抗体检测方法。经评价该方法与PIV、GTPV、ORFV的阳性血清均无交叉反应;最低能检出1∶160稀释的阳性血清;批内和批间变异系数(Cv)均小于10%;通过对180份临床血清样品进行检测,该方法与竞争ELISA试剂盒的符合率为96%。表明建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性、敏感性与可重复性,可用于PPRV抗体的检测,为PPRV疫苗的免疫效果评估及疫病防控提供了技术支持。

关键词：小反刍兽疫 N蛋白单克隆抗体阻断ELISA

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内蒙古地区传统发酵乳中乳酸菌的分离与鉴定

中国乳品工业 2023年第5期51卷 31-35页

作者：代牡兰锡林高娃吴金花布日额邢家辉王赞嘉石竞楠内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古通辽028043 内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所内蒙古通辽028043

对内蒙古地区传统发酵乳中乳酸菌进行分离并鉴定。以蒙古族传统发酵乳为材料,采用传统的细菌纯培养分离方法分离乳酸菌株,通过形态学特征及生理生化试验初步确定乳酸菌的基础上,进一步利用细菌16S r DNA基因序列分析和系统发育进化树构... 详细信息

对内蒙古地区传统发酵乳中乳酸菌进行分离并鉴定。以蒙古族传统发酵乳为材料,采用传统的细菌纯培养分离方法分离乳酸菌株,通过形态学特征及生理生化试验初步确定乳酸菌的基础上,进一步利用细菌16S r DNA基因序列分析和系统发育进化树构建,对其种属进行分析鉴定。分析鉴定结果显示,分离得到的29株乳酸菌共鉴定为2个属,6个种。2个属分别为乳酸杆菌属(Lactobacillus)和肠球菌属(Entercoccus),6个种分别为短乳杆菌(Levilaccillus brevis,4株)、植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum,8株)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis,9株)、鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum,3株)、蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii,1株)、耐久肠球菌(Enterococcus durans,4株)。该研究采集的发酵乳样品中乳酸菌资源丰富,代表着内蒙古蒙古族传统发酵乳制品中优势性乳酸菌菌种,为优良发酵剂的研发奠定了微生物资源基础。

关键词：传统发酵乳乳酸菌分离鉴定 16S r DNA基因序列分析

牛乳腺炎粪肠球菌逃逸巨噬细胞的分子机制研究

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内蒙古民族大学学报（自然科学版） 2024年第6期39卷 90-96页

作者：王赞嘉锡林高娃吴金花布日额石竞楠代牡兰内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古通辽028043 内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所内蒙古通辽028043

为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cylA基因对牛单核巨噬细胞(BMC-7)吞噬功能和免疫调节的分子机制,利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株(BME1708)及cylA基因缺失突变株(BME1708△cylA)对牛巨噬细胞进行侵染,利用MTT检测法检测细胞... 详细信息

为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cylA基因对牛单核巨噬细胞(BMC-7)吞噬功能和免疫调节的分子机制,利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株(BME1708)及cylA基因缺失突变株(BME1708△cylA)对牛巨噬细胞进行侵染,利用MTT检测法检测细胞活性;在明确细胞活性不受影响的条件下,提取被侵染的BMC-7总mRNA,利用RT-qPCR检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α以及NOS2的转录水平差异,采用ELISA法检测相应表达水平;利用Western blot检测牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对BMC-7的p38 MAPK信号通路磷酸化水平的影响;利用p38 MAPK信号通路抑制剂(PD 169316)孵育BMC-7,ELISA法检测相应细胞因子表达水平,以明确cylA基因调控该信号通路的分子机制。结果显示:与BME1708组相比,BME1708△cylA组在IL-10和TNF-α转录水平下调,IL-4、IL-8、IL-12以及NOS2转录水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与BME1708组相比,BME1708△cylA组IL-10表达水平下调,IL-4、IL-8、IL-12表达水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);TNF-α的表达水平降低,但是差异不显著;对p38 MAPK磷酸化检测结果显示,粪肠球菌cylA基因可以激活p38 MAPK信号通路并使其磷酸化;在PD 169316孵育后,与未添加抑制剂组相比,添加抑制剂组的IL-10、TNF-α的表达水平下调,IL-4、IL-8、IL-12的表达水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。上述结果表明,p38 MAPK信号通路为粪肠球菌β溶血素cylA基因发挥免疫调节机制的重要通路,该结论为奶牛乳腺炎的治疗及防控提供新的靶位,可通过其毒力的钝化以及对p38 MAPK信号通路进行识别及信号通路封闭,对粪肠球菌感染进行有效防控。

关键词：牛乳腺炎粪肠球菌溶血素cylA基因细胞因子 p38 MAPK

高等职业教育协同产业经济发展助力成渝双城经济圈建设

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现代职业教育 2025年第1期 41-44页

作者：葛竞石应洪重庆机电职业技术大学

随着成渝双城经济圈建设上升为国家战略，成渝双城一体化协同发展步伐进一步加快。高等职业教育协同产业经济发展是区域协同发展的一项重要内容，也是推动区域经济发展的关键因素。以高等职业教育协同产业经济发展助力成渝双城经济圈建... 详细信息

随着成渝双城经济圈建设上升为国家战略，成渝双城一体化协同发展步伐进一步加快。高等职业教育协同产业经济发展是区域协同发展的一项重要内容，也是推动区域经济发展的关键因素。以高等职业教育协同产业经济发展助力成渝双城经济圈建设为题，深入探讨了高等职业教育与产业经济协同发展对成渝双城经济圈建设的推动作用。通过分析高等职业教育在人才培养、科技创新和社会服务等方面的优势，结合成渝地区产业经济的特点和需求，提出了高等职业教育与产业经济协同发展的策略和建议。研究认为，高等职业教育应与产业经济发展紧密结合，加强产教融合、校企合作，提高人才培养质量，促进科技成果转化，为成渝双城经济圈建设提供强有力的智力支持。

关键词：成渝双城经济圈高等职业教育产业经济区域协同发展专业调整