基于N蛋白小反刍兽疫病毒单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立

作     者：孟卫芹 董帅 陈金龙 唐娜 石竞楠 郭璐 宋晶晶 王金良 MENG Weiqin;DONG Shuai;CHEN Jinlong;TANG Na;SHI Jingnan;GUO Lu;SONG Jingjing;WANG Jinliang

作者机构：山东省滨州畜牧兽医研究院 河北工程大学生命科学与食品工程学院 石河子大学动物科技学院 内蒙古民族大学生命科学与食品学院 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2024年第44卷第5期

页      面：935-939页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：山东省羊产业技术体系岗位专家资助项目(SDAIT-10-06) 

主　　题：小反刍兽疫 N蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA 

摘      要：为建立一种小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体的快速检测方法,本研究将pET-32a-N重组质粒转化至*** BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达、纯化获得重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,制备了抗PPRV-N蛋白的单克隆抗体并进行HRP标记,通过优化反应条件建立了PPRV阻断ELISA抗体检测方法。经评价该方法与PIV、GTPV、ORFV的阳性血清均无交叉反应;最低能检出1∶160稀释的阳性血清;批内和批间变异系数(Cv)均小于10%;通过对180份临床血清样品进行检测,该方法与竞争ELISA试剂盒的符合率为96%。表明建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性、敏感性与可重复性,可用于PPRV抗体的检测,为PPRV疫苗的免疫效果评估及疫病防控提供了技术支持。